【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生化分析領域，更具體地，涉及一種基于金屬有機框架材料的納米探針制備及多元檢測應用。
技術介紹
1、三磷酸腺苷(atp)作為細胞能量傳遞的“貨幣分子單位”，是細胞代謝和生化過程的能量來源，參與多種細胞活動，被認為是細胞活力和損傷的重要化學信號劑。線粒體在產生atp的過程中，總會伴隨著副產物活性氧(ros)的出現。過量的ros出現會攻擊線粒體或者其他細胞器或細胞內其他物質，引發炎癥或者使細胞直接凋亡。為了防止過量ros的致命作用，細胞會產生響應的還原物質來應對氧化應激。谷胱甘肽(gsh)是細胞抗氧化系統中最重要的抗氧化劑之一，可以保護細胞免受自由基或活性氧的侵害，在維持人體氧化還原穩態中發揮著重要作用。腫瘤細胞中已出現atp和gsh水平均升高的變化。鑒于atp和gsh之間的相互相關性，用于同時檢測這兩種活性分子以更好了解它們在疾病進展中的細胞水平變化具有重要意義。
2、常見的熒光納米探針包括有機小分子熒光團、上轉換納米顆粒、碳點、量子點、聚集誘導發射(aie)熒光分子、金屬有機框架(mof)等。它們具備靈敏度高、抗干擾能力強、響應快速、合成簡易、低成本、無損傷等諸多優勢。然而目前大部分報道的熒光納米探針都只針對單gsh或單atp檢測，同時定量這兩種物質的熒光納米探針少之又少。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種復合熒光納米探針的制備，用于同時檢測gsh和atp以及進行細胞內gsh和atp的熒光成像應用。
2、一方面，本專利技術提供了一種
3、其中，所述atp適配體所標記的熒光染料滿足其熒光發射能被cu-mi-uio-66猝滅，且熒光發射峰不與cu-mi-uio-66重合，例如cy5、cy3、rox。
4、在上述制備方法中，cu-mi-uio-66呈八面體結構，與經典uio-66結構類似，但其有兩點改進：1)馬來酰亞胺基團修飾；2)摻入金屬元素cu。
5、所述cu元素的摻入具體為：cu通過與uio-66中的-oh/-oh2配體與mof結合，覆蓋了zr氧化物簇上的缺陷位點，形成cu-mi-uio-66。
6、在本專利技術復合熒光探針合成過程中cu的摻入降低了mi-uio-66的本體熒光，實現了更大的熒光開啟效應，提高檢測靈敏度。本專利技術所設計的復合熒光納米探針具有雙熒光發射的特性，可以互不干擾的檢測gsh與atp。除此之外還可以實現gsh和atp細胞內熒光成像。
7、進一步的，所述h2l1的合成具體如下：
8、
9、進一步的，cu-mi-uio-66的制備具體如下：
10、將四氯化鋯(zrcl4)、具有馬來酰亞胺基團有機配體(h2l1)和硝酸銅加入dmf中，所得到的混合溶液中zrcl4、h2l1以及硝酸銅的最終濃度均為10～50mmol/l，完全溶解后加入適量酸性物質0.5～5ml，酸性物質包括但不限于乙酸、鹽酸等，之后在120±20℃環境中反應4小時及其以上。最后離心洗滌真空干燥后得到淺綠色產物，即cu-mi-uio-66；
11、進一步的，當所述atp適配體所標記的熒光染料是cy5時，復合熒光納米探針具體制備步驟如下：
12、標記cy5熒光染料的atp適配體序列為：
13、5'-acctgggggagtattgcggaggaaggt-3'，兩端均可以標記cy5；
14、將100～240μg/ml的cu-mi-uio-6與10～200nm的標記cy5熒光染料的atp適配體序列混合，并在37℃下低速振蕩不少于3min，后續離心去除上清液收集沉淀，形成復合熒光納米探針cu-mi-uio-66/aptamer-cy5。
15、所述的復合熒光納米探針中aptamer-cy5通過π-π堆積作用和靜電吸附作用與mof材料結合。
16、復合熒光納米探針cu-mi-uio-66/aptamer-cy5具有雙熒光發射特性，分別是uio-66在320-390nm左右激發的藍色熒光(400-600nm)和cy5在540-610nm左右激發的紅色熒光(620-720nm)。
17、本專利技術合成的復合熒光納米探針可以同時對gsh和atp產生響應。本專利技術合成的復合熒光納米探針可以互不干擾的實現gsh和atp細胞內成像。
18、本專利技術合成的復合熒光納米探針具有良好的細胞相容性，對細胞存活影響較小。
19、另一方面，本專利技術還公開了復合熒光納米探針在gsh和atp同步檢測方面和細胞內成像方面的應用。
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1.一種復合熒光納米探針的制備方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述ATP適配體所標記的熒光染料是Cy5或者Cy3或者ROX。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述具有馬來酰亞胺基團有機配體的合成如下：
4.根據權利要求1或3所述的制備方法，其特征在于，所述Cu-Mi-UiO-66的制備如下：
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述酸性物質是乙酸或者鹽酸。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述ATP適配體所標記的熒光染料是Cy5，標記Cy5熒光染料的ATP適配體序列為：
7.采用權利要求1至6中任一項所述的制備方法合成的用于GSH和ATP同步檢測的復合熒光納米探針。
8.權利要求7所述的復合熒光納米探針在GSH和ATP同步檢測中的應用。
9.權利要求8所述的復合熒光納米探針在細胞內成像中的應用。
【技術特征摘要】
1.一種復合熒光納米探針的制備方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述atp適配體所標記的熒光染料是cy5或者cy3或者rox。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述具有馬來酰亞胺基團有機配體的合成如下：
4.根據權利要求1或3所述的制備方法，其特征在于，所述cu-mi-uio-66的制備如下：
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于...
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