【技術實現步驟摘要】
本申請涉及檢測，尤其涉及δ9-四氫大麻酚的檢測試劑及其制備方法和檢測方法。
技術介紹
1、大麻屬于桑科植物，是一種古老的栽培作物，因為它含有可以對中樞神經產生強烈刺激的δ9-四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol，thc)，因此與海洛因、可卡因并稱“世界三大毒品”。δ9-四氫大麻酚，分子量為314da，是一種小分子半抗原物質，也是大麻中研究較為深入的一種萜類化合物。thc在治療青光眼、瘧疾、便秘和風濕疾病以及疼痛等方面具有良好療效，并且最近研究發現四氫大麻酚具有廣泛的心血管活性。但是長期吸食大麻者，由于蓄積中毒會造成行為毒性反應，極易發生暴力和自殺傾向，故開展針對大麻毒品的分析研究工作具有非常重要的意義。
2、常見的δ9-四氫大麻酚檢測方法：
3、(1)酶聯免疫吸附測定(elisa)是一種較為簡單的檢測δ9-四氫大麻酚的方法。其基本原理是競爭結合原理：δ9-四氫大麻酚預先結合到固相載體表面；測定時，將受檢樣品和酶標抗體按一定程序與結合在固相載體上的δ9-四氫大麻酚反應形成抗原抗體復合物，如果樣品中存在δ9-四氫大麻酚，則它會與固相載體表面的δ9-四氫大麻酚競爭結合抗體。洗掉沒有結合的物質，經洗滌去除反應液中其他物質，加入底物進行顯色。樣品中的δ9-四氫大麻酚越多，最終孔底結合的參照抗原的抗體就越少，信號就越弱。elisa法定量準確性差、操作時間長、自動化程度低，多用于定性檢測；
4、(2)放射免疫測定(ria)是使用放射性標記的δ9-四氫大麻酚和樣品中非標記的待檢測的δ9-四氫大
5、(3)氣相色譜－質譜聯用法、液相色譜及液相色譜－質譜聯用法是檢測δ9-四氫大麻酚的金標準，可以檢測出樣品中極微量的δ9-四氫大麻酚。但是缺點是周期長，費用大，且儀器昂貴，不適合大規模推廣應用。氣相色譜技術較為成熟，應用也比較普遍，但受到流動相必須是氣體的限制，并且高溫往往使四氫大麻酚脫羧從而導致其定量分析結果偏高。
6、現有技術中δ9-四氫大麻酚檢測過程操作復雜、以及測定準確度低。
技術實現思路
1、本申請實施例的目的在于提出一種δ9-四氫大麻酚的檢測試劑及其制備方法和檢測方法，提高檢測的準確度。
2、為了解決上述技術問題，本申請實施例提供一種δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，采用了如下所述的技術方案：
3、一種δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，所述檢測試劑包括第一檢測試劑和第二檢測試劑，包括下述步驟：
4、將nacl溶解于緩沖液中，得到所述第一檢測試劑；
5、將牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球溶解于緩沖液中，得到所述第二檢測試劑。
6、進一步的，所述將nacl溶解于緩沖液中，得到所述第一檢測試劑的步驟包括：
7、將7.0～9.0g的nacl溶解于雙蒸水中，加入緩沖液；
8、加入雙蒸水定容至1000ml，搖勻后加入peg?6000和tween80，得到所述第一檢測試劑。
9、進一步的，所述將牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球溶解于緩沖液中，得到所述第二檢測試劑的步驟包括：
10、將牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球溶解于tris緩沖液、牛血清白蛋白、tween-20混合的溶液中，得到所述第二檢測試劑。
11、進一步的，所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球通過下述步驟制得：
12、制備牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體綴合物；
13、對乳膠微球進行活化操作，獲得羧基活化的乳膠微球；
14、偶聯所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體綴合物與所述羧基活化的乳膠微球，得到所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球。
15、進一步的，所述制備牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體綴合物的步驟包括：
16、使用2-亞氨基硫雜環戊烷試劑在nah2po3溶液中對牛血清白蛋白進行硫化，孵育，進行透析操作，獲得硫化的牛血清白蛋白；
17、將抗δ9-四氫大麻酚抗體溶解在含有磷酸二氫鈉、氯化鈉和edta的混合溶液中；
18、加入溶解有smcc的二甲基亞砜，混合均勻，進行透析操作，得到抗δ9-四氫大麻酚抗體連接體；
19、將所述抗δ9-四氫大麻酚抗體連接體與所述硫化的牛血清白蛋白進行混合反應，得到所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體綴合物。
20、進一步的，所述抗δ9-四氫大麻酚抗體連接體于所述硫化的牛血清白蛋白的摩爾比為1：10。
21、進一步的，所述對乳膠微球進行活化操作，獲得羧基活化的乳膠微球的步驟包括：
22、將乳膠微球、edc、nhs和pbs緩沖液均勻混合，離心后，去除上清液，得到所述羧基活化的乳膠微球。
23、進一步的，所述偶聯所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體綴合物與所述羧基活化的乳膠微球，得到所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球的步驟包括：
