【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及蘋果育種，特別是涉及一種快速鑒定柱型蘋果的切片分析方法。
技術介紹
1、樹型結構是影響整形修剪，果園管理，果品產量的重要農藝性狀，矮化密植栽培是中國蘋果現代化生產的發展趨勢，推廣適于輕簡化和機械化管理的樹型將滿足未來蘋果產業發展需求。柱型蘋果(colmnar?apple)來源于普通型蘋果的一個突變體，具有樹體緊湊，節間短，腋芽萌發形成大量短枝，且光合效率高的特點，這種樹型無需拉枝，修剪量極輕，適于機械化規范管理，是蘋果輕簡化栽培品種選育的重要種質資源(tobutt，1985；zhang&dai，2011；petersen&krost，2013；劉偉等，2016；梁美霞等，2017)。柱型蘋果品種的推廣應用將會極大節約勞動力等生產成本，助力蘋果省力化栽培。所以，如何準確地鑒別、篩選柱型蘋果品種，是目前研究的重點。
2、蘋果柱型性狀是由顯性單基因co控制的質量性狀(趙玉軍等，1998；高華等，2004；tobutt，1994)。mdcol是調控蘋果柱型性狀形成的關鍵候選基因(wolters?et?al.，2013；okada?et?al.，2016；petersen?et?al.，2015；okada?et?al.，2020)。目前已有根據蘋果co基因開發的鑒定柱型蘋果的分子標記，但是分子標記鑒定法所需儀器和試劑較繁瑣，耗時較長，且操作者需具有一定分子生物學基礎，不適用于田間快速地鑒別柱型蘋果材料。因此，亟需基于柱型蘋果的形態特點，開發一種快速鑒別柱型蘋果材料的簡易方法，助力柱型蘋果材料的選
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種快速鑒定柱型蘋果的切片分析方法，以解決上述現有技術存在的問題，本專利技術的切片分析方法通過計算蘋果莖部組織的木質部維管細胞距表皮距離和橫切半徑的比值，可以快速高效，低成本且準確地鑒定柱型蘋果。
2、為實現上述目的，本專利技術提供了如下方案：
3、本專利技術提供了一種鑒定柱型蘋果的方法，其特征在于，包括以下步驟：
4、于待測蘋果的莖部組織取樣，切片，得組織薄片；
5、將所述組織薄片染色，得染色切片；
6、觀察所述染色切片，確定組織中心，測量木質部維管細胞距表皮的距離，記為l，測量橫切半徑，記為r，計算l和r的比值；
7、在同一所述染色切片上，測量不同位置的木質部維管細胞的l和r，計算所述l和r的比值的平均值，記為l/r，鑒定所述待測蘋果是否為柱型蘋果。
8、優選的是，若所述蘋果染色切片的l/r大于0.40，則鑒定所述待測蘋果為柱型蘋果；
9、若所述蘋果染色切片的l/r不大于0.40，則鑒定所述待測蘋果為非柱型蘋果。
10、優選的是，所述取樣包括：從上往下數，以所述待測蘋果正常生長的枝條第一片長度大于0.5cm的葉片記為第1片葉，取位于第5和第6片葉中間的莖部組織。
11、優選的是，所述切片為橫切，選擇厚度為1mm的薄片，即得所述組織薄片。
12、優選的是，所述染色為間苯三酚染色，包括：
13、于所述組織薄片上滴加間苯三酚溶液至完全覆蓋所述組織薄片，染色2min，吸干所述組織薄片上的液體，于所述組織薄片中心滴加一滴濃鹽酸，反應1min。
14、優選的是，每10ml所述間苯三酚溶液包括0.1g間苯三酚、8ml?95％無水乙醇和2ml濃鹽酸。
15、優選的是，所述確定組織中心包括：通過所述染色切片的兩條直徑，確定所述染色切片的組織中心。
16、優選的是，所述測量木質部維管細胞距表皮的距離包括：選取染色明顯的木質部維管細胞，使用線段將所述木質部維管細胞與所述組織中心連接，并延長至表皮，測量線段自所述木質部維管細胞到所述表皮的部分的長度。
17、優選的是，所述測量橫切半徑包括：選取染色明顯的木質部維管細胞，使用線段將所述木質部維管細胞與所述組織中心連接，并延長至表皮，測量線段自所述組織中心到所述表皮的部分的長度。
18、優選的是，所述不同位置為3-4處。
19、本專利技術公開了以下技術效果：
20、本專利技術提供了利用柱型蘋果莖部結構特征，通過徒手切片配合間苯三酚染色，分析木質部維管細胞位置和進而快速鑒定柱型蘋果的新方法。本專利技術首次提出利用蘋果莖部組織切片的木質部維管細胞距表皮的距離l與橫切半徑r的比值(l/r)的大小鑒定柱型蘋果，并以取自20份蘋果種質的89份材料為試材實驗上述切片染色分析l/r的方法，并通過分子標記鑒定法驗證了該方法的準確性。實驗結果表明，本專利技術提供的切片染色分析l/r方法的鑒定準確度為98.17％，為田間快速鑒別柱型蘋果材料和柱型蘋果選育、推廣提供了可行、有效的工具，鑒定方法成本低，快速高效，且錯誤率低，將大大提高生產效率。
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1.一種鑒定柱型蘋果的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，若所述蘋果染色切片的L/R大于0.40，則鑒定所述待測蘋果為柱型蘋果；
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述取樣包括：從上往下數，以所述待測蘋果正常生長的枝條第一片長度大于0.5cm的葉片記為第1片葉，取位于第5和第6片葉中間的莖部組織。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述切片為橫切，選擇厚度為1mm的薄片，即得所述組織薄片。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述染色為間苯三酚染色，包括：
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，每10mL所述間苯三酚溶液包括0.1g間苯三酚、8mL?95％無水乙醇和2mL濃鹽酸。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述確定組織中心包括：通過所述染色切片的兩條直徑，確定所述染色切片的組織中心。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測量木質部維管細胞距表皮的距離包括：選取染色明顯的木質部維管細胞，使用線段將所述木質部維管細胞與所述組
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測量橫切半徑包括：選取染色明顯的木質部維管細胞，使用線段將所述木質部維管細胞與所述組織中心連接，并延長至表皮，測量線段自所述組織中心到所述表皮的部分的長度。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述不同位置為3-4處。
...【技術特征摘要】
1.一種鑒定柱型蘋果的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，若所述蘋果染色切片的l/r大于0.40，則鑒定所述待測蘋果為柱型蘋果；
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述取樣包括：從上往下數，以所述待測蘋果正常生長的枝條第一片長度大于0.5cm的葉片記為第1片葉，取位于第5和第6片葉中間的莖部組織。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述切片為橫切，選擇厚度為1mm的薄片，即得所述組織薄片。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述染色為間苯三酚染色，包括：
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，每10ml所述間苯三酚溶液包括0.1g間苯三酚、8ml?95％無水乙...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張玉剛，韓婷婷，李志，華俊凱，劉培培，吳海英，郭紹霞，姜生輝，侯鴻敏，徐曉召，賈東杰，屈海泳，
申請(專利權)人：青島農業大學，
類型：發明
國別省市：
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