【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于藥物評價，具體涉及一種基于pk/pd理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法。
技術介紹
1、華法林(warfarin)是全世界預防和治療血管栓塞性疾病最常用的抗凝劑，某些血栓風險高的患者通常需要長期或終身服用治療。由于華法林非常狹窄的治療窗和個體間藥效反應的高度變異性，它也是導致最多嚴重不良事件的藥物之一。在臨床實踐中，為了使華法林的抗凝藥效指標inr值(國際標準化比率值，international?normalizedratio)達到治療窗，不同患者使用華法林的劑量差異可能超過10倍。如若抗凝劑量不足則血栓事件風險上升；而劑量稍大則出血事件風險上升，劑量不適宜可能導致嚴重不良反應。聯合用藥產生的藥物相互作用是華法林抗凝藥效發生改變的重要影響因素。
2、目前國內外關于中藥對華法林抗凝影響的研究主要集中在藥物代謝酶方面，未見有在吸收、分布、代謝和排泄全過程藥動學并同時結合藥效學的研究，未建立中藥對華法林抗凝影響的綜合評價體系，研究方法和評價模式存在局限性，研究結論存在不完整性和不確定性。評價方法存在局限性。
技術實現思路
1、本專利技術要解決的問題是明確中藥對華法林抗凝影響的物質基礎和影響程度，提出一種基于pk/pd理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法。
2、為實現上述目的，本專利技術通過以下技術方案實現：
3、一種基于pk/pd理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，包括如下步驟：
4、s1.進行分組動物實驗，然
5、s2.對步驟s1得到的多維數據集進行預處理，包括去除異常值、數據標準化處理，得到預處理后的數據集；
6、s3.對步驟s2得到的預處理后的數據集，使用主成分分析法pca進行降維分析，提取主要成分，并生成得分矩陣和載荷矩陣；
7、s4.對步驟s3得到的得分矩陣進行正交偏最小二乘判別分析，基于正交偏最小二乘判別分析法將數據進行分類，得到分類結果；
8、s5.基于步驟s4得到的分類結果，得到中藥對華法林抗凝藥效影響的評價結果。
9、進一步的，步驟s1的具體實現方法包括如下步驟：
10、s1.1.進行分組動物實驗，分組方法為每組八只大鼠，a組空白組，連續14天腹腔注射給予生理鹽水，第八天灌胃給與生理鹽水；b組華法林組，連續14天腹腔注射給予生理鹽水，第八天灌胃給與華法林組；c組丹參素組，連續14天腹腔注射丹參素；d組紫草酸組，連續14天腹腔注射紫草酸；e組華法林+丹參素聯合給藥組，連續14天腹腔注射丹參素，第八天灌胃給與華法林；f組華法林+紫草酸聯合給藥組，連續14天腹腔注射紫草酸，第八天灌胃給與華法林；
11、s1.2.收集藥效學實驗數據，對a、b、c、d、e、f組動物在第八天給與華法林或生理鹽水后按照以下時間點收集血液：0、4、8、12、24、36、48、72、96、120、144h；
12、血液收集到含0.32％的枸櫞酸鈉溶液(1:9)ep管中，立即常溫3500rpm轉速下離心10min，取上層血漿使用半自動凝血儀測定凝血酶原時間pt和活化部分凝血活酶時間aptt，并計算國際標準化比值inr，計算公式為：
13、inr＝(pttest/ptnormal)isi
14、其中，pttest為實際血漿樣品的pt值，ptnormal為a組血漿樣品的pt值，isi代表國際敏感性指數；
15、然后記錄各組最大凝血酶原時間ptmax、最大國際標準化比值inrmax和最大活化部分凝血活酶時間apttmax；
16、s1.3.收集藥物吸收實驗數據，原位在體單向腸灌流實驗(吸收)：每組八只，雄性wistar大鼠分為華法林給藥組，丹參素給藥+華法林聯合給藥組，紫草酸給藥和華法林聯合給藥組；
17、每只大鼠僅使用單一腸段進行單次灌流試驗，每個給藥組分別為十二指腸組、空腸組、回腸組和結腸組；
