【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種檢測，尤其涉及一種用于檢測c反應蛋白的核酸適體及其應用和含有其的產品。
技術介紹
1、c反應蛋白（crp）是一種由5個相同的亞單位組成的環狀五聚體球狀蛋白，屬于穿透素家族成員之一。其相對分子質量約為115?kd，中間呈現孔型結構，凹面含有配體結合位點，每個亞單位含有206個氨基酸殘基。
2、c反應蛋白的檢測在臨床應用相當廣泛，包括鑒別細菌性感染和病毒性感染；術后感染監測；抗生素用藥指導；病程檢測及預后判斷等。在人體遭受細菌感染或者組織損傷時，血清中c反應蛋白濃度會快速升高。c反應蛋白濃度為10~50?μg/ml時，表示患者具有輕度炎癥，例如局部細菌性感染、手術和意外創傷、多數病毒感染等。c反應蛋白濃度約為100μg/ml時，表示患者具有中度疾病，需在必要時進行靜脈注射。c反應蛋白濃度大于100?μg/ml時，表示患者具有重度疾病并伴有細菌感染。此外c反應蛋白水平的高低也反映了患者應激反應的強弱。
3、目前c反應蛋白的臨床檢測方法主要為比濁法。比濁法是一種通過比色或濁度來進行定量的檢測方法，該方法將抗體連接在微小的膠乳顆粒上，形成抗原-抗體-膠乳顆粒復合物，進而引起系統濁度的變化。但比濁法的靈敏度低，精密度差，價格昂貴，且易受原料純度以及穩定性的影響。
4、核酸適體（aptamer）是指通過指數富集的配體系統進化技術（selex）篩選分離得到的dna或者rna分子，被稱為“化學抗體”。核酸適體可以結合多種靶標分子，包括金屬離子、氨基酸、核苷酸等小分子物質等，因此核酸適體在生化分
5、針對c反應蛋白檢測靈敏度低特異性差等問題，可以采用核酸適體組合的識別形式對c反應蛋白進行檢測。核酸適體組合識別使得多個不同的探針結合在同一目標物上，減少了非特異性結合，從而提高了其對目標物的識別效率。同時c反應蛋白是一種具有多個相同結合位點的環狀五聚體球狀蛋白，為核酸適體組合識別提供更多的可能性與便利性。
6、使用多個相似的抗體會出現非特異性交叉反應,同時降低抗原特異性以及抗體的安全性，且抗體體積較大，多個抗體會產生較大的空間位阻，影響抗原抗體的結合，很難實現組合識別。核酸適體因其小尺寸，使它們可以密集地堆積在傳感器表面，因此核酸適體相較于抗體更易形成組合識別。
7、將核酸適體組合識別策略引入免疫層析，形成核酸適體組合與抗體夾心的識別模式，與傳統雙抗體夾心識別模式相比，具有高親和力、高特異性、高識別效率等優勢。
8、本專利技術的目的在于提供高特異性、分子量小、化學性質穩定、易于保存和用于標記的識別c反應蛋白的核酸適體組合提高靈敏度的方法。同時，采用核酸適體組合識別的策略開發高靈敏度、寬線性范圍的c反應蛋白檢測試劑和/或試紙和/或試劑盒。
技術實現思路
1、本專利技術技術方案針對傳統技術大量非特異性交叉反應、抗原抗體批間差異等問題，提供一種用于檢測c反應蛋白的核酸適體及其應用和含有其的產品。
2、本專利技術的主要目的在于：
3、一、提高核酸適體特異性和化學穩定性；
4、二、基于核酸適體開發高靈敏度、寬線性范圍的c反應蛋白檢測方法；
5、三、基于核酸適體制備c反應蛋白的檢測試紙或試劑或試劑盒。
6、為實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案。
7、用于檢測c反應蛋白的核酸適體，
8、所述核酸適體序列包括以下至少其一：
9、seq?id?no.1：：
10、5’-cacgcataacgcgtgactacggggtgcctttgggttttctgtcaacgttatgcgtg-3’；
11、seq?id?no.2：
12、5’-cacgcataacgggggagtccgcgtccgagcactggtttgttggccagttatgcgtg-3’；
13、seq?id?no.3：
14、5’-cacgcataacctccggattcactttatgcgggtgaccgcctcggaagttatgcgtg-3’。
15、作為優選，
16、所述核酸適體用于c反應蛋白檢測。
17、作為優選，
18、所述核酸適體制備為試紙或試劑盒或檢測試劑。
19、作為優選，
20、所述核酸適體使用前，以生物素對其進行修飾，隨后將其與鏈霉親和素修飾的乳膠微球偶聯固定在微球表面。
21、所述核酸適體的應用，
22、所述核酸適體用于c反應蛋白檢測和/或識別。
23、含有所述核酸適體的產品。
24、作為優選，
25、所述產品包括試劑和/或試劑盒和/或試劑條；
26、所述試劑以任一現有檢測試劑為基礎，適應性加入所述核酸適體中的任意一種或多種組合。
27、所述試劑盒以任一現有檢測試劑盒為基礎，適應性加入所述核酸適體中的任意一種或多種組合；
28、所述試劑條以任一現有檢測試劑條為基礎，適應性加入所述核酸適體中的任意一種或多種組合。
29、在本專利技術技術方案中，核酸適體（aptamer）是通過指數富集配體系統進化技術（selex）篩選得到的dna或rna分子，被譽為“化學抗體”。這些核酸適體能夠與多種靶標分子結合，包括金屬離子、氨基酸、核苷酸等小分子物質，因此在生化分析、環境監測、基礎醫學、新藥合成等領域展現出巨大的應用潛力。此外，核酸適體可以通過固相合成的化學方法穩定、大量、快速地合成，且合成成本較低，不同批次間的重復性和穩定性也較好。相較于傳統單一核酸適體，核酸適體組合識別能夠使目標物結合更多不同的探針，減少非特異性結合，從而提高對目標物的識別效率。將核酸適體組合識別策略應用于免疫層析，形成核酸適體組合與抗體的夾心識別模式，與傳統雙抗體夾心識別模式相比，此方法具有高親和力、高特異性、高識別效率等優勢。
30、本專利技術的有益效果是：提供了一種能夠識別c反應蛋白核酸適體方法，其具有高特異性、分子量小、化學性質穩定、易于保存和標記的優點。同時，采用核酸適體組合識別策略，能夠有效用于高靈敏度、寬線性范圍的c反應蛋白檢測試劑、試紙和試劑盒。
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1.用于檢測C反應蛋白的核酸適體，其特征在于，
2.根據權利要求1所述的用于檢測C反應蛋白的核酸適體，其特征在于，
3.根據權利要求1或2所述的用于檢測C反應蛋白的核酸適體，其特征在于，
4.根據權利要求1或2所述的用于檢測C反應蛋白的核酸適體，其特征在于，
5.如權利要求1至4任一所述核酸適體的應用，其特征在于，
6.含有如權利要求1至4任一所述核酸適體的產品。
7.根據權利要求6所述的含有所述核酸適體的產品，其特征在于，
【技術特征摘要】
1.用于檢測c反應蛋白的核酸適體，其特征在于，
2.根據權利要求1所述的用于檢測c反應蛋白的核酸適體，其特征在于，
3.根據權利要求1或2所述的用于檢測c反應蛋白的核酸適體，其特征在于，
4.根據權利要求1或2所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳杰，王鵬，付曉藝，周芳，徐寧，李小東，王曉雪，洪國粦，
申請(專利權)人：浙江工業大學，
類型：發明
國別省市：
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