【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于構建彩色馬蹄蓮再生體系的領域，具體涉及一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的培養基組合和方法。
技術介紹
1、目前，彩色馬蹄蓮種球產業化生產的方式為組培快繁。常用的方法是以帶芽塊莖為外植體，消毒、滅菌后，誘導產生不定芽，再經過增殖后，壯芽、壯苗和生根培養后，獲得試管苗。隨著黃花馬蹄蓮基因組測序的完成，對彩色馬蹄蓮基因功能的驗證亟需進行。建立基于愈傷組織的再生體系，是開展這一研究的前提。
2、zl201910992841.8提供了一種以彩色馬蹄蓮仔球為外植體，誘導產生愈傷組織，建立再生體系的方法。但存在誘導周期長、誘導率不高等問題。
3、尋找一種誘導率高、誘導周期短的基于愈傷組織的彩色馬蹄蓮再生體系的建立方法一直是本領域專家的研究方向之一。
4、特此提出本專利技術。
技術實現思路
1、針對現有技術存在的不足及缺陷，本專利技術目的之一在于提供一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的培養基組合。該培養基組合是基于愈傷組織的再生體系而提出的，本專利技術提供的培養基組合配合相對應的外植體可以縮短誘導愈傷組織周期，提高愈傷誘導效率。
2、本專利技術目的之二在于提供一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的方法，該方法以生長到特定尺寸的彩色馬蹄蓮的無芽塊莖為外植體，誘導產生愈傷組織，經過增殖培養、分化，建立其再生體系，為彩色馬蹄蓮遺傳轉化體系的建立及種苗的規模化生產提供技術支撐，特別是建立彩色馬蹄蓮的再生體系，為農桿菌介導的遺傳轉化體系的建立提供
3、為了實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
4、本專利技術第一方面提供一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的培養基組合，所述培養基組合包括：
5、愈傷組織誘導培養基：以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba?1.0-2.0mg/l，naa?0.5-1.0mg/l；或者，以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba?0.5mg/l，naa0.8mg/l；
6、愈傷組織增殖培養基：以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba?3.0-4.0mg/l；
7、分化培養基：以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba1.0-2.0mg/l。
8、進一步地，所述培養基組合還包括：
9、壯芽培養基：以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：蔗糖40-60g/l，瓊脂6.5-7.0g/l，naa?0.3-0.5mg/l；
10、進一步地，所述培養基組合還包括：
11、生根培養基：以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：蔗糖40-60g/l，瓊脂6.5-7.0g/l，iba?1.0-2.0mg/l。
12、優選地，所述愈傷組織誘導培養基中6-ba和naa的濃度如下：6-ba?1.0-2.0mg/l，naa?0.8mg/l。
13、進一步地，，所述愈傷組織誘導培養基、所述愈傷組織增殖培養基、所述愈傷組織分化培養基、壯芽培養基、生根培養基的ph均為5.75-5.85。
14、本專利技術第二方面提供一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的方法，所述方法包括如下步驟：
15、s1外植體的選取和處理：選取已經完成瓶內結球的無菌彩色馬蹄蓮苗塊莖為外植體，其中塊莖直徑在0.8～1.2cm范圍內；先將所述塊莖上的葉片和芽眼切除，然后再切成小塊外植體用于愈傷組織培養；
16、s2愈傷組織的誘導培養：將所述小塊外植體接種到愈傷組織誘導培養基上進行誘導培養，其中所述愈傷組織誘導培養基：以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba?1.0-2.0mg/l，naa0.5-1.0mg/l；或者，以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba0.5mg/l，naa?0.8mg/l；
17、s3愈傷組織的增殖培養：將經步驟s2誘導培養的具有愈傷組織的小塊外植體轉接到愈傷組織增殖培養基上進行增殖培養，其中所述愈傷組織增殖培養基以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba?3.0-4.0mg/l；
18、s4愈傷組織的分化培養：將步驟s3得到的愈傷組織團塊轉接到分化培養基上進行芽分化培養，得到叢生芽；所述分化培養基以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：瓊脂6.5-7.0g/l，蔗糖30g/l，6-ba?1.0-2.0mg/l；
19、s5壯芽培養：將所述叢生芽接種到壯芽培養基中進行壯芽培養；
20、s6生根培養：將壯芽培養后得到的無根苗進行生根培養。
21、進一步地，所述小塊外植體的大小為：長寬0.3-0.4cm、厚度為0.1-0.3cm；
22、和/或，所述誘導培養的條件為：黑暗培養，黑暗培養的天數為30-40d；
23、和/或，所述增殖培養的條件為：黑暗培養，黑暗培養的天數為35-40d；
24、和/或，經過所述增殖培養后得到直徑為1.0-1.5cm的愈傷組織團塊；
25、和/或，所述芽分化培養的條件為：光暗交替培養，其中光照強度為800-1200lx，每天光照時間15-17h，培養溫度25±1℃；
26、和/或，所述芽分化培養的時間為30-40d；
27、和/或，所述彩色馬蹄蓮的品種為黑洞或京彩陽光。
28、進一步地，所述壯芽培養基是以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：蔗糖40-60g/l，瓊脂6.5-7.0g/l，naa0.3-0.5mg/l；
29、和/或，所述生根培養基以ms為基礎培養基，還含有如下濃度的物質：蔗糖40-60g/l，瓊脂6.5-7.0g/l，iba?1.0-2.0mg/l。
30、進一步地，所述無根苗的高度為5.0-7.0cm、塊莖直徑為0.5-0.8cm；
31、和/或，所述壯芽培養的條件為：培養溫度25±1℃，光暗交替培養，其中光照強度800-1200lx，每天光照時間15-17h；
32、和/或，所述壯芽培養的時間為30-35d；
33、和/或，所述生根培養的條件為：培養溫度25±1℃，光暗交替培養，其中光照強度800-1200lx，每天光照時間15-17h；
34、和/或，所述生根培養的時間為30-35d；
35、和/或，所述生根培養后得到的試管苗的高度6.0-10.0cm、具有5-7條根、塊莖直徑為0.5-0.8cm。
36、進一步地，所述方法還包括：
37、步驟s7煉苗和移栽：將生根培養得到的試管苗進行煉苗后本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的培養基組合，其特征在于，所述培養基組合包括：
2.根據權利要求1所述的培養基組合，其特征在于，所述培養基組合還包括：
3.根據權利要求1或2所述的培養基組合，其特征在于，
4.根據權利要求2所述的培養基組合，其特征在于，所述愈傷組織誘導培養基、所述愈傷組織增殖培養基、所述愈傷組織分化培養基、壯芽培養基、生根培養基的pH均為5.75-5.85。
5.一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，
7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，
9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述栽培基質包括泥炭土、珍珠巖、田園土，其中泥炭土：珍珠巖：田園土的質量比為2:2:1。
【技術特征摘要】
1.一種利用塊莖構建彩色馬蹄蓮再生體系的培養基組合，其特征在于，所述培養基組合包括：
2.根據權利要求1所述的培養基組合，其特征在于，所述培養基組合還包括：
3.根據權利要求1或2所述的培養基組合，其特征在于，
4.根據權利要求2所述的培養基組合，其特征在于，所述愈傷組織誘導培養基、所述愈傷組織增殖培養基、所述愈傷組織分化培養基、壯芽培養基、生根培養基的ph均為5.75-5.85。
5.一種利用塊莖...
【專利技術屬性】
技術研發人員：衛尊征，曾臻，鄭玉紅，王壹，蔣尹，
申請(專利權)人：北京市農林科學院，
類型：發明
國別省市：
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