【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及甜味蛋白檢測技術，特別涉及樣品中巴西甜濃度的檢測方法。
技術介紹
1、巴西甜(brazzein)是從非洲西部野生植物pentadiplandra?brazzeana的果實中分離提純得到的甜味蛋白，與其它植物來源具有類似特性的蛋白質如索馬甜(thaumatin)、莫內林(monellin)、奇異果蛋白(miraculin)等一起被稱之為甜蛋白。巴西甜是一種單鏈蛋白，由54個氨基酸殘基組成，是植物甜味蛋白家族相對分子量最小的，相對分子質量為6.5kda，等電點為5，甜度約是等質量蔗糖的2000倍。巴西甜蛋白水溶解性、熱力學穩定性和ph值穩定性都較好。相對于傳統的碳水化合物糖類或化學合成甜味劑，這些天然甜蛋白一般具有甜度高、熱量低、口感好、安全無毒等優點，同時，還具有改善食品風味、可降解為人體所需的各種氨基酸以及不會引起血糖升高、蛀牙等特點，被認為是非常具有發展前景的食品添加劑。
2、在甜味蛋白家族中，目前只有索馬甜有相關檢測方法的報道，索馬甜的國標方法只能用來檢測純度大于95％的純品，對于成分復雜的發酵液樣品無法精確檢測。專利cn109682894a報道了一種飲料索馬甜的檢測方法，利用超高效液相色譜和sds-page法對飲料中的索馬甜進行定性、定量分析。
3、然而對于巴西甜，尚無相關的檢測方法的報道。目前微生物生產得到的巴西甜蛋白急需相關的檢測方法來檢測濃度，以滿足發酵生產的需求。
技術實現思路
1、本專利技術提供一種樣品中巴西甜濃度的檢測方法，通
2、本專利技術的樣品中巴西甜濃度的檢測方法包括：
3、(a)建立標準曲線，包括用不同濃度的巴西甜溶液標準品進行液相色譜檢測，根據所述標準品在最大吸收波長處的色譜峰面積和巴西甜濃度制作標準曲線，擬合獲得標準曲線回歸方程；
4、(b)樣品檢測，包括對樣品進行液相色譜檢測，根據樣品最大吸收波長處色譜峰面積和標準曲線回歸方程計算出樣品中巴西甜濃度。
5、在一些實施方案中，所述最大吸收波長范圍是270-285nm，優選275-280nm，最優選279nm。
6、在一些實施方案中，在所述步驟(b)中，在對樣品進行液相色譜檢測之前，先對樣品進行預處理，所述預處理包括用0.2m-0.5m的氯化鈉溶液稀釋樣品，隨后過濾除去雜質。
7、在一些實施方案中，液相色譜檢測的填料為陽離子交換樹脂。
8、在一些實施方案中，液相色譜檢測使用磷酸鹽緩沖液作為平衡液，使用加入氯化鈉的磷酸鹽緩沖液作為洗脫液，所述磷酸鹽緩沖液的ph為6.8-7.2，優選為7.0。
9、在一些實施方案中，洗脫液中氯化鈉的濃度為0.5m至1.0m，優選為0.8m。
10、在一些實施方案中，巴西甜溶液標準品的巴西甜濃度在50μg/ml至1000μg/ml之間，優選在80μg/ml至500μg/ml之間。
11、在一些實施方案中，標準曲線回歸方程是y＝1.5512x-29.394，其中x是巴西甜濃度，y是色譜峰面積。
12、本專利技術的檢測方法具有以下優勢：
13、1、填補了巴西甜檢測方法的空白；
14、2、不僅可以檢測純度大于95％的純品，還能檢測環境成分復雜的發酵罐樣品以及后處理樣品，滿足發酵生產的檢測需求；
15、3、具有環境友好性，流動相及所用試劑只涉及到緩沖鹽類試劑；
16、4、精確度較高，按gb/t?22554-2010《基于標準樣品的線性校準》推薦，進行標準曲線制作，曲線的線性能達到0.999以上，標準曲線制作后，就可以根據標準曲線查出待測物質的含量。
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1.樣品中巴西甜濃度的檢測方法，包括：
2.根據權利要求1所述的檢測方法，所述最大吸收波長范圍是270-285nm，優選275-280nm，最優選279nm。
3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其中所述步驟(b)中，在對樣品進行液相色譜檢測之前，先對樣品進行預處理，所述預處理包括用0.2M-0.5M的氯化鈉溶液稀釋樣品，隨后過濾除去雜質。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的檢測方法，其中液相色譜檢測的填料為陽離子交換樹脂。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的檢測方法，其中液相色譜檢測使用磷酸鹽緩沖液作為平衡液，使用加入氯化鈉的磷酸鹽緩沖液作為洗脫液，所述磷酸鹽緩沖液的pH為6.8-7.2，優選為7.0。
6.根據權利要求5所述的檢測方法，其中洗脫液中氯化鈉的濃度為0.5M至1.0M，優選為0.8M。
7.根據權利要求1-6中任一項所述的檢測方法，其中巴西甜溶液標準品的濃度在50μg/mL至1000μg/mL之間，優選在80μg/mL至500μg/mL之間。
8.根據權利要求1-7任一項所述
9.根據權利要求1-8任一項所述的檢測方法，所述的巴西甜為純化后的樣品或生物發酵制備的發酵產物。
...【技術特征摘要】
1.樣品中巴西甜濃度的檢測方法，包括：
2.根據權利要求1所述的檢測方法，所述最大吸收波長范圍是270-285nm，優選275-280nm，最優選279nm。
3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其中所述步驟(b)中，在對樣品進行液相色譜檢測之前，先對樣品進行預處理，所述預處理包括用0.2m-0.5m的氯化鈉溶液稀釋樣品，隨后過濾除去雜質。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的檢測方法，其中液相色譜檢測的填料為陽離子交換樹脂。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的檢測方法，其中液相色譜檢測使用磷酸鹽緩沖液作為平衡液，使用加入氯化鈉的磷酸鹽緩沖液作為...
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅雨佳，張國秀，黃珂，徐紅，
申請(專利權)人：南京百斯杰生物工程有限公司，
類型：發明
國別省市：
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