【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及snps分子標(biāo)記nc_056056.1：g.26656?g＞a和nc_056056.1：g.26473?c＞t完全連鎖位點(diǎn)在綿羊分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
0、技術(shù)背景
1、nr4a是孤核受體(nuclear?receptor，nr)的一個(gè)亞家族，該家族沒有已知的配體，許多研究表明，它們不依賴受體即可參與一系列的生理活動(dòng)。nr4a1在多個(gè)組織中表達(dá)，廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、糖脂代謝等功能，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、癌癥和血管粥樣硬化等疾病(chao，bensinger?et?al.2008)。
2、nr4a1在葡萄糖代謝調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用(deng，chen?et?al.2022)，能夠影響糖酵解中關(guān)鍵酶的活性，從而影響骨骼肌對(duì)葡萄糖的吸收和利用。nr4a1也能調(diào)控脂類代謝，影響脂肪前體細(xì)胞的增殖以及脂肪合成能力；促進(jìn)脂肪分解途徑中相關(guān)蛋白的表達(dá)，影響脂肪的分解(chao，bensinger?et?al.2008)。
3、nr4a1調(diào)控細(xì)胞增殖與凋亡，能夠影響細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶和其他細(xì)胞周期相關(guān)基因。nr4a1從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移至線粒體并與bcl-2結(jié)合，將bcl-2轉(zhuǎn)化為促凋亡蛋白，然后誘導(dǎo)細(xì)胞色素c的釋放和凋亡(moll，marchenko?et?al.2006)。
4、研究表明nr4a1是豬精液質(zhì)量的候選基因，nr4a1?c.956+796?a＞g位點(diǎn)突變與杜羅克和大白豬的精子畸形率相關(guān)，與大白豬和長(zhǎng)白豬的精子活力(mo
5、雖然目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)豬、牛nr4a1多態(tài)性與產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)乳性能等有關(guān)，但在綿羊中nr4a1基因多態(tài)性的研究未見報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于為提高綿羊育種中生長(zhǎng)性狀選擇的準(zhǔn)確性，加快遺傳進(jìn)展提供一個(gè)影響綿羊早期體增重的分子標(biāo)記。
2、本專利技術(shù)的另一目的是提供分子標(biāo)記的應(yīng)用。
3、本專利技術(shù)的又一目的是提供一種篩選快速生長(zhǎng)的綿羊品種(系)的方法。
4、本專利技術(shù)的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
5、一個(gè)影響綿羊早期體重的分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記為克隆自綿羊nr4a1基因3’utr區(qū)nc_056056.1：g.26656和nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)的一段核苷酸序列，其中，nc_056056.1：g.26656位點(diǎn)具有g(shù)/a多態(tài)性，nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)具有c/t多態(tài)性，兩個(gè)位點(diǎn)完全連鎖，agct型綿羊斷奶重、初生至斷奶日增重均顯著高于ggcc型綿羊。
6、所述的分子標(biāo)記優(yōu)選以seq?id?no.1和seq?id?no.2所示的引物對(duì)pcr擴(kuò)增綿羊基因組dna得到的782bp的擴(kuò)增產(chǎn)物，包含綿羊nr4a1基因3’utr區(qū)nc_056056.1：g.26656?g＞a和nc_056056.1：g.26473?c＞t兩個(gè)完全連鎖位點(diǎn)，共有g(shù)gcc、agct和aatt三種基因型，其中agct型綿羊斷奶重、初生至斷奶日增重均顯著高于ggcc型綿羊。
7、進(jìn)一步，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于檢測(cè)所述snps分子標(biāo)記的引物對(duì)，上游引物p1如seq?id?no.1所示，下游引物p2如seq?id?no.2所示。
8、本專利技術(shù)所述的引物對(duì)在綿羊育種中的應(yīng)用，優(yōu)選利用所述的引物對(duì)pcr擴(kuò)增綿羊基因組中含有本專利技術(shù)所述的分子標(biāo)記，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，判讀綿羊nr4a1基因nc_056056.1：g.26656位點(diǎn)的g/a多態(tài)性與nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)c/t多態(tài)性。
9、一種檢測(cè)本專利技術(shù)所述的分子標(biāo)記的方法，包括利用所述的引物對(duì)pcr擴(kuò)增綿羊基因組中所述的分子標(biāo)記，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，判讀綿羊nr4a1基因nc_056056.1：g.26656位點(diǎn)的g/a多態(tài)性與nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)c/t多態(tài)性。
10、一種篩選早期快速生長(zhǎng)綿羊品種(系)的方法，檢測(cè)綿羊nr4a1基因nc_056056.1：g.26656位點(diǎn)的g/a多態(tài)性和nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)c/t多態(tài)性，選擇agct型個(gè)體進(jìn)行留種。
