【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于檢測，具體涉及一種高比表面血液吸附材料體外動態溶血的評價方法。
技術介紹
1、國家藥品監督管理局、國家標準化管理委員會2022年發布的國家標準gb/t16886.4-2022《醫療器械生物學評價?第1部分：風險管理過程中的評價與試驗》中明確，生物相容性的定義為：某一醫療器械或材料在特定應用中具有適應宿主反應的能力。血液相容性是生物相容性評價的重要部分，醫療器械與血液或血液成分之間的相互作用，可能會導致對人體血液、器官、組織或器械性能等多方面的影響，直接關系到該類器械臨床應用的安全性和有效性。我們期望開發出生物相容性、血液相容性更好的體外循環類醫療器械產品以降低在其臨床使用時人體產生的不良反應。因此，臨床前的器械與血液相互作用評價與試驗是醫療器械生物學評價中非常重要的內容。
2、血液相容性包括材料與血液接觸后血栓形成、白細胞活化、溶血等細胞水平反應；凝血系統激活、纖溶系統激活、補體活化等蛋白水平反應；aｄｐ、血小板因子釋放等一系列分子水平反應，其涉及范圍廣泛，反應機制復雜，需要從不同層次和不同水平多方面進行評價。其中，溶血試驗是醫療器械血液相容性測試一項普遍的、重要的篩查測試，目前醫療器械溶血試驗相關的國際標準有iso?10993-4、astm?f?756、國內標準有gb/t?16886.4、gb/t16175、gb/t?14233.2及yy/t?1651.1等。醫療器械的溶血作用一般分為滲透壓介導的溶血、材料介導的溶血和機械力介導的溶血。對于材料介導的溶血試驗可分為直接接觸法與間接接觸法，gb/t?16
3、為了更真實反映器械臨床使用的溶血反應，理想的體外模型為血液吸附產品成品通過體外循環管路與血泵連接為循環通路，在臨床使用流速及治療時間下進行全血灌流。但采用該種模型進行評價的劣勢在于：檢測樣品需制成成品，對實驗室研發階段的材料無法快速檢測、血液處理劑量較大、投入成本較高。因此亟需建立一種體外溶血評價方法，可以更等效模擬高比表面積血液吸附材料在臨床使用時與血液接觸比例、更準確指示材料的溶血性能，快速簡便進行檢測的前提下進一步節約評價成本。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于克服現有技術的至少一個不足，提供一種高比表面血液吸附材料體外動態溶血的評價方法。
2、本專利技術所采取的技術方案是：
3、一種高比表面血液吸附材料體外動態溶血評價方法，包括如下步驟：
4、使用層析柱模擬血液吸附產品，所述層析柱中裝入充裝量為v'的待測吸附劑作為試驗樣品，將體積為v0'的試驗血液加入至錐形瓶中，然后與循環管路、層析柱、滾壓泵循環連接，打開滾壓泵，按照體積流速vml'循環相應的時間t'，其中：
5、、、、，式中，
6、d'為層析柱直徑，h為吸附產品柱高h，vcm為吸附產品線性流速，t0為血液保留時間，?t為吸附產品單位血液接觸吸附劑的總時間，v0'為層析柱用血量，d'為預先設定的值、h、t0、t為吸附產品的已知參數；
7、選用純化水作為陽性對照、生理鹽水作為陰性對照，加入至錐形瓶中，然后與循環管路、層析柱、滾壓泵循環連接，對照組層析柱中不填充吸附劑，打開滾壓泵，按照計算體積流速vml'循環相應的時間t'；
8、循環結束，分別收集循環體系內所有液體于錐形瓶中，取適量液體離心獲取上清，采用紫外分光光度儀于545?nm波長處測定上清液吸光度，計算溶血率hr，
9、，式中：
10、hr--血液吸附材料溶血率，%
11、a--試驗樣品組吸光度；
12、b--陰性對照組吸光度；
13、c--陽性對照組吸光度。
14、在一些評價方法的實例中，所述試驗血液為稀釋抗凝兔血，試驗樣品組、陰性對照組使用生理鹽水稀釋，陽性對照組使用純化水稀釋。
15、在一些評價方法的實例中，所述試驗樣品組稀釋所用待測吸附劑質量與生理鹽水體積質量比為0.2～0.5?g/ml，所用稀釋抗凝兔血與生理鹽水體積比為（1～75）:50。優選的，待測吸附劑質量與生理鹽水體積質量比為0.5?g/ml。
16、在一些評價方法的實例中，所述試驗血液的用量v0'為充裝待測吸附劑質量的5～12.5倍。優選的，所述試驗血液的用量v0'為充裝待測吸附劑質量的5倍。
17、在一些評價方法的實例中，循環過程中控制血液樣品的溫度為37±1?℃。
18、在一些評價方法的實例中，離心操作具體為800?g?離心5?min。
19、在一些評價方法的實例中，連接循環管路后，使用生理鹽水排盡體系內的空氣，進行系統預充。
20、在一些評價方法的實例中，所述循環測試開始前，開啟滾壓泵將體系中預充生理鹽水排出，記錄排出液體體積與層析柱與管路總容積一致，出口端液體顏色與錐形瓶液體顏色接近時停止。
