本發明專利技術屬于基因工程技術領域，具體涉及一種靈芝轉錄因子C2H2?6正向調控靈芝酸生物合成的應用。靈芝轉錄因子C2H2?6核苷酸序列如SED?ID?NO.1所示，本發明專利技術通過酵母單雜交和雙分子熒光素酶實驗證明了轉錄因子C2H2?6可結合靈芝SQS和LSS基因啟動子并正調控SQS和LSS基因的表達，從而實現靈芝酸含量的調控。不僅提供了一種靈芝酸生物合成途徑的調控機制，對培育優質靈芝新品種具有重要意義。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于基因工程，具體涉及一種靈芝轉錄因子c2h2-6正向調控靈芝酸生物合成的應用。
技術介紹
1、靈芝(ganoderma?lucidum)是我國傳統的藥食同源類大型真菌，具有補氣安神，止咳平喘等功效。三萜類是靈芝中主要的生物活性次級代謝產物，其中靈芝三萜酸，簡稱靈芝酸(ganoderic?acids，gas)，是靈芝藥用功效的核心成分。
2、靈芝酸是以乙酰輔酶a為前體物質，再通過甲羥戊酸途徑(mevalonatepathway，mva)合成的。在mva途徑中，已克隆和報道的直接調控靈芝酸合成的關鍵基因有fps、mvd、aact、ls、hmgr、hmgs、idi、sqs和osc基因。其中，鯊烯合酶(squalene?synthase，sqs)是催化mva途徑轉向三萜生物合成的第一個關鍵酶，也是參與靈芝酸合成代謝的關鍵酶。已有研究對不同植物如人參、水稻、重樓等植物的sqs基因進行了克隆與載體構建，實現了在分子水平上探討植物中三萜類化合物合成的機理和通過基因轉化來探究基因表達的最佳條件。羊毛固醇合成酶(lss)是膽固醇合成途徑中的一個關鍵酶，催化(s)-2,3-環氧角鯊烯轉化成羊毛固醇。
3、現有技術cn103724389b和cn105456277b公開了靈芝酸在腫瘤治療和抑制膽固醇合成方面具有重要作用，除此之外，在抗氧化、抑制血管緊張素轉換酶活性、抑制組胺釋放、抗hiv等方面也具有重要作用。然而，目前獲得靈芝酸的主要方式是從靈芝子實體和孢子中進行提取，而靈芝中靈芝酸的含量相對較低。
技術實現思路
1、有鑒于此，解析靈芝酸生物合成途徑及其調控機制對于培育高產靈芝酸的靈芝品種具有重要意義。本專利技術的目的在于提供一種靈芝轉錄因子c2h2-6正向調控靈芝酸生物合成的應用，以解決現有技術中存在的問題。
2、為實現上述專利技術目的，本專利技術的技術方案如下：
3、一方面，本專利技術提供了一種靈芝轉錄因子c2h2-6，所述靈芝轉錄因子c2h2-6的核苷酸序列如sed?id?no.1所示。
4、seq?id?no.1：atgtcggaccgacgcgcccagcagtatcctccaagtgcccacgtctccctcgccacac?aatggtccggtagcggacagtaccaatccggctacgcgtcgcaagaccaatactcttcctccccataccagaaccatccctctctccgtggcgcgagccactccccacactccgttcaagggtacgacgccatgtccgcgcaagcacaagcgatcgcggcgcaataccagctcaacgacgggcagatccactactcccacatcccaacgtccgaccgacgctcgtccatgtccatgtcccaatacggcgcgcactctgtggatagccactacggcagccccgggtcccaggtggcggggcgcgcgccctcgcactcgcactcgcactcgcactcgtacccccactcctcacacgccaccatcccgcactcgccctcacacacgtactcgcagacacaggcgatggcgaacgcgtacgctgcgccactgtcgtcatctccgcagtcgccttcggcgatgtccaacatggcagccgcacagtacgcgtcccaacaggctgcgtacgctcagcaggtcagctcgtatcctgcttctcccccgcgcccgttcgcgtgcgacatgtgcgcgctgtcgttcaatcggcagcacgacctcaagcgccatcgcgacacgcacacgggcgagaagccgttcttctgcaacggtggatgtgggaaaacattcacaaggaaggacgcactgaagaggcaccagctcgtgaagcgatgcggcatcgacgacagtagttcatag。
5、具體的，所述靈芝轉錄因子c2h2-6編碼的氨基酸序列如sed?id?no.2所示。
6、seq?id?no.2：msdrraqqyppsahvalasqwsgsgqyqtsyasqdqys?sayqnhhpslrgashsphsvpgydamsaqaqaiaaqyqlndgqihyshiptsdrrssmsvsqygahaveshygspgsqvagrahshshshsyphssshatiphspslgysqtqtmtanayatplssspqspsmsnmataqyasqaayaqqvssypaspprpfacdmcalsfnrqhdlkrhrdthtgekpffcnggcgktftrkdalkrhqlvkrcgiddnss。
