【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及納米疫苗，尤其是涉及一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗及其制備方法。
技術介紹
1、在過去30年中，皮膚惡性黑色素瘤(cutaneousmalignantmelanoma，cmm)的發病率持續穩步上升，其發病率的增長速度幾乎超過大部分惡性腫瘤。2004年以來，黑色素瘤的發病率以每年3％的速度增長。目前，cmm的臨床治療以手術切除、放化療為主。但是傳統的放、化療在治療過程中會給正常細胞帶來損傷，副作用多。因此，尋找cmm的有效治療方法對于臨床醫學具有重大意義。
2、隨著科技的進步與發展，腫瘤免疫療法作為一種新型治療方法，在惡性腫瘤的臨床治療中已成為一種重要手段。抗腫瘤免疫療法通過作用于人體的免疫系統，抑制或者消滅腫瘤細胞，不存在耐藥、局部治療損傷及損害人體免疫系統等副作用。腫瘤疫苗通過將腫瘤抗原遞送到抗原提呈細胞(apcs)，激活腫瘤的特異性免疫反應，可以誘導有效的抗腫瘤免疫和長期免疫記憶，從而抑制腫瘤的生長、復發和轉移。在此過程中，抗原和佐劑是引起免疫應答并增強其效果的關鍵成分。然而，由于其存在固有淋巴引流效率低、非腫瘤部位分布導致免疫相關不良反應等問題，腫瘤疫苗的臨床轉化仍然具有挑戰性。因此，開發有效的遞送系統來實現抗原和佐劑的高效、靶向遞送至關重要。
3、基于納米材料構建的腫瘤疫苗(即納米疫苗)，可以有效解決抗原和佐劑共遞送的效率問題。通過靜電相互作用、疏水相互作用以及共價連接等方法來制備納米疫苗，實現抗原和佐劑的共同遞送，并可以特異性靶向apc，誘導抗原交叉呈遞或
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗及其制備方法，以提供一種針對cmm的納米疫苗，并解決msns在生理條件下降解困難、容易在體內積累，存在潛在安全風險的問題。
2、為實現上述目的，本專利技術提供一種ova@mmsns@bm-mannos?e仿生納米疫苗，所述ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗為細菌質膜包覆的納米材料。
3、優選的，所述納米材料為負載卵清蛋白的金屬摻雜介孔二氧化硅納米顆粒。
4、優選的，所述金屬摻雜介孔二氧化硅納米顆粒為錳摻雜介孔二氧化硅納米顆粒。
5、一種可視化fitc-ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，在上述一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗所用的卵清蛋白上修飾異硫氰酸熒光素酯。
6、一種如上所述的ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗的制備方法，步驟如下：
7、s1、制備介孔二氧化硅納米顆粒，msns；
8、s2、制備錳摻雜介孔二氧化硅納米顆粒，mmsns；
9、s3、將制備的錳摻雜介孔二氧化硅納米顆粒負載卵清蛋白，得到負載卵清蛋白的mmsns，ova@mmsns；
10、s4、制備細菌質膜，bm；
11、s5、將ova@mmsns包覆bm，獲得ova@mmsns@bm；
12、s6、制備ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗。
13、優選的，所述步驟s3中ova@mmsns的制備方法為：將卵清蛋白用ddh2o溶解，加入mmsns粉末，超聲10min，攪拌條件下室溫反應24h，離心收集沉淀，用ddh2o洗滌3次即可。
14、優選的，所述卵清蛋白：ddh2o：mmsns的質量體積比為40mg:1ml:4mg。
15、優選的，所述步驟s5中制備ova@mmsns@bm采用機械共擠壓法，具體為：將bm與ova@mmsns以質量比為1:1混合后，超聲20min，然后分別通過400nm、200nm的聚碳酸酯膜，來回擠出15-20次即可。
16、優選的，所述步驟s6中制備ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗的方法為：將甘露糖分子溶于ddh2o中，然后加入ova@mmsns@bm反應，反應結束后離心洗滌即可。
17、優選的，甘露糖：ddh2o：ova@mmsns@bm的質量體積比為1mg:1ml:10mg；加入ova@mmsns@bm后于37℃反應4h。
18、因此，本專利技術提供的一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗及其制備方法，其具體技術效果如下：
19、(1)本專利技術制備的ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，細胞攝取能力強，儲存穩定性好，于4℃下儲存7天仍未發生團聚；溶血性低，即使濃度為100μg/ml時，仍能保持6％以下的溶血率；細胞毒性小，濃度為0-100μg/ml范圍內，dc2.4細胞的活性均≥85％，體外安全性高；體內實驗表明其對小鼠未產生明顯毒性；
20、(2)本專利技術制備的ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，利用mmsns?ph響應的特點，可以在酸性環境下崩解，加速其內部負載藥物的釋放，同時，釋放的mn2+可用于磁共振成像；
21、(2)本專利技術制備的fitc-ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，可以實現納米疫苗的可視化遞送，方便觀察和研究；