11、本專利技術(shù)所述的方法，優(yōu)選包括以下步驟：
12、1)提取綿羊基因組dna；
13、2)利用所述的引物對(duì)p1、p2，pcr擴(kuò)增nr4a1基因3’utr區(qū)序列，得到782bp擴(kuò)增產(chǎn)物；
14、3)利用所述的引物p2對(duì)782bp擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分型，nc_056056.1：g.26656位點(diǎn)分為gg型、ag型、aa型；nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)分為cc型、ct型、tt型，共有三種完全連鎖的基因型為ggcc、agct和aatt。
15、4)選擇agct型個(gè)體留種。
16、有益效果
17、家畜生長(zhǎng)性狀是一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)性狀，屬于數(shù)量性狀，傳統(tǒng)表型選擇準(zhǔn)確性低，周期長(zhǎng)，遺傳進(jìn)展緩慢。本專利技術(shù)使用pcr擴(kuò)增與測(cè)序相結(jié)合檢測(cè)綿羊nr4a1基因nc_056056.1：g.26656位點(diǎn)g/a多態(tài)性與nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)c/t多態(tài)性，并將基因型與綿羊早期體重進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析，發(fā)現(xiàn)綿羊nr4a1基因nc_056056.1：g.26656位點(diǎn)與nc_056056.1：g.26473位點(diǎn)完全連鎖，其中agct型綿羊斷奶重、初生至斷奶平均日增重均顯著高于ggcc型綿羊。該位點(diǎn)可用于綿羊的分子輔助標(biāo)記，提高選擇的準(zhǔn)確性，在綿羊出生時(shí)通過檢測(cè)基因型進(jìn)行選擇，加快育種進(jìn)程，降低育種成本，對(duì)進(jìn)一步提高綿羊的生長(zhǎng)性狀有重要的實(shí)際意義，對(duì)綿羊品種(系)培育有著重要的實(shí)踐價(jià)值。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一個(gè)影響綿羊早期生長(zhǎng)的分子標(biāo)記，其特征在于所述的分子標(biāo)記為克隆自綿羊基因組DNA且包含綿羊NR4A1基因3’UTR區(qū)NC_056056.1：g.26656?G＞A和NC_056056.1：g.26473C＞T兩個(gè)完全連鎖突變位點(diǎn)的一段核苷酸序列，AGCT型45日齡斷奶體重以及初生至斷奶平均日增重高于GGCC型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記，其特征在于所述的分子標(biāo)記為以SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的引物對(duì)PCR擴(kuò)增綿羊基因組DNA得到的782bp的擴(kuò)增產(chǎn)物，其包含綿羊NR4A1基因3’UTR區(qū)NC_056056.1：g.26656?G＞A和NC_056056.1：g.26473?C＞T位點(diǎn)，AGCT型45日齡斷奶體重以及初生至斷奶平均日增重高于GGCC型。
3.權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)記在綿羊育種中的應(yīng)用，優(yōu)選在篩選快速生長(zhǎng)的綿羊品種(系)中的應(yīng)用。
4.一種用于擴(kuò)增權(quán)利要求1中所述的分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于如說明書中上游引物P1?SEQ?ID?NO.1所示，下游引物P2?SEQ?ID?NO.2所示。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一個(gè)影響綿羊早期生長(zhǎng)的分子標(biāo)記，其特征在于所述的分子標(biāo)記為克隆自綿羊基因組dna且包含綿羊nr4a1基因3’utr區(qū)nc_056056.1：g.26656?g＞a和nc_056056.1：g.26473c＞t兩個(gè)完全連鎖突變位點(diǎn)的一段核苷酸序列，agct型45日齡斷奶體重以及初生至斷奶平均日增重高于ggcc型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記，其特征在于所述的分子標(biāo)記為以seq?id?no.1和seq?id?no.2所示的引物對(duì)pcr擴(kuò)增綿羊基因組dna得到的782bp的擴(kuò)增產(chǎn)物，其包含綿羊nr4a1基因3’utr區(qū)nc_056056.1：g.26656?g＞a和nc_056056.1：g.26473?c＞t位點(diǎn)，agct型45日齡斷奶體重以及初生至斷奶平均日增重高于ggcc型。
3.權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)記在綿羊育種中的應(yīng)用，優(yōu)選在篩選快速生長(zhǎng)的綿羊品種(系)中的應(yīng)用。
4.一種用于擴(kuò)增權(quán)利要求1中所述的分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于如說明書中上游引物p1?seq?id?no.1所示，下游引物p2?seq?id?no.2所示。
5.權(quán)利要求4所述的引物對(duì)在篩選快速生長(zhǎng)的綿羊育種中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于利用權(quán)利要求4所述的引物對(duì)pcr擴(kuò)增綿羊...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：茆達(dá)干，李曉彤，于昊，王悅，謝婧，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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