21、在一些評價方法的實例中，所述待測吸附劑的比表面積不小于800?m2/g。
22、在一些評價方法的實例中，所述錐形瓶在加入血液樣品前使用生理鹽水潤洗。
23、以上技術特征在不相沖突的情況，可以任意組合。
24、本專利技術的有益效果是：
25、本專利技術一些實例的評價方法，采用等比例縮小動態模擬接觸法，測試不同廠商吸附產品的溶血率數據，與采用整柱動態接觸法測得的溶血率數據十分接近，可以反映真實血液吸附產品的溶血效果。而直接接觸法與等比例縮小動態模擬接觸法和整柱動態接觸法相比，溶血率測試結果差距較大，說明直接接觸法對反映臨床應用時血液吸附產品真實溶血率有較大偏差。
26、本專利技術一些實例的評價方法，與水浴靜態孵育直接接觸法完全未考慮產品臨床使用時機械介導的溶血或者恒溫震蕩孵育外加的機械力導致額外的溶血不同，采用等比例縮小動態模擬接觸法，測試過程更接近臨床真實狀態，可以反映吸附產品使用時機械力及生化因素介導的溶血情況。
27、本專利技術一些實例的評價方法，采用等比例縮小動態模擬接觸法，測試使用的吸附劑的填裝量、血液用量與直接使用血液吸附產品相比均明顯降低，血液流速也明顯減小，而測試數據差異不明顯，可以很好的模擬臨床使用情況。而測試的成本和測試難度大大降低，是一種行之有效的模擬測試方法。
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1.一種高比表面血液吸附材料體外動態溶血評價方法，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的評價方法，其特征在于，所述試驗血液為稀釋抗凝兔血，試驗樣品組、陰性對照組使用生理鹽水稀釋，陽性對照組使用純化水稀釋。
3.根據權利要求2所述的評價方法，其特征在于，所述試驗樣品組稀釋所用待測吸附劑質量與生理鹽水體積質量比為0.2～0.5?g/mL，所用稀釋抗凝兔血與生理鹽水體積比為（1～75）:50。
4.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，所述試驗血液的用量V0'為充裝待測吸附劑質量的5～12.5倍。
5.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，循環過程中控制血液樣品的溫度為37±1?℃。
6.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，離心操作具體為800?g?離心5?min。
7.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，連接循環管路后，使用生理鹽水排盡體系內的空氣，進行系統預充。
8.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，所述循環測試開始前，
9.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，所述待測吸附劑的比表面積不小于800?m2/g。
10.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，所述錐形瓶在加入血液樣品前使用生理鹽水潤洗。
...【技術特征摘要】
1.一種高比表面血液吸附材料體外動態溶血評價方法，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的評價方法，其特征在于，所述試驗血液為稀釋抗凝兔血，試驗樣品組、陰性對照組使用生理鹽水稀釋，陽性對照組使用純化水稀釋。
3.根據權利要求2所述的評價方法，其特征在于，所述試驗樣品組稀釋所用待測吸附劑質量與生理鹽水體積質量比為0.2～0.5?g/ml，所用稀釋抗凝兔血與生理鹽水體積比為（1～75）:50。
4.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，所述試驗血液的用量v0'為充裝待測吸附劑質量的5～12.5倍。
5.根據權利要求1～3任一項所述的評價方法，其特征在于，循環過程中控制血液樣品的溫度為37±1?℃。
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊正根，楊萬泰，沙穗楠，牛月偉，雷純婷，安洪濤，陳校園，
申請(專利權)人：北京化工大學，
類型：發明
國別省市：
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