【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物工程，更具體地說，它涉及一種雞傳染性貧血病毒、雞傳染性貧血病毒卵黃抗體及其制備方法及應用。
技術介紹
1、雞傳染性貧血是由雞傳染性貧血病毒(chicken?infectious?anemia?virus，ciav)引起的一種以再生障礙性貧血和全身淋巴器官萎縮，造成免疫抑制為主要特征的病毒性傳染病，雛雞感染后主要臨床表現為精神沉郁、雞冠蒼白等貧血癥狀，紅細胞壓積降低，剖檢可見胸腺萎縮、骨髓顏色為黃色或粉色。雞傳染性貧血病毒在雞群中可水平傳播和垂直傳播，給養禽業造成嚴重的經濟損失。目前尚無治療雞傳染性貧血病毒的有效藥物，臨床推薦以活苗免疫預防為主，配合良好的生物安全等綜合防控措施。
2、目前在雞傳染性貧血流動地區使用減毒活疫苗，但它可能導致新毒株的發展。滅活疫苗比減毒活疫苗更受歡迎，因為減毒活疫苗在與病毒毒株重組后可能恢復其毒力，持續使用減毒活疫苗很有可能形成新的毒株。滅活疫苗在此方面則較為安全，但也存在產生低免疫反應等缺點。因此從發病的雞群中分離ciav強毒株，分析這些ciav毒株的生物學特性，篩選當前流行并具有優良生物學特性的ciav毒株，培育ciav疫苗候選毒株，研制ciav疫苗及卵黃抗體，是有效防控當前雞傳染性貧血發生的必要措施。
技術實現思路
1、為了給疫苗保護試驗攻毒毒株提供更加精確的原材料，提供對傳染性貧血病毒具有更好治療效果的抗體，本申請提供一種雞傳染性貧血病毒、雞傳染性貧血病毒卵黃抗體及其制備方法及應用。
2、第一方面，本申請提供
3、一種雞傳染性貧血病毒，所述雞傳染性貧血病毒命名為雞傳染性貧血病毒rd240101a（chicken?infectious?anemia?virus），保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為中國北京，保藏日期為2024年09月23日，保藏編號為cgmccno.46198。
4、通過采用上述技術方案，為禽類養殖用疫苗保護試驗攻毒毒株提供原材料，在雞疫情防控方面具有重要意義。
5、第二方面，本申請提供一種雞傳染性貧血病毒卵黃抗體，采用如下的技術方案：一種雞傳染性貧血病毒卵黃抗體，利用雞傳染性貧血病毒rd240101a制備的滅活疫苗作為免疫原制成。
6、通過采用上述技術方案，卵黃抗體可用于畜禽特異性疫病的治療和預防，尤其是對病毒性疾病的特異性治療作用，是一種方便、高效、無毒副作用的非抗生素生物禽藥，在臨床上得到廣泛的認同和應用，同時還能避免疫苗可能帶來的病毒污染。采用傳染性貧血病毒進行卵黃抗體的制備，獲得的卵黃抗體具有良好的免疫效果，可以預防雞傳染性貧血的大面積爆發，產生有效的防護效果。
7、第三方面，本申請提供一種雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，采用如下的技術方案：
8、一種雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，包括以下步驟：
9、(1)由雞傳染性貧血病毒rd240101a制備抗原；
10、(2)用甲醛溶液對所述抗原進行滅活，獲得滅活抗原；
11、(3)制備免疫抗原：將所述滅活抗原和滅菌吐溫80混合，攪拌均勻，制得水相，與油相混合乳化，制成免疫抗原；
12、(4)制備雞傳染性貧血病毒卵黃抗體：將所述免疫抗原接種于產蛋雞，收集高免蛋，將高免蛋經消毒、分離蛋黃、酸化萃取、辛酸除脂、過濾、濃縮，制得卵黃抗體。
13、通過采用上述技術方案，將傳染性貧血病毒利用蛋雞進行免疫程序，成本較低，安全性較好，穩定性強。
14、可選的，所述步驟(1)中雞傳染性貧血病毒rd240101a制備抗原的方法如下：將雞傳染性貧血病毒rd240101a經卵黃囊接種6日齡spf雞胚，收獲尿囊液、1-14d死亡雞胚和14d存活雞胚的肝臟組織，將死亡雞胚和存活雞胚的肝臟組織破碎研磨，然后與尿囊液按照1:1的比例混合，離心，無菌檢驗合格，即為抗原，冷凍保存。
15、通過采用上述技術方案，利用雞胚產生尿囊液，并與死亡雞胚、存活雞胚的肝臟組織制備抗原，使抗原具有高度的特異性，能夠準確識別目標病毒，減少交叉反應的可能性，提高診斷的準確性和可靠性，而且這種方法相對簡單且實用。
16、可選的，所述步驟(2)滅活抗原的制法具體為：向抗原中加入濃度為10％甲醛溶液，使甲醛溶液終濃度為0.1％，混合后密閉，在37℃下攪拌滅活24h，獲得滅活抗原，在2-8℃下保存。
17、通過采用上述技術方案，甲醛能使抗原滅活徹底，確保疫苗的安全性。
18、可選的，所述步驟(3)中免疫抗原的制備方法為：
19、制備油相：將白油和司班80混合，加入硬脂酸鋁，邊加熱邊攪拌至透明、滅菌，制得油相；制備水相：將滅活抗原和滅菌吐溫80混合，攪拌均勻，制得水相；
20、乳化：將油相和水相按照3:1的體積比混合，攪拌乳化，制得免疫抗原。
21、通過采用上述技術方案，通過乳化能將滅活抗原更好的分散在油相和水相中，形成穩定的免疫抗原，能非特異性的增強動物機體對抗原的特性免疫應答，從而持久提高抗體效價，提升疫苗的免疫效果。
22、可選的，所述步驟(4)中雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制法如下：
23、4.1免疫抗原接種：將所述免疫抗原肌肉注射于蛋雞，經四次免疫，并在四免后15d收集雞蛋，抽樣取蛋檢測雞傳染性貧血病毒卵黃中抗體效價≥1:20000為合格高免蛋；