24、在tween-20溶液中，將所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體綴合物與所述羧基活化的乳膠微球混合；
25、室溫孵育，離心后去除上清液，得到所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球。
26、為了解決上述技術問題，本申請實施例還提供一種δ9-四氫大麻酚(thc)的檢測試劑，采用了如下所述的技術方案：
27、一種δ9-四氫大麻酚(thc)的檢測試劑，上述的δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法制備得到。
28、為了解決上述技術問題，本申請實施例還提供檢測δ9-四氫大麻酚的方法，使用上述的檢測試劑，采用了如下所述的技術方案：
29、一種檢測δ9-四氫大麻酚的方法，包括下述步驟：
30、向所述第一檢測試劑中加入待測樣本，孵育后測定吸光度，得到初始吸光度；
31、加入所述第二檢測試劑，孵育后測定吸光度，得到反應吸光度；
32、根據所述初始吸光度和所述反應吸光度計算得到δ9-四氫大麻酚的濃度。
33、與現有技術相比，本申請實施例主要有以下有益效果：
34、本申請采用的方法為膠乳免疫比濁法，操作簡便、快速、靈敏度高、準確性好、適合于自動化，應用廣泛，并且用全自動生化分析儀對小分子物質和大分子物質都能高通量快速測定。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述檢測試劑包括第一檢測試劑和第二檢測試劑，包括下述步驟：
2.根據權利要求1所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述將NaCl溶解于緩沖液中，得到所述第一檢測試劑的步驟包括：
3.根據權利要求1所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述將牛血清白蛋白-抗Δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球溶解于緩沖液中，得到所述第二檢測試劑的步驟包括：
4.根據權利要求1所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述牛血清白蛋白-抗Δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球通過下述步驟制得：
5.根據權利要求4所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述制備牛血清白蛋白-抗Δ9-四氫大麻酚抗體綴合物的步驟包括：
6.根據權利要求5所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述抗Δ9-四氫大麻酚抗體連接體于所述硫化的牛血清白蛋白的摩爾比為1：10。
7.根據權利要求4所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試
8.根據權利要求4所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述偶聯所述牛血清白蛋白-抗Δ9-四氫大麻酚抗體綴合物與所述羧基活化的乳膠微球，得到所述牛血清白蛋白-抗Δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球的步驟包括：
9.一種Δ9-四氫大麻酚(THC)的檢測試劑，其特征在于，采用如權利要求1至8任意一項所述的Δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法制備得到。
10.一種檢測Δ9-四氫大麻酚的方法，使用如權利要求9所述的檢測試劑，其特征在于，包括下述步驟：
...【技術特征摘要】
1.一種δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述檢測試劑包括第一檢測試劑和第二檢測試劑，包括下述步驟：
2.根據權利要求1所述的δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述將nacl溶解于緩沖液中，得到所述第一檢測試劑的步驟包括：
3.根據權利要求1所述的δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述將牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球溶解于緩沖液中，得到所述第二檢測試劑的步驟包括：
4.根據權利要求1所述的δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體固定化乳膠微球通過下述步驟制得：
5.根據權利要求4所述的δ9-四氫大麻酚的檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述制備牛血清白蛋白-抗δ9-四氫大麻酚抗體綴合物的步驟包括：
6.根據權...
【專利技術屬性】
技術研發人員：蔣析文，齊文闖，吳潤鋒，段少卿，余玉英，朱浪，
申請(專利權)人：廣州達安基因股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。