【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物領域，特別是涉及一種抑制雞lnc-ca13基因表達的shrna、重組載體、重組菌及其應用。
技術介紹
1、雞交叉喙主要表現為上下喙錯位、呈交叉狀態。1934年至今，全球已公開報道至少12個雞種存在交叉喙，發生率0.2％-7.4％，國內約30％地方雞種存在交叉喙現象。喙畸形雞無法正常采食飲水，導致生長發育受阻，死亡率高出正常雞數倍，成年雞繁殖力也低于正常雞50％以上。以年出欄千萬羽的種雞場為例，每年因交叉喙導致經濟損失高達600萬元。交叉喙在育雛期形成，隱蔽性極強，且正常個體交配后代也會出現交叉喙，嚴重制約著地方雞種產業化發展。交叉喙雞雙側下頜骨髁部轉錄本特征，發現ca13基因在喙畸形雞短骨支側髁部表達下調，降低了碳酸酐酶參與的成骨細胞礦化能力，引起該側下頜骨支骨形成障礙，并形成交叉喙。其中，lnc-ca13基因作為ca13基因的上游表觀調控因子，在交叉喙雞短骨支側的髁部表達下調，因此lnc-ca13基因對調節雞下頜骨發育有一定重要作用，但目前對基因lnc-ca13基因的相關功能尚未報道，對雞交叉喙發病機制的研究仍需進一步繼續深入，為雞交叉喙研究機制研究提供依據。
2、rna干擾(rna?interference，rnai)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈rna(double-stranded?rna，dsrna)誘發的、同源mrna高效特異性降解的現象。由于使用rnai技術可以特異性降低或關閉特定基因的表達，所以該技術已被廣泛用于探索基因功能領域。shrna作為rna干擾的一種方法，是利用人源和鼠
3、rnai技術作為現代基因組研究的一個強大工具，對于了解動物生長發育的內在規律、調控有益性狀的高效表達以及沉默有害基因具有重要意義。本專利技術擬通過分子生物學手段將干擾lnc-ca13片段構建入病毒載體，該載體可以實現干擾lnc-ca13基因表達，除了可以直接瞬時轉染細胞用于lnc-ca13基因的干擾，該載體更可以包裝病毒在動物水平干擾lnc-ca13基因的表達，這種技術將會進一步為交叉喙機制研究提供一種有益的途徑。因此，rnai技術的運用將會為家禽基因功能研究和疾病基因治療開辟革命性的新領域，該技術以其較其他多種技術的突出優點和各領域中的突出優勢，在未來將會有更多更廣闊的發展前景。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種抑制雞lnc-ca13基因表達的shrna、重組載體、重組菌及其應用，以解決上述現有技術存在的問題。本專利技術提供的shrna能夠有效降低雞lnc-ca13基因的表達量，對于雞lnc-ca13基因的功能研究具有廣泛的應用前景。
2、為實現上述目的，本專利技術提供了如下方案：
3、本專利技術提供一種抑制雞lnc-ca13基因表達的shrna，所述shrna包括lnc-ca13-1、lnc-ca13-2或lnc-ca13-3；
4、所述lnc-ca13-1包括核苷酸序列如seq?id?no.5所示的正義鏈(lnc-ca13-1f)和核苷酸序列如seq?id?no.6所示的反義鏈(lnc-ca13-1r)；
5、所述lnc-ca13-2包括核苷酸序列如seq?id?no.7所示的正義鏈(lnc-ca13-2f)和核苷酸序列如seq?id?no.8所示的反義鏈(lnc-ca13-2r)；
6、所述lnc-ca13-3包括核苷酸序列如seq?id?no.9所示的正義鏈(lnc-ca13-3f)和核苷酸序列如seq?id?no.10所示的反義鏈(lnc-ca13-3r)。
