【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及診斷標志物，尤其涉及一種用于胃癌篩查的tsrna標志物。
技術介紹
1、胃癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，其早期癥狀往往不明顯，容易被忽視。因此，胃癌的早期診斷對于提高治療效果和患者生存率至關重要。目前，胃癌的常見診斷方法包括以下幾種：
2、1.內鏡檢查(胃鏡)：通過插入帶有攝像頭的內鏡進入胃部，直接觀察胃黏膜的變化，能夠發現腫瘤、潰瘍、息肉等病變。內鏡檢查可以實時獲取組織活檢樣本，從而進行病理學分析，確診胃癌。
3、優點：可直接觀察胃部病變，早期發現胃癌的可能?？蛇M行活檢，提供準確的病理診斷。
4、缺點：需要專業設備和經驗豐富的醫生操作。對患者有一定的不適感，尤其是需要全身麻醉或局部麻醉的情況。
5、對于一些微小的病變或者上消化道遠端病變，可能存在漏診的風險。
6、2.影像學檢查(如ct、mri、超聲等)：通過射線掃描身體，生成胃部及其周圍結構的詳細圖像，用于檢測胃腫瘤的大小、位置、浸潤深度以及是否有轉移。
7、優點：可以提供胃癌腫瘤的全面信息，如腫瘤大小、形態、是否有轉移等。適合評估胃癌的分期，幫助治療方案的選擇。
8、缺點：對于小腫瘤或早期病變的敏感性較低，可能漏診。輻射風險，特別是對于需要頻繁檢查的患者。不能提供明確的組織學信息，需結合其他方法(如胃鏡或活檢)。
9、3.組織活檢：通過胃鏡或超聲引導下取胃部病變的組織進行病理學檢查，以確認胃癌的類型和分級。
10、優點：可以提供確診所需的組織學信息，是胃
11、缺點：需要侵入性操作，且對患者有一定的創傷性。病理學檢查可能需要一定時間，且存在樣本不充分的風險。
12、4.腫瘤標志物測定：是一種非侵入性的診斷方式，目前臨床常見的胃癌標志物包括癌胚抗原(cea)、糖類抗原19-9(ca19-9)、糖類抗原72-4(ca72-4)等。在胃癌患者體內這些標志物的濃度往往升高，但這些標志物對胃癌診斷的靈敏度和特異度較低，某些非腫瘤性疾病(如炎癥、良性胃病等)也可能導致傳統標志物水平升高。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是為了解決現有技術中缺少相關針對胃癌診斷的tsrna腫瘤標志物的技術問題。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用了如下技術方案：
3、3′-trfarg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用。
4、優選的，所述3′-trfarg為來源于trna-arg-cct-4-1的33bp長的3′-trna衍生片段。
5、優選的，所述3′-trfarg分子序列為seq?id?no:01。
6、優選的，所述胃癌診斷產品用于胃癌的早期篩查、精準治療、預后效果監測以及患者的長期隨訪。
7、本申請還提供了一種胃癌診斷產品，所述胃癌診斷產品中包括針對3′-trfarg的特異性引物，并使用qrt-pcr技術檢測該標志物的表達情況。
8、優選的，所述診斷產品為診斷試劑或診斷試劑盒。
9、優選的，其使用方法如下所示：
10、步驟1：總rna提取和互補dna(cdna)合成：待測血清總rna提取使用總rna純化試劑盒和旋轉柱分離試劑盒，并使用trizol試劑提取組織和細胞樣品中的總rna；
11、然后，通過revertaid?rt逆轉錄試劑盒將總rna逆轉錄為cdna，逆轉錄體系為10μl，將其在42℃下孵育60分鐘，并在70℃下滅活5分鐘；
12、步驟2：定量實時聚合酶鏈式反應(qrt-pcr)。
13、優選的，所述步驟2中，qrt-pcr反應在quantstudio?5上進行，總體系為20μl，包括10μl?chamq?universal?sybr?qpcr?mastermix、5μl?cdna、1μl引物和3μl無酶水；
14、所述引物包括3′-trfarg和rnu6b(u6)的正向和反向引物；
15、使用u6標化3′-trfarg的相對表達，并通過2-δδct方法計算表達水平。
16、與現有技術相比，本申請具備以下有益效果：
17、1、提高早期診斷靈敏度
18、傳統的胃癌診斷方法，如：胃鏡檢查、影像學檢查(ct、mri)和腫瘤標志物(如cea、ca19-9等)測定，通常在癌癥進展較為嚴重且腫瘤體積較大時才能做出診斷，影響了早期治愈的可能。相比之下，3′-trfarg在胃癌患者的血清中表現出顯著低表達，尤其是在早期胃癌診斷中具有較高的靈敏度，這意味著3′-trfarg可以幫助發現潛在的胃癌風險，特別是常規內鏡檢查不易發現的區域，從而提高早期治愈的可能，并改善患者預后。
19、2、聯合診斷提高診斷效能
