【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物基因工程，涉及葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4及其編碼基因，同時本專利技術還公開了葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4的應用。
技術介紹
1、葡萄屬于世界四大水果之一，具有較高的營養價值和經濟價值，是我國重要的果樹作物，其種植歷史悠久，栽培面積大，并且產量持續增長。
2、近年來，全球變暖引起了世界釀酒葡萄種植業和葡萄酒產業的高度重視，它導致優質釀酒葡萄種植區發生空間移位，使一些釀酒葡萄栽培適宜區變為次適宜區，極大地影響著釀酒葡萄品種和葡萄酒種類的分布。并造成葡萄果實成熟提前、酸度降解過快、香氣積累不足，使葡萄酒酒精度過高、口感平淡、品質變差。
3、為應對全球變暖對葡萄酒產業的影響，研究了覆蓋遮陽網和使用抗蒸騰劑等栽培措施用于抑制葡萄果實糖分的快速積累和有機酸(主要是蘋果酸)的快速降解，已取得了一定的成效。
4、釀酒葡萄栽培面積占云南省75％以上的彌勒縣和丘北縣，面臨更為嚴重的情況，在釀酒葡萄(如水晶)轉熟期間面臨雨熱同季，不但酸度降解較快，而且糖的積累也不足。酸度不足會導致葡萄酒發酵液的ph偏高，微生物穩定性變差，為提高發酵液酸度和發酵期間的微生物穩定性，在葡萄酒釀造中不得不添加大量酒石酸來調整ph，有時通過加糖來彌補發酵液糖度不足以增加酒度，這些在很大程度上增加了企業的生產成本。
5、酒石酸是葡萄的特征酸，在釀酒葡萄轉熟期間具有良好的穩定性，是成熟葡萄和葡萄酒酸度的最重要貢獻者，約占葡萄酒有機酸總量的70％～90％，它影響著葡萄酒的酸感特征以及抗氧化、抗
6、但目前對酒石酸的生物調控尚缺乏足夠的理論依據，其合成通路中的酶還沒有被完全證實。以抗壞血酸為主要前體物質合成酒石酸是葡萄酒石酸生物合成的主要途徑，雖然從d-甘露糖合成抗壞血酸的l-半乳糖途徑已經非常清楚，但從抗壞血酸到酒石酸生物合成過程中的大部分酶還未被證實，對酒石酸的生物合成過程尚缺乏足夠了解。
7、因此如何克服現有技術的不足是目前生物基因工程
亟需解決的問題。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是為了解決現有技術的不足，提供一種葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4及其編碼基因與應用。
2、為實現上述目的，本專利技術采用的技術方案如下：
3、本專利技術第一方面提供葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4，所述葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
4、本專利技術第二方面提供編碼上述葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4的基因。
5、進一步，優選的是，所述基因的編碼序列是seq?id?no.2所示的核苷酸序列。
6、本專利技術第三方面提供含有上述基因的重組載體。
7、本專利技術第四方面提供一種用上述重組載體轉化得到的重組基因工程菌或轉基因植物組織。
8、本專利技術第五方面提供上述葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4在提高葡萄果實酒石酸含量中的應用。
9、基于本專利技術的研發，專利技術人推測本專利技術葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4能夠催化酒石酸半醛生成酒石酸。
10、葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，共531個氨基酸，屬于穩定蛋白、親水性蛋白、非分泌性蛋白和非跨膜蛋白，含有62個磷酸化位點。
11、本專利技術通過基因瞬時過表達和異源番茄遺傳轉化證實了vvtsad4基因在葡萄酒石酸生物合成中發揮著作用。
12、本專利技術與現有技術相比，其有益效果為：
13、本專利技術提供了一種葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4，其表達能夠促進酒石酸的大量積累，在提高葡萄果實品質方面發揮重要的作用。在葡萄果實中過表達vvtsad4，ta含量能提高18.8％。在番茄中過表達vvtsad4，ta含量能提高4.7倍左右。
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1.葡萄酒石酸生物合成關鍵酶VvTSAD4，其特征在于，所述葡萄酒石酸生物合成關鍵酶VvTSAD4的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.編碼權利要求1所述葡萄酒石酸生物合成關鍵酶VvTSAD4的基因。
3.根據權利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的編碼序列是SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。
4.含有權利要求2或3所示的基因的重組載體。
5.一種用權利要求4所述重組載體轉化得到的重組基因工程菌或轉基因植物組織。
6.權利要求1所述的葡萄酒石酸生物合成關鍵酶VvTSAD4在提高葡萄果實酒石酸含量中的應用。
【技術特征摘要】
1.葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4，其特征在于，所述葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
2.編碼權利要求1所述葡萄酒石酸生物合成關鍵酶vvtsad4的基因。
3.根據權利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的編碼序列...
【專利技術屬性】
技術研發人員：邵建輝，蘇靜，楊環齊，馬春花，喬琴，李夢涵，馮壘，張瑩瑩，
申請(專利權)人：云南農業大學，
類型：發明
國別省市：
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