7、在本專利技術中，所述lnc-ca13-1f的具體序列為：5’-ccgggcatcatctctccttgctattcaagagatagcaaggagagatgatgcttttttg-3’(seq?id?no.5)；所述lnc-ca13-1r的具體序列為：5’-aattcaaaaaagcatcatctctccttgctatctcttgaatagcaaggagagatgatgc-3’(seq?idno.6)；所述lnc-ca13-2f的具體序列為5’-ccgggctcggtacattggtgcttctcaagagaaagcaccaatgtaccgagcttttttg-3(seq?id?no.7)；所述lnc-ca13-2r的具體序列為5’-aattcaaaaaagctcggtacattggtgctttctcttgagaagcaccaatgtaccgagc-3’(seq?id?no.8)；所述lnc-ca13-3f的具體序列為5’-ccggccttgttatggcaccgaatttcaagagaattcggtgccataacaaggttttttg-3’(seq?id?no.9)；所述lnc-ca13-3r的具體序列為5’-aattcaaaaaaccttgttatggcaccgaattctcttgaaattcggtgccataacaagg-3’(seq?id?no.10)。
8、在本專利技術中，所述lnc-ca13-1的靶點序列如seq?id?no.1所示，具體為：gcatcatctctccttgcta；所述lnc-ca13-2的靶點序列如seq?id?no.2所示，具體為：gctcggtacattggtgctt；所述lnc-ca13-3的靶點序列如seq?id?no.3所示，具體為：ccttgttatggcaccgaat。
9、本專利技術提供了一種含有上述shrna的重組表達載體。
10、優選的，所述重組表達載體為慢病毒重組表達載體。
11、本專利技術提供了上述的重組載體的構建方法，包括以下步驟：
12、(1)分別合成抑制雞lnc-ca13基因表達的shrna的編碼dna正義鏈和反義鏈；
13、(2)將所述正義鏈和所述反義鏈混合后進行退火，形成雙鏈dna；
14、(3)將載體雙酶切后，得到線性化的載體；
15、(4)將所述雙鏈dna和所述線性化的載體進行連接，得到所述重組表達載體。
16、優選的，所述載體為慢病毒載體。
17、進一步優選的，所述慢病毒載體為gl427載體，該載體的圖譜如圖1所示。
18、本專利技術提供了一種含有上述的shrna的重組菌。
19、進一步優選的，所述重組菌的基礎菌為大腸桿菌。本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種抑制雞lnc-CA13基因表達的shRNA，其特征在于，所述shRNA包括lnc-CA13-1、lnc-CA13-2或lnc-CA13-3；
2.一種含有權利要求1所述shRNA的重組表達載體。
3.根據權利要求2所述的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體為慢病毒重組表達載體。
4.權利要求2所述的重組載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述載體為慢病毒載體。
6.一種含有權利要求1所述的shRNA的重組菌。
7.根據權利要求6所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌的基礎菌為大腸桿菌。
8.權利要求1所述的shRNA、權利要求2或3所述的重組表達載體或權利要求6或7所述的重組菌在抑制雞lnc-CA13基因表達中的應用。
9.權利要求1所述的shRNA、權利要求2或3所述的重組表達載體或權利要求6或7所述的重組菌在制備抑制雞lnc-CA13基因表達的產品中的應用。
10.權利要求2或3所述的重組表達載體或權利要
...【技術特征摘要】
1.一種抑制雞lnc-ca13基因表達的shrna，其特征在于，所述shrna包括lnc-ca13-1、lnc-ca13-2或lnc-ca13-3；
2.一種含有權利要求1所述shrna的重組表達載體。
3.根據權利要求2所述的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體為慢病毒重組表達載體。
4.權利要求2所述的重組載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述載體為慢病毒載體。
6.一種含有權利要求1所述的shrna的重組...
【專利技術屬性】
技術研發人員：石雷，武敏，陳輝，王德賀，陳一凡，郝二英，徐俊杰，李欣欣，范毅豪，吳星霖，
申請(專利權)人：河北農業大學，
類型：發明
國別省市：
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