【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，尤其涉及一種非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂及其制備方法與應用。
技術介紹
1、神經節苷脂(ganglioside，gls)是一類具有重要生物學功能的鞘糖脂，它們在細胞信號傳導、細胞識別和神經發育等過程中起著關鍵作用；gls可被血小板識別，分泌促炎因子和神經遞質，從而調節神經元和免疫細胞的功能。
2、gls結構復雜，由三個主要組分構成：鞘氨醇、長鏈脂肪酸以及寡糖鏈，鞘氨醇的堿基通過糖苷鍵與神經酰胺相連。研究人員發現gls在神經節中含量較高，目前已在脊椎動物中鑒定出180余種不同結構的gls。此外，在海參綱、海星綱和海膽綱等棘皮動物中也發現了神經節苷脂，其結構與脊椎動物中的gls有明顯差異：(1)脊椎動物中gls與神經酰胺相連的糖基為半乳糖，棘皮動物中大多數gls與神經酰胺相連的糖基則為葡萄糖；(2)棘皮動物的神經節苷脂含有包括n-乙酰神經氨酸、n-羥乙酰神經氨酸和8-硫酸酯基-n-羥乙酰神經氨酸在內的多種唾液酸，而脊椎動物中的gsl通常僅含有neu5ac一種唾液酸；(3)脊椎動物中，gls的唾液酸通過α2-3鍵與半乳糖相連，而棘皮動物則通過α2-6鍵將gls的唾液酸與葡萄糖連接在一起。
3、由于gls在神經系統中含量較高，脊椎動物的腦組織成為了獲取gls的首選生物材料，但隨著對gls的研究深入，研究人員發現海膽、海參和海星等棘皮動物也含有gls，并通過體外實驗證明：棘皮動物中的gls同樣具有較好的促神經突起生長活性，且棘皮動物體內的gls對神經系統的發育和神經退行性疾病的干預效果優于脊
4、電噴霧-四極桿-飛行時間質譜(esi-q-tof-ms)是一種先進的質譜技術，該設備集成了esi的高效離子化、四極桿的質量篩選和飛行時間質譜的高分辨率功能，已成為分析復雜混合物和鑒定未知化合物的強大工具。盡管目前已有通過色譜質譜聯用技術對神經節苷脂進行結構鑒定的報道，但針對特定類別的gls，仍缺乏詳細的質譜碎裂規律。
5、因此，有必要提供一種新的從棘皮動物中分離出的gls，并利用波譜學技術對分離出的gls進行詳細的結構鑒定，這不僅為棘皮動物gls的結構分析提供了科學的理論基礎，而且為未來探索棘皮動物gls的生物活性研究奠定了重要的參考價值。此外，通過研究gls的質譜碎裂規律，可以為開發新的分析方法和策略提供指導，從而推動gls在生物醫藥領域的應用，這對于理解神經系統疾病的發病機制、開發新的治療藥物以及探索gls的其他生物學功能都具有重要意義。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂及其制備方法與應用，以期為開發新型的gls資源奠定基礎，并實現刺參性腺的高值化綜合利用。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂，所述神經節苷脂的結構式為gal-3galnac-4(neuacα2-3)galβ1-4glc-2cer。
4、本專利技術提供了一種所述非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂的制備方法，利用氯仿-甲醇抽濾法提取刺參性腺中的總脂，再利用硅膠柱層析法對提取得到的總脂進行分離，得到粗神經節苷脂，將粗神經節苷脂純化后，得到非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂。
5、優選的，所述氯仿和甲醇的混合質量比為1.6～2.4：0.8～1.2。
6、優選的，所述刺參性腺為刺參性腺凍干粉，所述氯仿-甲醇的用量為刺參性腺凍干粉體積的8～12倍。
7、優選的，硅膠柱層析時首先利用丙酮溶液洗脫糖脂及色素，再用甲醇溶液洗脫磷脂。
8、優選的，所述純化的方法為弱陰離子交換層析和凝膠排阻層析法。
9、本專利技術還提供了一種包含所述非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂或按照所述方法制備得到的非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂的制劑。
10、本專利技術進一步提供了一種所述的非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂或按照所述方法制備得到的非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂或所述的制劑在制備促進神經再生或營養腦細胞的藥物中的應用。
11、本專利技術利用氯仿-甲醇抽濾和硅膠柱層析法對粗神經節苷脂進行了提取分離，得率為6.52％，再利用弱陰離子交換層析和凝膠排阻層析分離技術純化粗神經節苷脂，得率為24mg/50g。相比于以豬腦為原料分離神經節苷脂的得率0.502mg/50g，本專利技術得率較高，約為豬腦原料的47倍，證明了刺參性腺中神經節苷脂含量相對較高，有望代替豬腦成為神經節苷脂的主要來源物質。
12、本專利技術還通過m/z＝205和m/z＝367等離子碎片峰推斷出制備得到的非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂sj-2的糖鏈部分中分別含有galnac、galnac+gal、cer·h2o和glc+cer·h2o；再通過hplc分析可知sj-2含有半乳糖和葡萄糖；sj-2中含有的脂肪酸組成以c16:1和c18:1為主，含量分別為16.7％和70.1％；sj-2中的長鏈堿以d18:0和d18:1為主，其含量分別為47.52％和31.26％；結合甲基化分析結果和上述實驗結果可推斷出刺參性腺中sj-2為非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂，其結構式為gal-3galnac-4(neuacα2-3)galβ1-4glc-2cer。
13、本專利技術制備的非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂sj-2具有良好的活性，可用于制備促進神經再生或營養腦細胞的藥物，具有良好的應用前景。
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1.一種非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂，其特征在于，所述神經節苷脂的結構式為Gal-3GalNAc-4(NeuAcα2-3)Galβ1-4Glc-2Cer。
2.一種權利要求1所述非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂的制備方法，其特征在于，利用氯仿-甲醇抽濾法提取刺參性腺中的總脂，再利用硅膠柱層析法對提取得到的總脂進行分離，得到粗神經節苷脂，將粗神經節苷脂純化后，得到非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯仿和甲醇的混合質量比為1.6～2.4：0.8～1.2。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述刺參性腺為刺參性腺凍干粉，所述氯仿-甲醇的用量為刺參性腺凍干粉體積的8～12倍。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，硅膠柱層析時首先利用丙酮溶液洗脫糖脂及色素，再用甲醇溶液洗脫磷脂。
6.如權利要求2～5任一項所述的方法，其特征在于，所述純化的方法為弱陰離子交換層析和凝膠排阻層析法。
7.一種包含權利要求1所述非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂或按照權利要求2～6任一項所述方法制備
8.一種權利要求1所述的非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂或按照權利要求2～6任一項所述方法制備得到的非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂或權利要求7所述的制劑在制備促進神經再生或營養腦細胞的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂，其特征在于，所述神經節苷脂的結構式為gal-3galnac-4(neuacα2-3)galβ1-4glc-2cer。
2.一種權利要求1所述非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂的制備方法，其特征在于，利用氯仿-甲醇抽濾法提取刺參性腺中的總脂，再利用硅膠柱層析法對提取得到的總脂進行分離，得到粗神經節苷脂，將粗神經節苷脂純化后，得到非硫酸酯化單唾液酸神經節苷脂。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯仿和甲醇的混合質量比為1.6～2.4：0.8～1.2。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述刺參性腺為刺參性腺凍干粉，所述氯仿-甲醇的用量為...
【專利技術屬性】
技術研發人員：盧航，趙慧，田元勇，魯雪峰，王天雨，
申請(專利權)人：大連海洋大學，
類型：發明
國別省市：
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