【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白、制備方法及其應(yīng)用，屬于雜合肽。
技術(shù)介紹
1、貽貝粘蛋白（mussel?adhesive?protein，map）是貽貝足部分泌腺分泌出來的一種蛋白復(fù)合物，目前，已經(jīng)研究并鑒定至少13種貽貝粘蛋白。貽貝粘蛋白因其含有賴氨酸和多巴，可形成隔水粘附帶正電荷的微觀生物支架，吸附帶負(fù)電荷的表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，快速貼壁、爬行和生長，促進(jìn)創(chuàng)面愈合，可用于燒傷、激光術(shù)后等皮膚損傷的修復(fù)；也可以在護(hù)膚品中使用，起物理隔離性作用，減少粉塵對(duì)皮膚的刺激。
2、貽貝粘蛋白的傳統(tǒng)制備方法主要是化學(xué)萃取法，該方法需消耗大量的人力、物力以及財(cái)力，產(chǎn)能低，且純度較低，影響生物學(xué)活性。
3、纖連蛋白（fibronectin，fn），是一種大分子糖蛋白，廣泛存在于血漿、細(xì)胞表面及細(xì)胞基質(zhì)中。作為一種重要的黏附分子與至少11種整合素受體結(jié)合，在細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用中發(fā)揮及其重要的功能。大量研究表明，纖連蛋白參與傷口愈合、組織修復(fù)、胚胎分化、免疫反應(yīng)等過程，在慢性難愈合創(chuàng)面再生修復(fù)治療中起著不可替代的重要作用。纖連蛋白用于化妝品原料，對(duì)敏感肌膚、紅血絲、醫(yī)美術(shù)后的肌膚損傷、痘痘、痤瘡等問題肌膚都具有修復(fù)作用。
4、彈性蛋白（elastin，eln）是一種重要的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，主要成分為彈性纖維，它們?yōu)榻M織提供彈性和柔韌性。彈性蛋白在調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能中發(fā)揮著重要作用，包括促進(jìn)細(xì)胞黏附、增殖、分化、趨化和遷移等，被認(rèn)為是制備醫(yī)用材料的一種理想原料。雖然彈性蛋白只占真皮
5、目前市場(chǎng)上的生物修復(fù)原料皆是以貽貝粘蛋白、纖連蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白等為主要代表的非融合蛋白，其修復(fù)能力有限。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本專利技術(shù)提供一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白、制備方法及其應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)以下專利技術(shù)目的：將纖連蛋白、彈性蛋白、貽貝粘蛋白構(gòu)建得到融合蛋白，提高融合蛋白的修復(fù)和舒緩能力。
2、為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)采取以下技術(shù)方案：
3、一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
4、所述融合蛋白由以下模塊依次串聯(lián)得到：纖連蛋白的功能域1、彈性蛋白的親水區(qū)域1、貽貝粘蛋白功能域1、彈性蛋白的親水區(qū)域2、纖連蛋白的功能域2、彈性蛋白的親水區(qū)域3、貽貝粘蛋白功能域2、彈性蛋白的親水區(qū)域4、彈性蛋白的整合素結(jié)合區(qū)域。
5、所述纖連蛋白的功能域1的核苷酸序列如seq?id?no.3所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域1的核苷酸序列如seq?id?no.4所示；所述貽貝粘蛋白功能域1的核苷酸序列如seq?idno.5所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域2的核苷酸序列如seq?id?no.6所示；所述纖連蛋白的功能域2的核苷酸序列如seq?id?no.7所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域3的核苷酸序列如seqid?no.8所示；所述貽貝粘蛋白功能域2的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域4的核苷酸序列如seq?id?no.10所示；所述彈性蛋白的整合素結(jié)合區(qū)域的核苷酸序列如seq?id?no.11所示。
6、將融合蛋白的核苷酸序列構(gòu)建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，構(gòu)建得到表達(dá)融合蛋白的基因工程菌，再經(jīng)過培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)得到融合蛋白。
7、所述融合蛋白在制備皮膚修復(fù)和/或舒緩產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)取得以下有益效果：
9、本專利技術(shù)構(gòu)建纖連蛋白、彈性蛋白、貽貝粘蛋白的融合蛋白，相對(duì)于單一的纖連蛋白、彈性蛋白或貽貝粘蛋白，可以提高角質(zhì)細(xì)胞的相對(duì)遷移率，提高h(yuǎn)acat細(xì)胞的修復(fù)相關(guān)基因的表達(dá)量，降低raw264.7細(xì)胞的il-6、tnf-α及no的分泌量，提高對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制率，具有良好的修復(fù)和舒緩效果。
10、本專利技術(shù)對(duì)融合蛋白的核苷酸序列進(jìn)行了優(yōu)化，核苷酸序列優(yōu)化后的融合蛋白，可以明顯提高角質(zhì)細(xì)胞的相對(duì)遷移率，提高h(yuǎn)acat細(xì)胞的修復(fù)相關(guān)基因的表達(dá)量，降低raw264.7細(xì)胞的il-6、tnf-α及no的分泌量，提高對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制率。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQID?NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白由以下模塊依次串聯(lián)得到：纖連蛋白的功能域1、彈性蛋白的親水區(qū)域1、貽貝粘蛋白功能域1、彈性蛋白的親水區(qū)域2、纖連蛋白的功能域2、彈性蛋白的親水區(qū)域3、貽貝粘蛋白功能域2、彈性蛋白的親水區(qū)域4、彈性蛋白的整合素結(jié)合區(qū)域。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白，其特征在于：所述纖連蛋白的功能域1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示；所述貽貝粘蛋白功能域1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示；所述纖連蛋白的功能域2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示；所述貽貝粘蛋白功能域2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域4的核苷酸序列如SEQ?ID?
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述融合蛋白的制備方法，其特征在于：將融合蛋白的核苷酸序列構(gòu)建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，構(gòu)建得到表達(dá)融合蛋白的基因工程菌，再經(jīng)過培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)得到融合蛋白。
5.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述融合蛋白在制備皮膚修復(fù)和/或舒緩產(chǎn)品中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列如seqid?no.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白由以下模塊依次串聯(lián)得到：纖連蛋白的功能域1、彈性蛋白的親水區(qū)域1、貽貝粘蛋白功能域1、彈性蛋白的親水區(qū)域2、纖連蛋白的功能域2、彈性蛋白的親水區(qū)域3、貽貝粘蛋白功能域2、彈性蛋白的親水區(qū)域4、彈性蛋白的整合素結(jié)合區(qū)域。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有高修復(fù)能力的融合蛋白，其特征在于：所述纖連蛋白的功能域1的核苷酸序列如seq?id?no.3所示；所述彈性蛋白的親水區(qū)域1的核苷酸序列如seq?id?no.4所示；所述貽貝粘蛋白功能域1的核苷酸序列如seq?id?no.5所示；所述彈...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：魏選明，董昭鋒，楊金芳，郝群群，任雅甜，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：冠圖生物科技濰坊有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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