18、實驗期間保證傷口處濕潤；用預熱37℃的生理鹽水以5ml/min的流速沖凈腸道內容物；用空白krebs-ringer緩沖液灌流排凈空氣；然后用含藥灌流液平衡30min管路及腸段，流速0.2ml/min，之后換已經被準確稱重的灌流液繼續灌流，用被稱重的試管接取流出液，從出口管處滴下第1滴液體開始計時開始接取并記錄15分鐘灌流液的重量，每15min收集200μl灌流液，hplc檢測，然后計算數據：r-warfarin在十二指腸部位的有效滲透系數r-d-peff、r-warfarin在空腸部位的有效滲透系數r-j-peff、r-warfarin在回腸部位的有效滲透系數r-i-peff、r-warfarin在結腸部位的有效滲透系數r-c-peff、s-warfarin在十二指腸部位的有效滲透系數s-d-peff、s-warfarin在空腸部位的有效滲透系數s-j-peff、s-warfarin在回腸部位的有效滲透系數s-i-peff、s-warfarin在結腸部位的有效滲透系數s-c-peff；
19、peff根據下列公式計算：
20、
21、其中，cout(cor)為校正后的接出液濃度，qin為灌入腸道的流入量，cin為灌入液的濃度，cout為接出液的實測濃度；l為腸段的長度；r為灌流腸段的橫截面半徑，qout為灌入腸道的流出量；
22、s1.4.收集藥物代謝實驗數據，將b、e、f組動物在第八天給與華法林或生理鹽水后按照以下時間點收集血液：0.5、1、1.5、2、4、8、12、24、48、72、96、120、144h；血被收集在被肝素鈉潤洗過的ep管里，之后將收集到的血在4℃溫度下12000rpm離心15分鐘，樣品前處理后經uplc-ms/ms檢測各樣品中r、s-華法林的血藥濃度；使用各時間點8個樣品的均值和標準方差建立藥代動力學軟件，使用das2.0軟件計算各組藥代動力學參數r-warfain達峰濃度r-cmax、r-warfain濃度達峰時間r-tmax、r-warfain消除半衰期r-t1/2、r-warfain?0-t時間內藥時曲線線下面積r-auc0-t、r-warfain藥時曲線總面積r-auc0-∞、s-warfain濃度達峰濃度s-cmax、s-warfain濃度達峰時間s-tmax、s-warfain消除半衰期s-t1/2、s-warfain?0-t時間內藥時曲線線下面積s-auc0-t、s-warfain藥時曲線總面積s-auc0-∞；
23、s1.5.收集藥物血漿蛋白結合率實驗數據，使用b、e、f組動物在第八天給與華法林或生理鹽水后1.5小時收集血液置于加有肝素抗凝劑的離心管中以9000r/min離心10分鐘，將大鼠血漿分為兩份，一份取上清液置于0.5ml離心管中，另一份離心好的血漿置于超濾離心管中，以9000r/本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種基于PK/PD理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種基于PK/PD理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于，步驟S1的具體實現方法包括如下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種基于PK/PD理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于，步驟S3的具體實現方法包括如下步驟：
4.根據權利要求3所述的一種基于PK/PD理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于，步驟S4的具體實現方法包括如下步驟：
5.根據權利要求4所述的一種基于PK/PD理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于，步驟S5得到中藥對華法林抗凝藥效影響的評價結果為：
【技術特征摘要】
1.一種基于pk/pd理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種基于pk/pd理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于，步驟s1的具體實現方法包括如下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種基于pk/pd理論的中藥對華法林抗凝藥效影響的評價方法，其特征在于...
【專利技術屬性】
技術研發人員：許世偉，劉高峰，任紅，楊春娟，史學鵬，魏琳，秦夢楠，趙月，劉艷，邵兵，
申請(專利權)人：哈爾濱醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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