【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及特異性分子標記，具體是指一種用于鑒定卵孢小奧德蘑新菌株hcs的引物對及方法。
技術介紹
1、卵孢小奧德蘑oudemansiella?raphanipes，隸屬于傘菌綱(agaricomycetes)傘菌目(agaricales)膨瑚菌科(physalacriceae)小奧德蘑屬(oudemansiella)，又名長根菇、長根金錢菌、露水雞樅等，因外形特征和野生雞樅菌相似，顏色為黑褐色，因此商品名為黑皮雞樅。卵孢小奧德蘑口感爽脆滑嫩，子實體富含蛋白質、氨基酸、多糖、維生素c及多酚等多種成分，營養價值豐富，其多糖不僅具有較強的抗氧化能力，還能預防腸道屏障損傷，石油醚萃取物可以有效抑制植物病原菌活性。因其具有極高的營養價值及藥用價值，深受消費者的歡迎，市場潛力極大
2、卵孢小奧德蘑雖已實現工廠化栽培，但市場上的商業化菌種十分單一，且產量低、質量不穩定。菌種問題極大地限制了卵孢小奧德蘑的產業化發展，市場上“同名異物”、“同物異名”現象嚴重，導致卵孢小奧德蘑的分類與鑒定極為混亂。
3、傳統的食用菌分類鑒定主要依據子實體的形態特征來進行，但食用菌在子實體生長發育的過程中容易受到溫度、光照、濕度、二氧化碳濃度等環境因素的影響，即使是同一個菌株，在不同環境下其形態特征通常也會產生一定程度的差異。傳統的分類方法已經不能滿足需求，且操作繁瑣、鑒定周期長。隨著分子生物學技術的發展，各種分子標記技術已逐漸應用于食用菌領域。issr(inter-simplesequencerepeat)是zietkeiwitcz等于
技術實現思路
1、本專利技術要解決的技術問題是，針對上述
技術介紹
中提出的不足，提供一種用于鑒定卵孢小奧德蘑新菌株hcs的引物對及方法。
2、為解決上述技術問題，本專利技術提供的技術方案為：所述卵孢小奧德蘑新菌株hcs保藏編號為cgmcc?no.41593；所述引物對為y6-f1/y6-r2，其上游引物序列為：5’-gcttactctcgtgcgatgaag-3’；下游引物序列為：5’-gaggatagtacacagtgtgatgc-3’，
3、一種用于鑒定卵孢小奧德蘑新菌株hcs的方法，它包括以下步驟：
4、步驟一：提取待測卵孢小奧德蘑菌株的dna；
5、步驟二：以步驟一提取的待測樣品dna為擴增模版，以引物所示序列組成的分子特異性標記引物作為擴增引物，進行pcr擴增；
6、步驟三：對步驟二的pcr產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，獲得菌株hcs的特異性dna片段。
7、作為改進，所述的步驟一具體提取方法為：菌株活化后轉接于pda培養基中，24℃避光培養10d后刮取菌絲，使用真菌dna提取試劑盒提取dna，于-20℃保存。
8、作為改進，所述步驟二中的擴增體系為：2×rapid?taq?master?mix?10μl，10μmol/l引物1μl，dna模版1μl，ddh2o?8μl，擴增程序為94℃預變性4min，94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸60s，35個循環，72℃延伸7min，4℃保存。
9、作為改進，所述步驟三中的電泳是將步驟二中的擴增產物經1.5％瓊脂糖、120v進行凝膠電泳作業，獲得菌株hcs的特異性dna片段。
10、作為改進，所述引物對y6-f1/y6-r2擴增出的特異性分子標記的核酸序列如seqid?no.1所示。
11、采用以上結構后，本專利技術具有如下優點：1、卵孢小奧德蘑hcs的特異性分子標記具有操作簡便、快速、準確的特點，相較于傳統的形態學鑒定誤差小，不受環境條件的影響，判斷更直觀。
12、2、本專利技術在卵孢小奧德蘑基因測序、生物信息分析的基礎上，設計了卵孢小奧德蘑菌株hcs的擴增引物，具有很強的特異性，能夠對hcs提取的dna進行特異擴增，并能擴增出557bp片段，而對其他卵孢小奧德蘑菌株無擴增作用。
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1.一種用于鑒定卵孢小奧德蘑新菌株HCS的引物對，其特征在于：所述卵孢小奧德蘑新菌株HCS保藏編號為CGMCC?NO.41593；所述引物對為Y6-F1/Y6-R2，其上游引物序列為：5’-GCTTACTCTCGTGCGATGAAG-3’；下游引物序列為：5’-GAGGATAGTACACAGTGTGATGC-3’。
2.一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株HCS的方法，其特征在于：包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株HCS的方法，其特征在于：所述的步驟(1)具體提取方法為：菌株活化后轉接于PDA培養基中，24℃避光培養10d后刮取菌絲，使用真菌DNA提取試劑盒提取DNA，于-20℃保存。
4.根據權利要求2所述的一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株HCS的方法，其特征在于：所述步驟(2)中的擴增體系為：2×RapidTaq?Master?Mix?10μL，10μmol/L引物1μL，DNA模版1μL，ddH2O?8μL，擴增程序為94℃預變性4min，94℃變性30s，60℃退火30s，72°C延伸60s，35個循環，72℃延伸
5.根據權利要求2所述的一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株HCS的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的電泳是將步驟二中的擴增產物經1％-1.5％瓊脂糖、120V進行凝膠電泳作業，若擴增結果出現557bp片段，即可判定待測樣品為卵孢小奧德蘑菌株HCS。
6.根據權利要求5所述的一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株HCS的方法，其特征在于：所述引物對Y6-F1/Y6-R2擴增出的特異性分子標記的核酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
...【技術特征摘要】
1.一種用于鑒定卵孢小奧德蘑新菌株hcs的引物對，其特征在于：所述卵孢小奧德蘑新菌株hcs保藏編號為cgmcc?no.41593；所述引物對為y6-f1/y6-r2，其上游引物序列為：5’-gcttactctcgtgcgatgaag-3’；下游引物序列為：5’-gaggatagtacacagtgtgatgc-3’。
2.一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株hcs的方法，其特征在于：包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株hcs的方法，其特征在于：所述的步驟(1)具體提取方法為：菌株活化后轉接于pda培養基中，24℃避光培養10d后刮取菌絲，使用真菌dna提取試劑盒提取dna，于-20℃保存。
4.根據權利要求2所述的一種用于鑒定卵孢小奧德蘑菌株hcs的方法，其特征在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：費妤婕，劉洪亮，夏志蘭，王嬌，
申請(專利權)人：湖南省合業農業發展有限公司，
類型：發明
國別省市：
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