【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種ag-dc-cik細(xì)胞及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，屬于細(xì)胞治療。
技術(shù)介紹
1、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine?induced?killer?cells，cik細(xì)胞）是將人體外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外用細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)的一群以cd3+cd56為主的異質(zhì)細(xì)胞群，其既具有他淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性，又具有nk細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）的非mih（主要組織）限制性腫瘤殺傷能力，又被稱為nk細(xì)胞樣t淋巴細(xì)胞。cik細(xì)胞具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對正常組織的毒性低等優(yōu)勢，是目前臨床上廣泛使用的過繼性免疫治療細(xì)胞，這也推進(jìn)了cik細(xì)胞在體外發(fā)育方法的發(fā)展以及臨床應(yīng)用方面仍在不斷進(jìn)步和完善。
2、體外培養(yǎng)cik細(xì)胞的關(guān)鍵在于提供適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件和生長因子，以促進(jìn)其擴(kuò)增并提高其活性。近年來，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的改進(jìn)包括優(yōu)化培養(yǎng)基成分、生長因子的使用和細(xì)胞密度的控制，用來提高cik細(xì)胞的生長速率和殺傷活性。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，人們利用基因工程技術(shù)，通過轉(zhuǎn)染抗體基因等，使cik細(xì)胞具有了更強(qiáng)的腫瘤識別能力和殺傷能力。鑒于不同患者對cik細(xì)胞治療的響應(yīng)可能存在差異，個(gè)體化治療策略逐漸受到關(guān)注。個(gè)體化治療可以根據(jù)患者的免疫特征和腫瘤特征調(diào)整cik細(xì)胞治療方案，以提高治療的針對性和效果。
3、隨著發(fā)展cik細(xì)胞治療已被證明在某些腫瘤類型中具有一定的療效，但在其他類型的腫瘤中效果可能有限。因此，研究人員已經(jīng)探索將cik細(xì)胞治療與其他治療方法（如化療、放療、免疫檢查點(diǎn)抑制劑等）或其他免疫細(xì)胞（如樹突狀細(xì)胞（
4、為了更好地發(fā)揮dc-cik細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的抑制活性，研究人員通過多種策略進(jìn)行了研究。比如，與化療或放療等傳統(tǒng)治療方法聯(lián)合應(yīng)用，與中藥提取物聯(lián)合應(yīng)用。還有的研究人員通過對dc細(xì)胞從基因水平進(jìn)行改造，敲低或高表達(dá)某種基因獲得一種抗原提呈能力更強(qiáng)的dc細(xì)胞，進(jìn)而與cik細(xì)胞培養(yǎng)后獲得對腫瘤細(xì)胞抑制作用更強(qiáng)的dc-cik細(xì)胞。而在研究中人們發(fā)現(xiàn)，通過選擇合適的負(fù)載物對dc細(xì)胞負(fù)載后再與cik細(xì)胞共培養(yǎng)，可以有效提高cik細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷力。
5、wang等[1]研究者用自體腫瘤細(xì)胞裂解物（ag）脈沖dc，以產(chǎn)生ag-dc。培養(yǎng)t淋巴細(xì)胞以制備cik細(xì)胞，將ag-dc與cik細(xì)胞共培養(yǎng)制備ag-dc-cik疫苗，探究對晚期腎細(xì)胞癌患者的臨床療效，并檢測其免疫功能和不良反應(yīng)。但是其制備的dc-cik細(xì)胞僅對腎細(xì)胞癌這一種癌癥具有顯著的特異性殺傷效果，存在不具備廣譜殺瘤效果的問題。
6、公告日為2022年10月25日、授權(quán)公告號為cn111996166b的中國專利技術(shù)專利公開了一種負(fù)載的dc細(xì)胞、dc-cik細(xì)胞及在腫瘤細(xì)胞治療方面的應(yīng)用，具體公開了將2'-巖藻糖基乳糖負(fù)載的dc細(xì)胞和cik細(xì)胞共培養(yǎng)獲得dc-cik細(xì)胞，并證明與對照組相比，其制備的dc-cik細(xì)胞在小鼠體內(nèi)能有效提高對肝癌細(xì)胞的殺傷力，抑制腫瘤的形成。但是，其制備的dc-cik細(xì)胞僅能證明其對肝癌細(xì)胞有更強(qiáng)的殺傷力，由于不同腫瘤的異質(zhì)性較強(qiáng)，其是否具有廣譜的腫瘤殺傷是未知的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的第一個(gè)目的是提供一種ag-dc-cik細(xì)胞，為現(xiàn)有技術(shù)提供一種殺傷能力較強(qiáng)且具有廣譜腫瘤殺傷能力的ag-dc-cik細(xì)胞。
2、本專利技術(shù)的第二個(gè)目的是提供ag-dc-cik細(xì)胞在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，為現(xiàn)有技術(shù)腫瘤藥物的制備提供一種新的可利用的資源。
3、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)中一種ag-dc-cik細(xì)胞的技術(shù)方案是：
4、一種ag-dc-cik細(xì)胞，所述ag-dc-cik細(xì)胞由ag-dc和cik細(xì)胞共培養(yǎng)獲得；所述ag-dc細(xì)胞為wt1抗原、黏液糖蛋白1和poly(i:c)共同負(fù)載的dc。
5、上述技術(shù)方案的有益效果在于：本專利技術(shù)一種ag-dc-cik細(xì)胞為開拓型專利技術(shù)。本專利技術(shù)將wt1抗原、黏液糖蛋白1和poly(i:c)共同負(fù)載在樹突狀細(xì)胞（dc）上獲得ag-dc，將ag-dc與cik細(xì)胞共培養(yǎng)獲得一種dc-cik（ag-dc-cik）細(xì)胞，經(jīng)過驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，可以實(shí)現(xiàn)對包括宮頸癌、結(jié)直腸癌、胃癌、白血病在內(nèi)的多種腫瘤的殺傷作用。并且，相比于沒有負(fù)載的dc與cik細(xì)胞共培養(yǎng)獲得的dc-cik細(xì)胞，對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用顯著提高。
