【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)療檢測，更具體地涉及一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)。
技術(shù)介紹
1、脂肪在肝臟內(nèi)過度蓄積，危害極大，雖然“單純性脂肪肝”發(fā)生肝硬化和肝癌幾率較低，但如出現(xiàn)以下情況會加大肝癌的發(fā)生率，一是多次體檢轉(zhuǎn)氨酶升高，不及時治療；二是合并高血壓、糖尿病和代謝綜合征的人群、老年人、重度肥胖人群等。此外，如同時合并有乙肝、丙肝等，肝癌發(fā)生率又會加大。脂肪肝患者血糖、血脂、尿酸等代謝都會趨于異常，其他疾病都可能接踵而至。但是，目前診斷多局限于超聲，缺乏將各種指標綜合應用的診斷體系，因此，明確核心診斷相關(guān)指標，建立診斷體系，開發(fā)特異性標志物的診斷用醫(yī)療器械，對推動企業(yè)的醫(yī)療器械開發(fā)具有重要意義。
2、然而很多人在體檢時可能都被告知有“脂肪肝”，但大多會因為沒什么癥狀，所以不重視其發(fā)生發(fā)展，事實上，從脂肪肝到肝癌只要四步：脂肪肝→脂肪性肝炎→脂肪性肝纖維化→脂肪性肝硬化→肝癌，然而目前對脂肪肝的檢測多由超聲檢測得知，且存在以下局限性：首先，超聲并不是診斷脂肪肝的準確手段，只有在病理改變明顯時才可見；其次，脂肪肝分度受檢查者及儀器影響較大，且分度與病理等檢查并不匹配；因此，我們體檢所得知的輕度、中度脂肪肝等很難準確對應病理進程，因此，很多人就不重視了。
3、基于此，開發(fā)一種檢測脂肪肝的方法對于防治脂肪肝至關(guān)重要，項目符合大健康時代需求，將有助于推動脂肪肝防治意識，從而以點帶面，加速推動合作企業(yè)醫(yī)療器械開發(fā)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、(一)解決的技術(shù)問題
2、針對
3、(二)技術(shù)方案
4、本專利技術(shù)提供如下技術(shù)方案：一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，包括如下步驟：
5、s1：確定具有明確作用機制的脂肪肝診斷標志物；
6、首先構(gòu)建小鼠脂肪肝模型，隨后采用小鼠模型，考察在高脂飲食誘導的脂肪肝模型中，血清中生物標志物的變化與病理脂肪肝分期之間的聯(lián)系，同時，構(gòu)建該標志物缺失小鼠，利用該小鼠建立肝損傷模型，研究其保護作用，然后將同步觀測胰島素抵抗、脂質(zhì)沉積、炎癥消漲等，明確該標志物對機體代謝的作用機制；
7、s2：通過轉(zhuǎn)錄組學分析，確定該標志物的分子信號通路，并利用rt-pcr和westernblot等生物學實驗方法驗證功能信號通路，從而確定該標志物對脂肪肝等代謝紊亂的作用機制；
8、s3：開發(fā)特異性標志物的診斷試劑盒；
9、配比制備特異性標志物的診斷試劑盒，構(gòu)建試劑盒開發(fā)關(guān)鍵技術(shù)體系，建立分別針對酒精性和非酒精性脂肪肝的診斷試劑盒。
10、優(yōu)選的，所述構(gòu)建小鼠脂肪肝模型包括如下步驟：
11、s1a：采用野生型小鼠喂食高脂飼料或蛋氨酸膽堿缺乏飼料誘導脂肪肝模型，造模過程中進行超聲檢測、胰島素抵抗等檢測，在小鼠肝損傷不同階段收集血清、肝臟標本，用于后續(xù)研究；
12、s1b：在血清中檢測肝損傷標志物谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)和堿性磷酸酶(alp)水平，肝臟通過he染色、tunel染色等確定肝臟受損程度；
13、s1c：在血清檢測膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平，確定血清中脂質(zhì)積累水平；肝臟通過油紅o染色、試劑盒檢測脂質(zhì)水平，確定肝臟中脂質(zhì)積累情況；
14、s1d：通過elisa試劑盒檢測血清中炎癥因子水平，通過rna-seq、westernblot或qrt-pcr等方法檢測肝臟中炎癥分子表達水平，確定脂肪肝發(fā)展各個過程中炎癥因子的變化情況。
15、優(yōu)選的，脂肪肝診斷標志物的篩選包括如下步驟：
16、s1e：通過rna-seq檢測肝臟中基因的表達，確定在脂肪肝過程中的關(guān)鍵基因；進一步通過westernblot和qrt-pcr進行驗證，進一步篩選明確的標志物；
17、s1f：對s1e步驟中篩選的明確的標志物進行elisa的方法進行進一步檢測、確定，并通過統(tǒng)計學等方法分析該標志物是否與脂肪肝發(fā)展的不同階段具有關(guān)聯(lián)性；
18、s1g：通過基因敲除小鼠構(gòu)建脂肪肝模型，確定標志物；
19、通過對s1f步驟中研究明確的標志物篩選后，確定1-2種標志物，采用基因敲除的方法構(gòu)建基因敲除小鼠，后期再構(gòu)建脂肪肝模型小鼠，并對血清、肝臟等標本進行深入分析、研究，明確標志物的可行性、科學性；
20、s1h：建立脂肪肝診斷體系，開發(fā)特異性標志物診斷試劑盒；
21、明確標志物后，進行特異性標志物試劑盒的開發(fā)，通過對試劑盒所需原料、各步驟使用原料進行配比、試劑盒使用步驟等方面進行優(yōu)化完善，為工業(yè)化生產(chǎn)提供理論支撐、為后續(xù)產(chǎn)品生產(chǎn)提供有力保障。
22、(三)有益效果
23、本專利技術(shù)提供了一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，具備以下有益效果：
24、本專利技術(shù)提供一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，在于脂肪肝診斷理念的創(chuàng)新，確定新的脂肪肝診斷體系，開發(fā)具有明確作用機制的診斷標志物，在脂肪肝診斷試劑盒的研發(fā)與診斷體系的改進上具有顯著的優(yōu)勢,建設診斷試劑盒生產(chǎn)線，實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，對于防治脂肪肝至關(guān)重要，項目符合大健康時代需求，將有助于推動脂肪肝防治意識，從而以點帶面，加速推動合作企業(yè)醫(yī)療器械開發(fā)，可為推動全國脂肪肝的診斷、防治奠定示范基礎。
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1.一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，其特征在于：包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，其特征在于：所述構(gòu)建小鼠脂肪肝模型包括如下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，其特征在于：脂肪肝診斷標志物的篩選包括如下步驟：
【技術(shù)特征摘要】
1.一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，其特征在于：包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂肪肝檢測試劑盒開發(fā)系統(tǒng)，其特征在于：所述構(gòu)...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：方琴，郝學功，杜燕，陳國法，
申請(專利權(quán))人：安徽省德濟堂藥業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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