24、4.2卵黃抗體制備：將高免蛋消毒、分離蛋清蛋黃，將蛋黃和0.02mol/l磷酸氫二鈉溶液按照1:3的質量比混合，加入與蛋黃質量比為1:1的沉降劑，用檸檬酸溶液調節ph值為6，沉降12h，沉降至上清液效價不低于1:13000；向上清液中加入辛酸，至辛酸終濃度為0.1％，攪拌，室溫放置2-6h，過濾、濃縮至雞傳染性貧血病毒elasa效價不低于1:13000。
25、通過采用上述技術方案，利用高免蛋的蛋黃進行卵黃抗體的制備，具有高效性，低成本，高穩定性，無殘留和毒副作用。
26、可選的，所述沉降劑包括質量比為6.66:4.16的pvp和海藻糖。
27、通過采用上述技術方案，pvp和海藻糖能發揮協同作用，共同增強蛋黃的穩定性和沉降效果，pvp通過增稠和黏合作用提供物理穩定性，而海藻糖則通過保濕和生物化學穩定性來增強蛋黃的品質。
28、可選的，所述步驟4.1中，四次免疫程序為：首免：將免疫抗原肌肉注射于140日齡蛋雞，0.5ml/只；二免：在首免后15日用免疫抗原肌肉注射，1ml/只；三免：在二免后15日用免疫抗原肌肉注射，1.5ml/只；四免：在三免后30日用免疫抗原肌肉注射，2ml/只，四免后15d開始收集雞蛋。
29、第四方面，本申請提供一種雞傳染性貧血病毒卵黃抗體在治療或預防雞傳染性貧血疾病中的應用。
30、通過采用上述技術方案，傳染性貧血卵黃抗體為臨床預防、治療雞傳染性貧血提供本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種雞傳染性貧血病毒，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，命名為雞傳染性貧血病毒RD240101A，保藏日期為2024年09月23日，保藏編號為CGMCCNO.46198。
2.一種雞傳染性貧血病毒卵黃抗體，其特征在于：利用權利要求1所述的雞傳染性貧血病毒RD240101A制備的滅活疫苗作為免疫原制成。
3.一種如權利要求2所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中雞傳染性貧血病毒RD240101A制備抗原的方法如下：將雞傳染性貧血病毒RD240101A經卵黃囊接種6日齡SPF雞胚，收獲尿囊液、1-14d死亡雞胚和14d存活雞胚的肝臟組織，將死亡雞胚和存活雞胚的肝臟組織破碎研磨，然后與尿囊液按照1:1的比例混合，離心，無菌檢驗合格，即為抗原，冷凍保存。
5.根據權利要求3所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）滅活抗原的制法具體為：向抗原中加入濃度為10%甲醛溶液，使甲醛溶
6.根據權利要求3所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟（3）中免疫抗原的制備方法為：
7.根據權利要求3所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟（4）中雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制法如下：
8.根據權利要求7所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述沉降劑包括質量比為6.66:4.16的PVP和海藻糖。
9.根據權利要求7所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟4.1中，四次免疫程序為：首免：將免疫抗原肌肉注射于140日齡蛋雞，0.5ml/只；二免：在首免后15日用免疫抗原肌肉注射，1ml/只；三免：在二免后15日用免疫抗原肌肉注射，1.5ml/只；四免：在三免后30日用免疫抗原肌肉注射，2ml/只，四免后15d開始收集雞蛋。
10.權利要求2所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體在治療或預防雞傳染性貧血疾病中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種雞傳染性貧血病毒，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，命名為雞傳染性貧血病毒rd240101a，保藏日期為2024年09月23日，保藏編號為cgmccno.46198。
2.一種雞傳染性貧血病毒卵黃抗體，其特征在于：利用權利要求1所述的雞傳染性貧血病毒rd240101a制備的滅活疫苗作為免疫原制成。
3.一種如權利要求2所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中雞傳染性貧血病毒rd240101a制備抗原的方法如下：將雞傳染性貧血病毒rd240101a經卵黃囊接種6日齡spf雞胚，收獲尿囊液、1-14d死亡雞胚和14d存活雞胚的肝臟組織，將死亡雞胚和存活雞胚的肝臟組織破碎研磨，然后與尿囊液按照1:1的比例混合，離心，無菌檢驗合格，即為抗原，冷凍保存。
5.根據權利要求3所述的雞傳染性貧血病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）滅活抗原的制法具體為：向抗原中加入濃度為10%...
【專利技術屬性】
技術研發人員：杜新永，劉長太，李鵬，趙豪龍，李曉娟，
申請(專利權)人：青島潤達生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。