22、(3)本專利技術制備的ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，水合粒徑為220nm；dc2.4細胞對納米疫苗存在持續攝取、濃度依賴現象，在2h時基本達到飽和，具有在磁共振成像領域應用的潛能；對dc2.4的激活效率高；具有靶向遞送能力；
23、(4)本專利技術提供的仿生納米疫苗制備方法簡單，易操作，所用原材料安全無毒或毒性低，對環境和操作工人安全。
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1.一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗，其特征在于：所述OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗為細菌質膜包覆的納米材料。
2.根據權利要求1所述的一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗，其特征在于：所述納米材料為負載卵清蛋白的金屬摻雜介孔二氧化硅納米顆粒。
3.根據權利要求2所述的一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗，其特征在于：所述金屬摻雜介孔二氧化硅納米顆粒為錳摻雜介孔二氧化硅納米顆粒。
4.一種可視化FITC-OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗，其特征在于：在權利要求1-3任一項所述的一種OVA@MMS?Ns@BM-Mannose仿生納米疫苗所用的卵清蛋白上修飾異硫氰酸熒光素酯。
5.一種如權利要求1-3任一項所述的OVA@MMSNs@BM-Ma?nnose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，步驟如下：
6.根據權利要求5所述的一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中OV
7.根據權利要求6所述的一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于：所述卵清蛋白：ddH2O：MMSNs的質量體積比為40mg:1mL:4mg。
8.根據權利要求5所述的一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟S5中制備OVA@MMSNs@BM采用機械共擠壓法，具體為：將BM與OVA@MMSNs以質量比為1:1混合后，超聲20min，然后分別通過400nm、200nm的聚碳酸酯膜，來回擠出15-20次即可。
9.根據權利要求5所述的一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟S6中制備OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗的方法為：將甘露糖分子溶于ddH2O中，然后加入OVA@MMSNs@BM反應，反應結束后離心洗滌即可。
10.根據權利要求9所述的一種OVA@MMSNs@BM-Mannose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于：甘露糖：ddH2O：OVA@MMSNs@BM的質量體積比為1mg:1mL:10mg；加入OVA@MMS?Ns@BM后于37℃反應4h。
...【技術特征摘要】
1.一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，其特征在于：所述ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗為細菌質膜包覆的納米材料。
2.根據權利要求1所述的一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，其特征在于：所述納米材料為負載卵清蛋白的金屬摻雜介孔二氧化硅納米顆粒。
3.根據權利要求2所述的一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，其特征在于：所述金屬摻雜介孔二氧化硅納米顆粒為錳摻雜介孔二氧化硅納米顆粒。
4.一種可視化fitc-ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗，其特征在于：在權利要求1-3任一項所述的一種ova@mms?ns@bm-mannose仿生納米疫苗所用的卵清蛋白上修飾異硫氰酸熒光素酯。
5.一種如權利要求1-3任一項所述的ova@mmsns@bm-ma?nnose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，步驟如下：
6.根據權利要求5所述的一種ova@mmsns@bm-mannose仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟s3中ova@mmsns的制備方法為：將卵清蛋白用ddh2o溶解，加入mmsns粉末，超聲10min，攪拌條件下室溫反應24...
【專利技術屬性】
技術研發人員：葉碩，張英英，田雨，郭睿，馬振，
申請(專利權)人：徐州醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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