【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及藥品質量檢測，尤其涉及一種基因毒雜質溴乙酸的檢測方法。
技術介紹
1、化合物1為靶向性urat1抑制劑、化學名為2-((5-溴-4-(2-氯-4-環(huán)丙基萘基-1-基)-4h-1,2,4-三氮唑-3-基)-硫)乙酸。urat1是一個重要的腎臟陰離子轉運體，位于腎小管的上皮細胞刷狀緣膜上，特異性地從腎小管中轉運尿酸到上皮細胞，是尿酸在腎小管中重吸收的主要動力。因此，如果能顯著抑制尿酸鹽轉運體urat1，將會增加體內尿酸的排泄，從而降低血尿酸水平，降低痛風發(fā)作的可能性。現(xiàn)有技術wo2017215589a1、wo2019114838a1、wo2021249468a1分別公開了化合物1的結構、晶型及其制備方法。
2、
3、2015年12月美國fda批準了阿斯利康第一個靶向性urat1抑制劑lesinurad，并批準了其200mg/day劑量與黃嘌呤氧化酶抑制劑xoi(如febuxostat等)聯(lián)用用于高尿酸血癥和痛風性關節(jié)炎的治療，但是聯(lián)合用藥與黃嘌呤氧化酶抑制劑單獨用藥對比，其附加效應并不十分顯著。同時，lesinurad400mg/day劑量未獲批準，原因在于高劑量下觀察到的顯著增加的毒副作用(腎相關的不良事件發(fā)生率特別是腎結石的發(fā)病率較高)，盡管高劑量下聯(lián)合用藥展現(xiàn)出較高的附加效應。因此，fda要求lesinurad標簽加注黑框警告，警示醫(yī)務人員lesinurad引起急性腎衰竭的風險，特別是在不與xoi聯(lián)用的情況下更常見，如果超批準劑量使用lesinurad，引起腎衰竭的風險更高。同時，fda要
4、因此，準確反映化合物1的原料藥或制劑中基因毒雜質溴乙酸的含量，為質量標準的制定提供合理的依據，開發(fā)一種基因毒雜質溴乙酸的檢測方法是非常必要的。
技術實現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本專利技術要解決的技術問題在于提供一種基因毒雜質溴乙酸的檢測方法，本專利技術提供的檢測方法分離度、專屬性和耐用性好，響應度高，結果準確。
2、本文術語“包括”、“包含”和“具有”之間可互換使用，旨在表示方案的包含性，意味著所述方案可存在除所列出的元素之外的其他元素。同時應當理解，在本文中使用“包括”、“包含”和“具有”描述，也提供“由……組成”方案。
3、本申請中，術語“和/或”，描述關聯(lián)對象的關聯(lián)關系，表示可以存在三種關系，例如，a和/或b，可以表示:單獨存在a，同時存在a和b，單獨存在b的情況。其中a,b可以是單數(shù)或者復數(shù)。
4、本申請中，“至少一個”是指一個或者多個，“多個”是指兩個或兩個以上。“以下至少一項(個)”或其類似表達，是指的這些項中的任意組合，包括單項(個)或復數(shù)項(個)的任意組合。
5、應理解，在本申請的各種實施例中，下述各過程的序號的大小并不意味著執(zhí)行順序的先后，部分或全部步驟可以并行執(zhí)行或先后執(zhí)行，各過程的執(zhí)行順序應以其功能和內在邏輯確定，而不應對本申請實施例的實施過程構成任何限定。
6、為了準確反映化合物1的原料藥或制劑中基因毒雜質的含量，可以為質量標準的制定提供合理的依據，以便能夠更好的控制和掌握產品質量，從而提高臨床用藥的安全性，本專利技術提供一種化合物1和基因毒雜質溴乙酸的檢測方法。該檢測方法具有較高的準確度和精密度，耐用性強，適合醫(yī)藥工業(yè)上化合物1基因毒雜質的檢查及質量控制。
7、本專利技術提供了一種化合物2-((5-溴-4-(2-氯-4-環(huán)丙基萘基-1-基)-4h-1,2,4-三氮唑-3-基)-硫)乙酸中基因毒雜質溴乙酸的檢測方法，包括如下步驟：
8、a)將化合物、溶劑、堿和衍生化試劑反應，得到供試品溶液；所述化合物為2-((5-溴-4-(2-氯-4-環(huán)丙基萘基-1-基)-4h-1,2,4-三氮唑-3-基)-硫)乙酸；
9、將溴乙酸、溶劑、堿和衍生化試劑反應，得到對照品溶液；
10、b)將供試品溶液和對照品溶液分別進行高效液相色譜檢測，得到供試品色譜圖和對照品色譜圖；
11、色譜參數(shù)如下：
12、流動相a：0.1％甲酸溶液，流動相b：乙腈；
13、洗脫程序為：
14、0～22min，a相60％、b相40％；
15、22～23min?a相60％～5％、b相40％～95％；
16、23～30min?a相5％、b相95％；
17、30～30.1min?a相5％～60％、b相95％～40％；
18、30.1～38min?a相60％、b相40％；
19、或者，洗脫程序為：
20、0～20min，a相60％、b相40％；
21、20～22min?a相60％～5％、b相40％～95％；
22、22～32min?a相5％、b相95％；
23、32～32.1min?a相5％～60％、b相95％～40％；
24、32.1～38min?a相60％、b相40％；
25、c)根據所述對照品濃度、所述對照品溶液在色譜圖中的峰面積以及供試品溶液中與所述對照品溶液相對應的成分在色譜圖中的峰面積，以外標法計算溴乙酸的含量。
