【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及工業化培育肉用種子細胞提取，具體為一種用于工業化細胞解離的多酶制劑及其使用方法和應用。
技術介紹
1、細胞解離是細胞培養、組織工程及培育肉生產中的關鍵步驟，旨在高效、溫和地從組織樣本中分離出高活性單細胞。目前，細胞解離常用的酶類包括基質金屬蛋白酶(mmps)、胰蛋白酶、透明質酸酶和彈性蛋白酶等。這些酶通過分別降解細胞外基質的特定成分(如膠原蛋白、透明質酸、彈性蛋白等)，實現細胞與細胞之間或細胞與基質之間的分離。然而，傳統酶制劑存在酶解要求高、操作繁瑣、成本高、解離效果單一、效率低且解離細胞總量極低等關鍵卡點問題，同時在生物制造、細胞農業、細胞培育肉等技術的工業化應用過程中對細胞的活性、細胞總量等具有極高的要求，傳統方法通僅限于實驗室規模的研究，在工業化進程中凸顯的關鍵問題無法解決。
2、現有的單酶或簡單酶組合方法適用于小規模、實驗室范疇的細胞提取，但在高密度、高總量的工業化解離場景中存在顯著局限性。單酶方法的解離效率往往較低，在復雜組織中需要延長處理時間，可能導致細胞活性下降。此外，由于不同組織類型中細胞外基質的成分差異較大，單一酶難以實現全面作用，適應性較差。更重要的是，這些方法難以滿足工業化生產中對高效、穩定和大規模操作的需求，無法兼顧細胞產量與質量。
3、組合復合酶制劑的開發為工業化細胞解離提供了全新解決方案。通過多種酶協同作用，組合復合酶制劑能夠針對復雜組織中多樣的細胞外基質成分進行全面降解，從而顯著提升解離效率。
技術實現思路
1、本
2、為實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，所述多酶制劑由組分1和組分2組成；所述組分1包括中性蛋白酶、透明質酸酶、彈性蛋白酶；所述組分2包括基質金屬蛋白酶、木瓜蛋白酶、纖溶酶。
3、優選的，在所述組分1中：所述中性蛋白酶濃度為0.7mg/ml，所述透明質酸酶濃度為0.4mg/ml，所述彈性蛋白酶濃度為0.3mg/ml；
4、在所述組分2中：所述基質金屬蛋白酶濃度為0.3mg/ml，所述木瓜蛋白酶濃度為0.5mg/ml，所述纖溶酶濃度為0.5mg/ml。
5、優選的，所述基質金屬蛋白數均分子量為68000～125000，最適ph為6.3-8.8；所述基質金屬蛋白酶是基質金屬蛋白酶ⅱ。
6、優選的，所述中性蛋白酶為中性蛋白酶ⅱ，最適ph為7.5。
7、優選的，所述基質金屬蛋白酶溶液、所述木瓜蛋白酶溶液、所述纖溶酶溶液均可由tesca?buffer或含鈣鎂的pbs或含鈣鎂的hanks溶液或不含血清的培養基的任一種試劑配制。
8、優選的，所述基質金屬蛋白酶ⅱ用dmso試劑作為助溶劑對所述基質金屬蛋白酶ⅱ粉末進行預溶解。
9、優選的，所述中性蛋白酶、所述透明質酸酶、所述彈性蛋白酶均由不含鈣鎂的pbs或不含鈣鎂的hanks溶液或不含血清的培養基配制。
10、一種用于工業化細胞解離的多酶制劑的使用方法，所述多酶制劑的使用方法制備如下：
11、s1：配置所述組分1溶液和所述組分2溶液：
12、所述組分1溶液配置：在不含鈣鎂的pbs溶液中溶解所述中性蛋白酶、所述透明質酸酶、所述彈性蛋白酶；
13、所述組分2溶液配置：在含鈣鎂的hanks溶液中溶解所述基質金屬蛋白酶、所述木瓜蛋白酶、所述纖溶酶；
14、s2：制備目標酶解物：解剖12日齡雞胚的肌肉組織；將所述肌肉組織預處理為0.5～1.0mm3小肉塊；
15、s3：組織初步消化解離：使用所述組分1溶液，酶解解組織碎塊，之后組織解離儀解離，獲得組織初步消化解離液；
16、s4：組織二次消化解離：在所述組織初步消化解離液中，再加組分2溶液，酶解二次消化，組織解離儀解離；
17、s5：獲得單細胞懸液：使用濾網過濾，收集上清液并離心，使用細胞培養基重懸。
18、優選的，在所述s2步驟中：所述肌肉組織質量是5g；所述肌肉組織預處理肉丁粒徑為0.5mm；
19、所述s3具體步驟：使用所述組分1溶液，37℃酶解解組織碎塊10min，組織解離儀解離30s，獲得組織初步消化解離液；
20、所述s4具體步驟：在所述組織初步消化解離液中，再加組分2溶液，37℃酶解二次消化5min，組織解離儀解離30s；
21、所述s5具體步驟：使用100μm濾網過濾，收集上清液并1000rpm離心3min，使用20％fbsdmem細胞培養基重懸。
