【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫(yī)藥領域，特別涉及一種人源化靶向vegf單域抗體及其應用。
技術介紹
1、血管內皮生長因子(vascular?endothelial?growth?factor,vegf)是一種二聚體糖蛋白家族，包括多種亞型，如vegf-a、vegf-b、vegf-c、vegf-d、vegf-e和胎盤生長因子(placenta?growth?factor，pigf)。vegf通過與內皮細胞上的特異性受體(如vegfr-1、vegfr-2和vegfr-3)結合，啟動一系列細胞內信號轉導，主要參與血管通透性的增加、細胞外基質的變性、血管內細胞的遷移、增殖以及血管的形成?；趘egf-a在調節(jié)血管生成和血管通透性的主導作用，通常所說的vegf即指vegf-a。在vegf-a亞型中，vegf165在數(shù)量和生物活性方面都占據(jù)主要地位。在生理狀態(tài)下，它對于組織的生長、血管健康的維持以及妊娠保障等方面發(fā)揮著至關重要的作用。然而，在某些疾病狀態(tài)下，vegf的異常表達或功能失調可能導致血管生成過度或不足，進而與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關。例如，在腫瘤生長過程中，腫瘤細胞能夠刺激周圍的正常細胞分泌大量的vegf，從而促進腫瘤血管的新生，為腫瘤提供充足的營養(yǎng)和氧氣。這種異常的血管生成不僅加速了腫瘤的生長，還增加了腫瘤轉移的風險。vegf的異常表達也與新生血管性眼病，如糖尿病視網(wǎng)膜病變、老年性黃斑變性等密切相關。在這些疾病中，vegf的異常升高會導致視網(wǎng)膜血管生成過多，進而引發(fā)一系列的病理變化，如血管滲漏、出血、水腫等，嚴重損害患者的視力。在心血管
2、目前，已批準在臨床上使用的抗vegf大分子藥物主要包括分為三類：抗體或抗體片段，如貝伐珠單抗(bevacizumab，avastin)、雷珠單抗(ranibizumab，lucentis)、布洛賽珠單抗(brolucizumab，beovu)和法瑞西單抗(靶向vegf和ang2雙特異性抗，faricimab-svoa，vabysmo)；融合蛋白類，如阿柏西普(ablifercept，eylea)和康柏西普(conbercept，朗沐)以及核酸適配體如哌加他尼鈉(pegaptanib，macugen)。1993年hamers等研究發(fā)現(xiàn)駱駝血清中存在一種天然缺失輕鏈的活性抗體，稱之為重鏈抗體，其可變區(qū)稱為單域抗體(sdab?or?vhh抗體)。隨后，在一些軟骨魚中也發(fā)現(xiàn)了類似的重鏈抗體。單域抗體是目前可得到的最小的功能性抗原結合片段，分子量約15kd，為常規(guī)抗體的1/10，又被稱為納米抗體(nanobody)。納米抗體具有分子小而穿透性強、高特異性和高親和力、高溶解性和穩(wěn)定性、免疫原性低、可識別獨特構象的抗原表位、易表達、易改造等優(yōu)點，將突破現(xiàn)有單抗類藥物發(fā)展的瓶頸，成為單抗藥物小型化和功能化的新寵。近年來，已有多個單域抗體藥物成功獲批上市。例如，首個單域抗體藥物卡普賽珠單抗(caplacizumab，cablivi)已獲歐盟批準用于治療血栓性血小板減少性紫癜；國內康寧杰瑞的pd-l1單域抗體fc融合蛋白kn-035也已在中國獲批上市，成為全球首個皮下注射的單域抗體藥物；ozoralizumab作為一種雙特異性單域抗體在日本獲批用于治療類風濕性關節(jié)炎。這些充分證明了單域抗體在藥物開發(fā)中的巨大潛力。
3、基于上述背景，本專利技術開發(fā)一種人源化靶向vegf單域抗體，為vegf阻斷藥物的開發(fā)和相關疾病的診療提供新的選擇。
技術實現(xiàn)思路
1、本專利技術的目的在于提供一種人源化靶向vegf單域抗體及其應用。
2、本專利技術所采用的技術方案如下：
3、本專利技術的第一方面提供了一種人源化靶向vegf單域抗體，所述單域抗體的氨基酸序列包括3個互補決定區(qū)cdr1、cdr2、cdr3，所述cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列為如下1)至36)中任意一種：
4、1)cdr1：fsindeams，cdr2：girsps，cdr3：aarhpdsihqevay；
5、2)cdr1：vkvshqyma，cdr2：gittqd，cdr3：tspvrwlwgaqhlaf；
6、3)cdr1：vtvsnqymg，cdr2：silnrn，cdr3：gvsrmgceatipy；
7、4)cdr1：yslsaqdms，cdr2：gisdtd，cdr3：gtglsaeggavdysrqgqv；
8、5)cdr1：yrinyenma，cdr2：tilrpn，cdr3：trrhrsnlgwrssapvqf；