6、具體地，wt1（wilm’s?tumor?gene）是一種編碼蛋白質(zhì)的基因，最初在兒童腎母細(xì)胞瘤（wilms腫瘤）中發(fā)現(xiàn)，并且在多種腫瘤類型中過度表達(dá)。wt1已成為癌癥診斷和治療研究的熱點(diǎn)，其過度表達(dá)與腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。
7、muc1（黏液糖蛋白1）是一種表達(dá)在多種上皮細(xì)胞表面的糖蛋白，它具有多種生物學(xué)功能，包括細(xì)胞黏附、信號傳導(dǎo)和免疫調(diào)節(jié)。muc1在多種腫瘤中高度表達(dá)，并且與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
8、poly(i:c)是一種合成的雙鏈rna分子，為模擬病毒感染時(shí)產(chǎn)生的天然雙鏈rna，可被認(rèn)為是一種免疫活化劑。poly(i:c)通過模擬病毒感染引發(fā)免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，包括激活天然免疫系統(tǒng)和促進(jìn)抗原呈遞細(xì)胞的活化，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答。
9、作為進(jìn)一步地改進(jìn)，使用外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得所述ag-dc和cik細(xì)胞。
10、作為進(jìn)一步地改進(jìn)，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)間為7~8天。
11、作為進(jìn)一步地改進(jìn)，所述負(fù)載為在ag-dc誘導(dǎo)培養(yǎng)的過程中，加入wt1抗原、黏液糖蛋白1和poly(i:c)。
12、作為進(jìn)一步地改進(jìn)，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)，wt1的終濃度為30-75ng/ml、黏液糖蛋白1的終濃度為30-75ng/ml、poly(i本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種Ag-DC-CIK細(xì)胞，其特征在于：所述Ag-DC-CIK細(xì)胞由Ag-DC和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)獲得；所述Ag-DC為WT1抗原、黏液糖蛋白1和Poly(I:C)共同負(fù)載的DC。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Ag-DC-CIK細(xì)胞，其特征在于：使用外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得所述Ag-DC和CIK細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的Ag-DC-CIK細(xì)胞，其特征在于：所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)間為7~8天。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的Ag-DC-CIK細(xì)胞，其特征在于：所述負(fù)載為在Ag-DC誘導(dǎo)培養(yǎng)的過程中，加入WT1抗原、黏液糖蛋白1和Poly(I:C)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的Ag-DC-CIK細(xì)胞，其特征在于：所述誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)，WT1的終濃度為30-75ng/mL、黏液糖蛋白1的終濃度為30-75ng/mL、Poly(I:C)的終濃度為30-75μg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的Ag-DC-CIK細(xì)胞，其特征在于：共培養(yǎng)時(shí)，所述Ag-DC數(shù)量和CIK細(xì)胞數(shù)量的比例為1：（10~15）。
7.一種如權(quán)利要
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的Ag-DC-CIK細(xì)胞在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述腫瘤包括宮頸癌、結(jié)直腸癌、胃癌、白血病。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種ag-dc-cik細(xì)胞，其特征在于：所述ag-dc-cik細(xì)胞由ag-dc和cik細(xì)胞共培養(yǎng)獲得；所述ag-dc為wt1抗原、黏液糖蛋白1和poly(i:c)共同負(fù)載的dc。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ag-dc-cik細(xì)胞，其特征在于：使用外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得所述ag-dc和cik細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的ag-dc-cik細(xì)胞，其特征在于：所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)間為7~8天。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的ag-dc-cik細(xì)胞，其特征在于：所述負(fù)載為在ag-dc誘導(dǎo)培養(yǎng)的過程中，加入wt1抗原、黏液糖蛋白1和poly(i:c)。
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉慧敏，董靚靚，常洪濤，仝彩玲，
申請(專利權(quán))人：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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