【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于酶工程領域，具體涉及一種ghk(甘氨酸-組氨酸-賴氨酸)三肽的生物合成方法。
技術介紹
1、藍銅勝肽(ghk-cu)是一種三肽-銅絡合物。由甘氨酸、組氨酸、賴氨酸組成的三肽ghk與二價銅離子親和力很高，兩者相遇能自發地形成絡合物藍銅勝肽。時至今日，藍銅勝肽被許多研究證實有多種功能，包括幫助dna修復、抗炎癥、抗衰老、修復傷口等。藍銅勝肽作為一種溫和的成分，在護膚品應用上已有多年，具有很高的應用價值。目前其制備方法多種多樣，主要包括化學合成法和微生物合成法等。化學合成法，是主流方法，但是存在生產過程中副產物較多、產率低、提純困難、成本較高，以及用料對環境不友好等缺點。基于基因工程手段，通過重復序列表達實現藍銅勝肽的生物合成，是近年來的研究熱點，但是目前存在表達量低等問題，難以滿足工業化生產的需求。因此，針對生物合成法，探索提高ghk表達量的新方法，以降低藍銅勝肽的生產成本，對于促進藍銅勝肽的應用具有很大的意義。預期，該專利技術將會擴大藍銅勝肽的應用市場規模，讓這種出色的抗衰老成分能夠更多人的需要。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于，使用生物方法合成短肽ghk。通過設計串聯重復序列來增加ghk的產量。我們發現，ghk作為一個親水短肽，直接串聯表達產量很低，在重復序列的基礎上通過增加特定間隔序列ysdepr，可以有效增加ghk串聯多肽的表達量。
2、所述ghk的生物合成方法專利技術過程如下：
3、(1)設計含有ghk重復序列的人工氨基酸序列，命
4、(2)委托基因合成公司合成所設計的ghk多重序列的dna序列，并將其整合到微生物表達質粒上，優先選擇大腸桿菌pet系列作為表達質粒；
5、(3)將表達質粒導入工程菌株，發酵表達ghk多重序列的多肽分子，優選選擇大腸桿菌作為工程菌株。
6、(4)在制備的ghk多重序列的多肽中，加入胰蛋白酶孵育水解，通過超濾獲得ghk短肽，通過液相色譜質譜分析確認ghk產物的合成；
7、本專利技術的有益效果是：
8、所專利技術的ghk使用生物合成方法，相比化學法，不需要高純度的氨基酸以及催化劑作為合成原料，步驟簡單易于實現，生產過程綠色環保，有望將來大幅降低生產成本，從而促進ghk在化妝品行業的應用。
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1.一種通過重復序列表達實現藍銅勝肽高效生物合成的新方法，其核心特征在于：在人工設計的GHK多重表達序列中，插入適當比例的重復間隔序列YSDEPR，進而實現GHK在工程菌株中的高效表達和制備。
【技術特征摘要】
1.一種通過重復序列表達實現藍銅勝肽高效生物合成的新方法，其核心特征在于：在人工設計的ghk多重...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王洪彬，孫穎，蘆萬伯，劉沙沙，路福平，
申請(專利權)人：天津科技大學，
類型：發明
國別省市：
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