7、另一方面，本專利技術提供了一種靈芝轉錄因子c2h2-6表達載體。
8、所述載體的構建載體包括以下步驟：擴增c2h2-6基因片段和擴增片段插入載體。
9、在一些實施例中，所述表達載體為pgadt7-ad；所述c2h2-6基因擴增的引物序列包括正向引物序列如sed?id?no：5所示，反向引物序列如sed?id?no：6所示；所述的c2h2-6基因在載體上的插入位置為bamhi和ecori。
10、在一些實施例中，所述表達載體為pgreen?ii?62-sk；所述c2h2-6基因擴增的引物序列包括正向引物序列如sed?id?no：7所示，反向引物序列如sed?id?no：8所示；所述的c2h2-6基因在載體上的插入位置為hindiii和xmai。
11、本專利技術還提供了表達前述靈芝轉錄因子或包括前述表達載體的基因工程細胞。
12、所述的基因工程細胞具有蛋白表達或分泌能力。
13、所述的基因工程細胞的來源可以是任何來源，優選地，所述的基因工程細胞可以是酵母菌或大腸桿菌或靈芝來源的細胞等。
14、具體地，所述的基因工程細胞應當具有靈芝酸或靈芝酸前體的表達能力，基于本專利技術的研究，所述的基因工程細胞中還應當具有sqs和/或lss的表達能力。
15、所述的c2h2-6基因可以與sqs、lss、靈芝酸前體的表達基因在同一載體上，也可以在不同載體上，如c2h2-6基因、sqs基因、lss基因、靈芝酸前體的表達基因位于任意2個、3個或4個不同載體上，所述的不同載體其含義表示不同位置，并不限定載體的具體類型，所述的不同載體可以是2個、3個或4個相同類型的載體，或者2個、3個或4個不同類型的載體。
16、又一方面，本專利技術提供了前述的靈芝轉錄因子或表達載體或基因工程細胞在調控靈芝酸合成中的應用。
17、所述應用通過靈芝轉錄因子c2h2-6調控靈芝酸合成的酶實現。
18、優選地，所述酶包括但不限于鯊烯合酶(squalene?synthase，sqs)或羊毛固醇合成酶(lss)。
19、所述的應用可以是通過靈芝轉錄因子c2h2-6結合在本文檔來自技高網
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【技術保護點】
1.一種靈芝轉錄因子基因，其特征在于，為靈芝轉錄因子C2H2-6基因，所述靈芝轉錄因子C2H2-6基因的核苷酸序列如SED?ID?NO.1所示。
2.包括權利要求1所述的靈芝轉錄因子基因的表達載體。
3.根據權利要求2所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體是為植物表達載體或真菌表達載體。
4.根據權利要求3所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為pGADT7-AD或pGreenII?62-SK。
5.表達權利要求1所述的靈芝轉錄因子基因或包括權利要求2-4任一項所述的表達載體的基因工程細胞。
6.權利要求1所述的靈芝轉錄因子基因或權利要求2-4任一項所述的表達載體或權利要求5所述的基因工程細胞在調控靈芝酸合成中的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述應用通過靈芝轉錄因子C2H2-6調控靈芝酸合成的酶實現。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述酶包括鯊烯合酶或羊毛固醇合成酶。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，通過靈芝轉錄因子C2H2-6結合在SOS和LSS啟動子序列上，促進其表達。
10.一種靈芝酸生物合成方法，其特征在于，包括：采用權利要求1所述的靈芝轉錄因子C2H2-6基因表達進入調控靈芝酸合成的酶。
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【技術特征摘要】
1.一種靈芝轉錄因子基因，其特征在于，為靈芝轉錄因子c2h2-6基因，所述靈芝轉錄因子c2h2-6基因的核苷酸序列如sed?id?no.1所示。
2.包括權利要求1所述的靈芝轉錄因子基因的表達載體。
3.根據權利要求2所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體是為植物表達載體或真菌表達載體。
4.根據權利要求3所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為pgadt7-ad或pgreenii?62-sk。
5.表達權利要求1所述的靈芝轉錄因子基因或包括權利要求2-4任一項所述的表達載體的基因工程細胞。
6.權利要求1所述的靈...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李振皓，徐志超，李明焱，陳文瀟，徐靖，李俊，孫偉，王曉彤，
申請(專利權)人：浙江壽仙谷醫藥股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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