26、溴乙酸的紫外吸收較弱，使用hplc或gc方法難以直接測定，因此本申請通過采用衍生的方法測定紫外吸收較強的溴乙酸衍生物，從而測定溴乙酸的含量。
27、本專利技術首先制備供試品溶液和對照品溶液，方法如下：
28、將化合物、溶劑、堿和衍生化試劑反應，得到供試品溶液；所述化合物為2-((5-溴-4-(2-氯-4-環(huán)丙基萘基-1-基)-4h-1,2,4-三氮唑-3-基)-硫)乙酸；
29、將溴乙酸、溶劑、堿和衍生化試劑反應，得到對照品溶液。
30、本申請中，待測對象為2-((5-溴-4-(2-氯-4-環(huán)丙基萘基-1-基)-4h-1,2,4-三氮唑-3-基)-硫)乙酸，結構如式(i)所示：
31、
32、本專利技術首先采用溶劑將衍生化試劑溶解，制備得到1mg/ml的衍生化試劑溶液；然后采用溶劑將待測對象溶解，再與堿、衍生化試劑溶液混合后反應，得到供試品溶液。
33、在一些可能的實現(xiàn)方式中，所述衍生化試劑選自4-苯基苯硫酚，所述堿選自三乙胺，所述溶劑選自乙腈。本專利技術人創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)，以4-苯基苯硫酚為衍生化試劑時，衍生化試劑中的雜質對目標衍生峰干擾最小。
34、在一些可能的實現(xiàn)方式中，所述化合物、溶劑、堿和衍生化試劑的質量-體積比為10mg：7～15ml：50～100μl、100～400μg，優(yōu)選為10mg：8～10ml：60～80μl、200～300μg，更優(yōu)選為10mg：9ml：70μl、250μg。在上述配比范圍內，本專利技術衍生化完全，峰面積無顯著性差異，目標峰分離度良好。
35、本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種化合物2-((5-溴-4-(2-氯-4-環(huán)丙基萘基-1-基)-4H-1,2,4-三氮唑-3-基)-硫)乙酸中基因毒雜質溴乙酸的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述衍生化試劑選自4-苯基苯硫酚；
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟A)中所述反應溫度為15～35℃；反應時間為20～40min。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟A)還包括，化合物、溶劑、堿和衍生化試劑反應后，采用甲酸調節(jié)pH值；和
5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述色譜柱為Luna?5uPhenyl-Hexyl，色譜柱規(guī)格為4.6×250mm，5μm；色譜柱溫度為40℃。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述流動相流速為0.8～1.2mL/min；進樣量為10～100μL。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測波長為278nm。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述溴乙酸的濃度在20
9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述溴乙酸的檢出限濃度為10.39ng/mL；定量限濃度為20.77ng/mL。
10.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟A)溶劑為乙腈。
...【技術特征摘要】
1.一種化合物2-((5-溴-4-(2-氯-4-環(huán)丙基萘基-1-基)-4h-1,2,4-三氮唑-3-基)-硫)乙酸中基因毒雜質溴乙酸的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述衍生化試劑選自4-苯基苯硫酚；
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)中所述反應溫度為15～35℃；反應時間為20～40min。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)還包括，化合物、溶劑、堿和衍生化試劑反應后，采用甲酸調節(jié)ph值；和
5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述色譜柱為luna?5uphenyl-hexyl，色譜...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：肖偉，王雪，張偉，何小蓮，王振中，郭慶明，章晨峰，
申請(專利權)人：江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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