【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于動(dòng)物抗病，具體涉及利用nmral2_bovine基因作為靶點(diǎn)在防治牛結(jié)核病中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、結(jié)核病是一種重要的人獸共患病，由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群感染引起，主要包括結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium?tuberculosis,m.tb)及其牛變種牛分枝桿菌(mycobacteriumbovis,m.bovis)。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(woah)將動(dòng)物結(jié)核病列入需要上報(bào)的疾病名錄，我國將牛結(jié)核病列為二類動(dòng)物疫病以及八種重點(diǎn)防治的人獸共患病之一。由于牛結(jié)核是人結(jié)核的重要傳染源，因此，在食品安全和公共衛(wèi)生中具有重要意義，世界各國均官方規(guī)定采用“檢疫-撲殺”策略控制牛結(jié)核。發(fā)展中國家是人結(jié)核病和牛結(jié)核病的高負(fù)擔(dān)國家，“檢疫-撲殺”控制牛結(jié)核病給各國政府和從業(yè)者帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；同時(shí)，巨大的人結(jié)核病負(fù)擔(dān)和細(xì)菌耐藥率不斷增加迫切需要更為有效的防控手段。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種有效防控人獸共患結(jié)核病的新方法。
2、一氧化氮(nitric?oxide，no)作為一個(gè)重要的分子，在結(jié)核病的調(diào)控中發(fā)揮了重要的作用。適度的no產(chǎn)生可以殺滅病原微生物，而過量的no產(chǎn)生則會(huì)導(dǎo)致過度的炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生細(xì)胞損傷，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。盡管nitrogen?metabolite?repressor(nmra)和大多數(shù)nmra-like蛋白質(zhì)都是在細(xì)菌或真菌中鑒定出來的，但也存在一種廣泛分布于高等動(dòng)物中的nmra-like蛋白質(zhì)，即nmral1，也被稱為hscarg。在細(xì)胞質(zhì)中，nmral1通過抑制nf-κb和rlr途徑的活性，
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)一方面保護(hù)nmral2_bovine基因抑制劑的用途--用于制備預(yù)防或治療牛結(jié)核病的藥物。進(jìn)一步地，所述nmral2_bovine基因抑制劑包括靶向敲低nmral2_bovine基因表達(dá)的sirna，或靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子或其表達(dá)載體。優(yōu)選地，所述sirna的靶向序列為5’-uggcuucugcuaagcuaccucugag-3’。優(yōu)選地，所述靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子的序列為5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。
2、本專利技術(shù)一方面保護(hù)用于制備預(yù)防或治療牛結(jié)核病的藥物，包括靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子或其表達(dá)載體，優(yōu)選地，所述核酸分子的序列為5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。還包括靶向敲低nmral2_bovine基因的核酸分子，即與nmral2_bovine基因雜交的雙鏈rna，所述雙鏈rna第一鏈的序列與nmral2_bovine基因中的靶序列相同，所述的靶序列為5’-uggcuucugcuaagcuaccucugag-3’。
3、本專利技術(shù)另一方面保護(hù)抗牛結(jié)核病的細(xì)胞模型，所述細(xì)胞模型中的內(nèi)源性nm?ral2_bovine基因被敲除或者敲低，從而使內(nèi)源性nmral2_bovine基因的表達(dá)缺失或表達(dá)量降低。成功構(gòu)建的nmral2_bovine基因敲除細(xì)胞株，命名為胎牛肺細(xì)胞ebl/nmra-ko#9(簡稱nmral2-ko)，該細(xì)胞株已于2023年11月14日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國.武漢.武漢大學(xué)，保藏編號cctcc?no：c2023350。
4、本專利技術(shù)另一方面保護(hù)一種抗牛結(jié)核病的基因編輯牛的制備方法，將牛源細(xì)胞中的nmral2_bovine基因敲除或敲低，從而使內(nèi)源性nmral2_bovine基因的表達(dá)缺失或表達(dá)量降低，進(jìn)一步制備nmral2_bovine基因敲除或敲低的基因編輯牛。
5、本專利技術(shù)還保護(hù)一種篩選預(yù)防和/或治療牛結(jié)核病的候選化合物的方法，設(shè)置測試組和對照組，所述測試組是在細(xì)胞中添加測試化合物，所述對照組是在細(xì)胞中不添加測試化合物，比較測試組和對照組細(xì)胞中nmral2_bovine基因的表達(dá)量，篩選顯著降低nmral2_bovine基因表達(dá)量的測試化合物。
6、本專利技術(shù)的技術(shù)方案具有如下主要的有益效果：