22、一種用于工業化細胞解離的多酶制劑或一種用于工業化細胞解離的多酶制劑使用方法的應用，其特征在于：所述多酶制劑應用在制備雞胚的肌肉組織單細胞懸液中；所述多酶制劑應用在解離獲取培育肉產業所需工業級雞胚的肌肉細胞數量需求的種子細胞。
23、與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：
24、(1)本專利技術顯著提高了解離效率和細胞活性。
25、(2)本專利技術可高效獲取用于培育肉產業的種子細胞，細胞獲取量級是傳統解離方法的萬倍以上，適用于大規模細胞培養。
26、(3)本專利技術所用酶的穩定性和生物相容性優異，確保了細胞的質量和純度。
27、(4)本專利技術實現了解離過程的自動化、流程化，便于工業化生產批量生產和流程化質量控制。
28、(5)本專利技術不僅解決了現有技術中的關鍵難題，同時拓寬了細胞解離技術在食品科學、細胞農業等領域的應用前景，為培育肉產業的高效發展提供了可靠的技術支持。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述多酶制劑由組分1和組分2組成；所述組分1包括中性蛋白酶、透明質酸酶、彈性蛋白酶；所述組分2包括基質金屬蛋白酶、木瓜蛋白酶、纖溶酶。
2.根據權利要求1所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：在所述組分1中：所述中性蛋白酶濃度為0.7mg/ml，所述透明質酸酶濃度為0.4mg/ml，所述彈性蛋白酶濃度為0.3mg/ml；
3.根據權利要求1或2所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述基質金屬蛋白數均分子量為68000～125000，最適pH為6.3-8.8；所述基質金屬蛋白酶是基質金屬蛋白酶Ⅱ。
4.根據權利要求1或2所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述中性蛋白酶為中性蛋白酶Ⅱ，最適pH為7.5。
5.根據權利要求1或2所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述基質金屬蛋白酶溶液、所述木瓜蛋白酶溶液、所述纖溶酶溶液均可由TESCA?buffer或含鈣鎂的PBS或含鈣鎂的hanks溶液或不含血清的培養基的任一種試劑配制。<...
【技術特征摘要】
1.一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述多酶制劑由組分1和組分2組成；所述組分1包括中性蛋白酶、透明質酸酶、彈性蛋白酶；所述組分2包括基質金屬蛋白酶、木瓜蛋白酶、纖溶酶。
2.根據權利要求1所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：在所述組分1中：所述中性蛋白酶濃度為0.7mg/ml，所述透明質酸酶濃度為0.4mg/ml，所述彈性蛋白酶濃度為0.3mg/ml；
3.根據權利要求1或2所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述基質金屬蛋白數均分子量為68000～125000，最適ph為6.3-8.8；所述基質金屬蛋白酶是基質金屬蛋白酶ⅱ。
4.根據權利要求1或2所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述中性蛋白酶為中性蛋白酶ⅱ，最適ph為7.5。
5.根據權利要求1或2所述的一種用于工業化細胞解離的多酶制劑，其特征在于：所述基質金屬蛋白酶溶液、所述木瓜蛋白酶溶液、所述纖溶酶溶液均可由tesca?buffer或含鈣鎂的pb...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王守偉，劉文婷，楊峰，郭晨，唐鐸，祁宇，郭翔，劉屹森，趙鵬飛，胡海娟，李石磊，李瑩瑩，付周，李暢，任文佳，李宇軒，
申請(專利權)人：中國肉類食品綜合研究中心，
類型：發明
國別省市：
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