【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于免疫醫(yī)藥，具體涉及一種基于pcv2?vlps的納米抗原展示平臺及制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、pcv2是一種重要的免疫抑制性病毒，它可以損害豬的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致混合或繼發(fā)感染，對生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成嚴重威脅，曾導(dǎo)致重大經(jīng)濟損失。目前尚無針對pcv2的有效藥物，因此，接種疫苗成為了控制pcv2感染的最有效方法。cap蛋白是pcv2已知的唯一結(jié)構(gòu)蛋白和主要免疫原，它可以在體外自組裝成vlps，由于其突出的免疫原性，常被作為亞單位疫苗開發(fā)的理想抗原平臺。
2、pcv2常與豬流感病毒(siv)、豬繁殖和呼吸障礙綜合癥病毒(prrsv)、豬肺炎支原體(mhp)等豬的重要病原造成嚴重混合感染，但目前市面上的商品化聯(lián)苗技術(shù)過于傳統(tǒng)且效果不佳，所以開發(fā)一種更加高效經(jīng)濟的聯(lián)苗技術(shù)迫在眉睫。本專利技術(shù)制備的納米平臺可根據(jù)需求在其表面展示任意抗原或標簽，為研制多聯(lián)多價及馬賽克疫苗提供了一種新策略，滿足“一針防多病”的需求，對新型疫苗研發(fā)提供新思路，為開發(fā)一種更高效、經(jīng)濟的聯(lián)苗技術(shù)提供了新的可能性，這不僅有助于控制pcv2與其他病原引起的混合或繼發(fā)感染，也有望降低生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟損失。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供了一種基于pcv2?vlps的納米抗原展示平臺及制備方法和應(yīng)用，可在所述納米抗原展示平臺上展示不同種病毒抗原，從而構(gòu)建多聯(lián)疫苗。
2、本專利技術(shù)提供了一種豬圓環(huán)病毒2衍生的納米顆粒，所述納米顆粒由c端融合spytag003的豬圓環(huán)病毒2的cap蛋白組裝而成
3、本專利技術(shù)提供了上述納米顆粒的制備方法，包括以下步驟：
4、(1)將spytag003蛋白的編碼基因與cap蛋白的編碼基因的3’端連接，得cap-spytag003片段；
5、(2)將所述cap-spytag003片段插入表達載體中構(gòu)建重組表達載體；
6、(3)利用所述重組表達載體轉(zhuǎn)化表達細胞，誘導(dǎo)表達并純化得到cap-spyt重組蛋白；
7、(4)將所述cap-spyt重組蛋白超濾濃縮并透析，構(gòu)建得到納米顆粒cap-spytvlps。
8、本專利技術(shù)一個具體實施方式中，步驟(2)所述表達載體包括原核表達載體。
9、本專利技術(shù)一個具體實施方式中，步驟(4)所述超濾濃縮包括將所述cap-spyt重組蛋白置于蛋白超濾管中進行離心，濃縮至1.0mg/ml；
10、所述透析所用的透析袋的分子量mw不高于3500，透析液為5×pbs溶液。
11、本專利技術(shù)一個具體實施方式中，在步驟(4)構(gòu)建得到納米顆粒cap-spytvlps后，還包括純化。
12、本專利技術(shù)還提供了上述納米顆粒在制備展示病毒抗原平臺中的應(yīng)用。
13、本專利技術(shù)還提供了一種多聯(lián)疫苗，包括上述納米顆粒和經(jīng)表達得到的重組蛋白；
14、所述重組蛋白的編碼基因由病毒抗原基因通過linker和cap-spycatcher003片段連接后得到。
15、本專利技術(shù)一個具體實施方式中，所述納米顆粒和重組蛋白的摩爾比為1:1。
16、本專利技術(shù)還提供了上述多聯(lián)疫苗的制備方法，包括將所述納米顆粒和重組蛋白混合后進行共價結(jié)合。
17、有益效果：本專利技術(shù)提供了一種豬圓環(huán)病毒2衍生的納米顆粒，所述納米顆粒由c端融合spytag003的豬圓環(huán)病毒2的cap蛋白組裝而成。本專利技術(shù)基于spytag003和spycatcher003可共價結(jié)合的原理，將spytag003與cap蛋白融合表達，使得在cap?vlp的表面攜帶spytag003標簽，將其他種病毒抗原與spycatcher003融合表達后，可通過spycatcher003和spytag003的共價結(jié)合作用搭載在capvlp表面，形成二聯(lián)亞單位疫苗。
18、本專利技術(shù)基于原核表達的pcv2?vlps技術(shù)，利用spytag003/spycatcher003系統(tǒng)，將其他病毒抗原蛋白搭載在pcv2?vlps上面，構(gòu)建一種納米抗原展示平臺，并開展免疫原性研究及攻毒保護試驗，為研制基于pcv2?vlps技術(shù)的多聯(lián)亞單位疫苗及相關(guān)生物制品奠定理論基礎(chǔ)。
19、本專利技術(shù)利用pcv2?cap蛋白vlp的自組裝能力和spytag003/spycatcher003蛋白質(zhì)組裝體系相結(jié)合構(gòu)建一種納米抗原展示納米平臺cap-spytvlps，該平臺可根據(jù)需求在其表面展示任意抗原或標簽。本專利技術(shù)實施例構(gòu)建了展示h3n2亞型siv?ha1抗原的cap-spytvlps，經(jīng)證實可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較好的體液免疫及攻毒保護能力，為pcv2、siv聯(lián)合疫苗研發(fā)提供了理論基礎(chǔ)，為更多新型聯(lián)苗或馬賽克疫苗研發(fā)提供新思路。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護點】
1.一種豬圓環(huán)病毒2衍生的納米顆粒，其特征在于，所述納米顆粒由C端融合SpyTag003的豬圓環(huán)病毒2的Cap蛋白組裝而成。
2.權(quán)利要求1所述納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟(2)所述表達載體包括原核表達載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟(4)所述超濾濃縮包括將所述Cap-SpyT重組蛋白濃縮至1.0mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟(4)所述透析所用的透析袋的分子量MW不高于3500，透析液為5×PBS溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，在步驟(4)構(gòu)建得到納米顆粒Cap-SpyTVLPs后，還包括純化。
7.權(quán)利要求1所述納米顆粒在制備展示病毒抗原平臺中的應(yīng)用。
8.一種多聯(lián)疫苗，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述納米顆粒和經(jīng)表達得到的重組蛋白；
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述多聯(lián)疫苗，其特征在于，所述納米顆粒和重組蛋白的摩爾比為1:1。
10.權(quán)利要
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種豬圓環(huán)病毒2衍生的納米顆粒，其特征在于，所述納米顆粒由c端融合spytag003的豬圓環(huán)病毒2的cap蛋白組裝而成。
2.權(quán)利要求1所述納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟(2)所述表達載體包括原核表達載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟(4)所述超濾濃縮包括將所述cap-spyt重組蛋白濃縮至1.0mg/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟(4)所述透析所用的透析袋的分子量mw不高于...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：顧金燕，司維，周繼勇，陳文鏡，徐玲蕓，胡婧宇，徐珂莎，金玉蘭，顏焰，
申請(專利權(quán))人：浙江大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。