20、通過與傳統腫瘤標志物的聯合使用，3′-trfarg的檢測能夠彌補傳統標志物在靈敏度或特異性方面的不足。顯著提高胃癌的診斷效率，尤其是對于胃癌與胃炎等其他胃部疾病的區分，減少誤診的可能。精確的診斷有助于減少不必要的侵入性檢查，如內鏡檢查或活檢，從而減輕患者的身體負擔和經濟負擔。
21、3、非侵入性檢測方法
22、傳統的胃癌診斷技術，如胃鏡或影像學檢查，往往是侵入性檢查，且需要專業設備和經驗豐富的醫生操作，常會造成患者不適。而3′-trfarg測定作為血清學檢測，可通過常規的血液檢查獲取腫瘤標志物，無需接受侵入性檢查，減少了患者的不適感和風險，提升了臨床應用的便捷性和患者的接受度。并可以作為初篩工具，尤其在胃癌高風險人群(如有胃癌家族史、長期慢性胃炎等)中進行定期監測。
23、4、與腫瘤分期和預后密切相關
24、研究顯示，3′-trfarg的表達水平與胃癌的多個臨床特征相關，如腫瘤分化、t分期、淋巴結轉移、tnm分期等，尤其是與腫瘤的侵襲性(如神經/血管侵犯)和轉移能力存在顯著相關性。使用該tsrna標志物不僅可以作為胃癌的診斷標志物，還可以為醫生提供更為精確的腫瘤診斷和分期信息，為個性化治療方案的制定提供了有力的支持，有助于選擇最合適的治療策略，改善患者的預后。
25、5、較強的可重復性與良好的穩定性
26、該研究開發了一種靈敏且重復性強的qrt-pcr檢測方法，并且通過標準曲線與線性范圍測試證明了在胃癌血清樣本中的可重復性和線性范圍。這表明tsrna標志物檢測方法不僅準確可靠，而且具備良好的批間一致性，可以為大規模篩查和臨床檢測提供有力支持。根據實驗結果，3′-trfarg在血清中的穩定性較高，能夠耐受常見的溫度變化和凍融循環。這表明其在體外檢測過程中具有良好的穩定性，適合長期儲存和運輸。這一特點使得3′-trfarg在臨床應用中更具可操作性，尤其是在偏遠地區或需要長期保存樣本的情況下。
27、綜上所述，通過篩選和測定3′-trfarg，為胃癌的早期診斷和預后評估提供了一種具有高靈敏度、高穩定性、非侵入性且與臨床進本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.3′-tRFArg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用。
2.根據權利要求1所述的3′-tRFArg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用，其特征在于：所述3′-tRFArg為來源于tRNA-Arg-CCT-4-1的33bp長的3′-tRNA衍生片段。
3.根據權利要求2所述的3′-tRFArg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用，其特征在于：所述3′-tRFArg分子序列為SEQ?ID?NO:01。
4.根據權利要求3所述的3′-tRFArg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用，其特征在于：所述胃癌診斷產品用于胃癌的早期篩查、精準治療、預后效果監測以及患者的長期隨訪。
5.一種胃癌診斷產品，其特征在于：所述胃癌診斷產品中包括針對3′-tRFArg的特異性引物，并使用qRT-PCR技術檢測該標志物的表達情況。
6.根據權利要求5所述的一種胃癌診斷產品，其特征在于：所述診斷產品為診斷試劑或診斷試劑盒。
7.根據權利要求6所述的一種胃癌診斷產品，其特征在于：其使用方法如下所示：
8.
...【技術特征摘要】
1.3′-trfarg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用。
2.根據權利要求1所述的3′-trfarg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用，其特征在于：所述3′-trfarg為來源于trna-arg-cct-4-1的33bp長的3′-trna衍生片段。
3.根據權利要求2所述的3′-trfarg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用，其特征在于：所述3′-trfarg分子序列為seq?id?no:01。
4.根據權利要求3所述的3′-trfarg作為血清標志物在制備胃癌診斷產品中的應用，其特征在于：所述胃癌診斷產品用于胃癌的早期篩查、精準治療、預后效果監測以及患者的長期隨訪。...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鞠少卿，丁睿，張玉，顧心亮，申嫻娟，
申請(專利權)人：南通大學附屬醫院，
類型：發明
國別省市：
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