7、1.本專利技術(shù)首次提供了一種nmral2_bovine抑制劑的新應(yīng)用，用于抑制結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群在宿主細(xì)胞內(nèi)的存活，從而抵抗結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群感染引起的牛結(jié)核病。
8、2.本專利技術(shù)提供了一種對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群感染有抗性的基因工程化細(xì)胞及其制備方法，所述細(xì)胞株可以在不影響細(xì)胞正常功能的情況下，抵抗結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的感染，可以作為離體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑴p少化學(xué)添加劑對細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的影響。
9、3.本專利技術(shù)提供了一種抗牛結(jié)核病的基因編輯牛的制備方法，利用此方法制備抗牛結(jié)核病的牛模型，用于抗結(jié)核病藥物或制劑研究。
10、4.本專利技術(shù)提供一種篩選預(yù)防和/或治療結(jié)核病的候選化合物方法，以nmral2_bovine基因作為靶點(diǎn)，篩選顯著降低nmral2_bovine基因表達(dá)量的測試化合物。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.NmrAL2_Bovine基因抑制劑的用途，其特征在于，用于制備預(yù)防或治療牛結(jié)核病的藥物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述NmrAL2_Bovine基因抑制劑包括靶向敲低NmrAL2_Bovine基因表達(dá)的siRNA，或靶向敲除NmrAL2_Bovine基因的核酸分子或其表達(dá)載體。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述敲低siRNA的靶向序列為5’-UGGCUUCUGCUAAGCUACCUCUGAG-3’。
4.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述靶向敲除NmrAL2_Bovine基因的核酸分子的序列為5’-GGTATCTCGGTTGCTGATAT-3’。
5.用于制備預(yù)防或治療牛結(jié)核病的藥物，其特征在于，包括靶向敲除或敲低NmrAL2_Bovine基因的核酸分子或其表達(dá)載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于，所述靶向敲除NmrAL2_Bovine基因的核酸分子的序列為5’-GGTATCTCGGTTGCTGATAT-3’。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于，所述
8.抗牛結(jié)核病的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞中內(nèi)源性NmrAL2_Bovine基因被敲除或者敲低，從而使內(nèi)源性NmrAL2_Bovine基因的表達(dá)缺失或表達(dá)量降低。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞的保藏編號為CCTCC?NO：C2023350。
10.一種抗牛結(jié)核病的基因編輯牛的制備方法，其特征在于，包括步驟：將牛源細(xì)胞中的NmrAL2基因敲除或敲低，從而使內(nèi)源性NmrAL2基因的表達(dá)缺失或表達(dá)量降低，進(jìn)一步制備NmrAL2基因敲除或敲低的基因編輯牛。
11.一種篩選預(yù)防和/或治療牛結(jié)核病的候選化合物的方法，其特征在于，包括：設(shè)置測試組和對照組，所述測試組是在牛源細(xì)胞中添加測試化合物，所述對照組是在牛源細(xì)胞中不添加測試化合物，比較測試組和對照組細(xì)胞中NmrAL2_Bovine基因的表達(dá)量，篩選顯著降低NmrAL2_Bovine基因表達(dá)量的測試化合物。
...【技術(shù)特征摘要】
1.nmral2_bovine基因抑制劑的用途，其特征在于，用于制備預(yù)防或治療牛結(jié)核病的藥物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述nmral2_bovine基因抑制劑包括靶向敲低nmral2_bovine基因表達(dá)的sirna，或靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子或其表達(dá)載體。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述敲低sirna的靶向序列為5’-uggcuucugcuaagcuaccucugag-3’。
4.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子的序列為5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。
5.用于制備預(yù)防或治療牛結(jié)核病的藥物，其特征在于，包括靶向敲除或敲低nmral2_bovine基因的核酸分子或其表達(dá)載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于，所述靶向敲除nmral2_bovine基因的核酸分子的序列為5’-ggtatctcggttgctgatat-3’。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于，所述靶向敲低nmral2_bovine基因的核酸...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郭愛珍，彭永崇，陳穎鈺，謝勝松，周詩穎，孫欽，周信君，胡長敏，張磊，陳曦，
申請(專利權(quán))人：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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