9、6)cdr1：vrfnhefms，cdr2：ginsrs，cdr3：sarrapfrtkyikf；
10、7)cdr1：ftvntkdma，cdr2：tieman，cdr3：rcvgivclnenipf；
11、8)cdr1：vrvsdevms，cdr2：sitrgn、tgywgrlpsrwenkqvgf；
12、9)cdr1：dsispenmg，cdr2：tiyspn，cdr3：tyhnreassalks；
13、10)cdr1：ftfiyeama，cdr2：ginkgs，cdr3：gslggetstvgf；
14、11)cdr1：dnispeymg，cdr2：gihrsd，cdr3：rsgppmesklws；
15、12)cdr1：ynvsnenmg，cdr2：gistdn，cdr3：giielnttlwf；
16、13)cdr1：vminneyma，cdr2：tikiqs，cdr3：rpdwaynqsigy；
17、14)cdr1：ysvinqdms，cdr2：giatgn，cdr3：gvsedrsrlkeygphdmks；
18、15)cdr1：ftvssedma，cdr2：siqaan，cdr3：angverlgmhgpspfry；
19、16)cdr1：dnistedmt，cdr2：aienpd，cdr3：glsdnqvtrdynqltf；
20、17)cdr1：vtlsyenms，cdr2：sittpd，cdr3：aepvelvsdvrtkqahmsy；
21、18)cdr1：vkvnsynmg，cdr2：sildad，cdr3：sgthrsteelpf；
22、19)cdr1：dsisdevmt，cdr2：sikgqn，cdr3：aselcfegkilssevky；
23、20)cdr1：dmfnynnms，cdr2：tiht本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
1.一種人源化靶向VEGF單域抗體，其特征在于：所述單域抗體的氨基酸序列包括3個互補決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3，所述CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列為如下1）至36）中任意一種：
2.根據(jù)權利要求1所述的單域抗體，其特征在于：所述單域抗體還包括4個骨架區(qū)FR1、FR2、FR3、FR4，所述骨架區(qū)FR1、FR2、FR3、FR4的氨基酸序列為如下：
3.一種重組蛋白，其特征在于：所述重組蛋白包含權利要求1~2任一項所述的單域抗體。
4.一種核酸分子，其特征在于：所述核酸分子編碼權利要求1~3中任一項所述的單域抗體或重組蛋白。
5.一種載體，其特征在于：所述載體含有權利要求4所述的核酸分子。
6.一種宿主細胞，其特征在于：所述宿主細胞含有權利要求4所述的核酸分子或權利要求5所述的載體。
7.制備權利要求1~3任一項所述的單域抗體或重組蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括培養(yǎng)權利要求7所述的宿主細胞，從培養(yǎng)物中分離純化所述單域抗體或重組蛋白的步驟。
8.權利要求1-2任一項所述的單域抗體、
9.根據(jù)權利要求8所述的應用，其特征在于：所述疾病包括新生血管性眼病、腫瘤、心血管疾病、類風濕性關節(jié)炎。
10.一種檢測VEGF的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1-2任一項所述的單域抗體或權利要求3所述的重組蛋白。
...【技術特征摘要】
1.一種人源化靶向vegf單域抗體，其特征在于：所述單域抗體的氨基酸序列包括3個互補決定區(qū)cdr1、cdr2、cdr3，所述cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列為如下1）至36）中任意一種：
2.根據(jù)權利要求1所述的單域抗體，其特征在于：所述單域抗體還包括4個骨架區(qū)fr1、fr2、fr3、fr4，所述骨架區(qū)fr1、fr2、fr3、fr4的氨基酸序列為如下：
3.一種重組蛋白，其特征在于：所述重組蛋白包含權利要求1~2任一項所述的單域抗體。
4.一種核酸分子，其特征在于：所述核酸分子編碼權利要求1~3中任一項所述的單域抗體或重組蛋白。
5.一種載體，其特征在于：所述載體含有權利要求4所述的核酸分子。
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：陳曉樂，陽菊華，周潔，張南文，楊倩，林爽，王亞端，張鑫，劉蕊，秦剛，
申請(專利權)人：福建醫(yī)科大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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