【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于分子生物學，具體涉及一種蛋白突變體5h-psi及其編碼基因在制備與腫瘤細胞結合的藥物中的應用。
技術介紹
1、天冬氨酸蛋白酶(aspartic?protease，ap)是一類重要的蛋白水解酶，參與機體的新陳代謝及生物調控作用，廣泛存在于動物、植物、病原菌細胞內，在植物的花、葉、莖等器官組織中均發現了aps。在植物中，aps與蛋白前體加工、蛋白質消化、細胞程序性凋亡等生理過程相關。植物的aps主要由n端區域、psi和c端區域三部分組成。其中n端區域和c端區域與哺乳動物、微生物中的aps同源性較高，但psi序列為植物aps所特有。psi蛋白是位于植物天冬氨酸蛋白酶上的植物特有插入序列(plant-specific?insert，psi)，植物aps主要以酶原的形式存在，經加工后轉化為成熟的水解酶，psis在此過程從aps中分離。
2、然而，腫瘤微環境為弱酸性，其ph普遍高于4.5，大多處于5.5～6.8這一范圍，天然的psi在該ph環境下psi蛋白與腫瘤細胞結合的能力受到抑制。如何改造psi蛋白，使psi蛋白在腫瘤微環境中可以與腫瘤細胞膜高效結合，成為亟待解決的問題。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種蛋白突變體5h-psi及其編碼基因在制備與腫瘤細胞結合的藥物中的應用，本專利技術的蛋白突變體5h-psi在腫瘤微環境中可以與腫瘤細胞膜高效結合。
2、本專利技術提供了一種蛋白突變體5h-psi或者表達所述蛋白突變體5h-psi的編碼基因或
3、所述蛋白突變體5h-psi的氨基酸序列如seq?id?no.1所示；
4、所述重組載體上插入有所述編碼基因；
5、所述重組菌包含所述重組載體。
6、優選的，所述腫瘤細胞包括外膜含有磷脂酰絲氨酸的腫瘤細胞；所述與腫瘤細胞結合優選的包括與腫瘤細胞的細胞膜結合。
7、優選的，所述產品的工作ph為5.5～6.5。
8、本專利技術還提供了一種蛋白突變體5h-psi或者表達所述蛋白突變體5h-psi的編碼基因或者重組載體或者重組菌在制備腫瘤靶向藥物和/或腫瘤診斷試劑載體中的應用；
9、所述蛋白突變體5h-psi的氨基酸序列如seq?id?no.1所示；
10、所述重組載體上插入有所述編碼基因；
11、所述重組菌包含所述重組載體。
12、優選的，所述編碼基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
13、本專利技術還提供了一種腫瘤診斷試劑載體，包括二油?；字＝z氨酸和負載于二油?；字＝z氨酸上的上述方案所述的蛋白突變體5h-psi。
14、本專利技術還提供了上述方案所述的腫瘤診斷試劑載體的制備方法，包括以下步驟：
15、將上述方案所述的蛋白突變體5h-psi和二油酰基磷脂酰絲氨酸混合，得到腫瘤診斷試劑載體。
16、本專利技術還提供了上述方案所述的腫瘤診斷試劑載體或者所述制備方法制備得到的腫瘤診斷試劑載體在制備腫瘤診斷試劑中的應用。
17、本專利技術還提供了一種腫瘤診斷試劑，包括腫瘤診斷試劑載體和負載于所述腫瘤診斷試劑載體上的熒光染料；所述腫瘤診斷試劑載體為上述方案所述的腫瘤診斷試劑載體或者所述制備方法制備得到的腫瘤診斷試劑載體。
18、優選的，所述熒光染料包括did。
19、本專利技術提供了一種蛋白突變體5h-psi或者表達所述蛋白突變體5h-psi的編碼基因或者重組載體或者重組菌在制備與腫瘤細胞結合的產品中的應用；所述蛋白突變體5h-psi的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。本專利技術的蛋白突變體5h-psi是將野生型psi蛋白中部分谷氨酸和天冬氨酸殘基突變為組氨酸，具體為將野生型psi蛋白第40位的d突變為h，第54位的e突變為h，第56位的e突變為h，第58位的e突變為h，第64位的e突變為h。本專利技術突變使psi蛋白表面的正電荷數量提高，更易于psi蛋白與腫瘤細胞的細胞膜的結合，在ph高于5.5條件下，依然具有很強的介導膜融合的活性。腫瘤微環境是由腫瘤細胞及周邊細胞及細胞分泌多種分子共同組成的特殊生理環境，在該環境中，腫瘤細胞通過多種手段，導致正常體細胞或免疫細胞的部分正常生理功能受到抑制，轉變為支持腫瘤細胞增殖及轉移。腫瘤微環境的酸性ph范圍大多集中在5.0～6.8之間。本專利技術的蛋白突變體5h-psi在腫瘤微環境中可以與腫瘤細胞膜高效結合。
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1.一種蛋白突變體5H-PSI或者表達所述蛋白突變體5H-PSI的編碼基因或者重組載體或者重組菌在制備與腫瘤細胞結合的產品中的應用；
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述腫瘤細胞包括外膜含有磷脂酰絲氨酸的腫瘤細胞；所述與腫瘤細胞結合優選的包括與腫瘤細胞的細胞膜結合。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述產品的工作pH為5.5～6.5。
4.一種蛋白突變體5H-PSI或者表達所述蛋白突變體5H-PSI的編碼基因或者重組載體或者重組菌在制備腫瘤靶向藥物和/或腫瘤診斷試劑載體中的應用；
5.根據權利要求1～4任意一項所述的應用，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
6.一種腫瘤診斷試劑載體，其特征在于，包括二油?；字＝z氨酸和負載于二油?；字＝z氨酸上的權利要求1所述的蛋白突變體5H-PSI。
7.權利要求6所述的腫瘤診斷試劑載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
8.權利要求6所述的腫瘤診斷試劑載體或者權利要求7所述制備方法制備得到的腫瘤診斷試
9.一種腫瘤診斷試劑，其特征在于，包括腫瘤診斷試劑載體和負載于所述腫瘤診斷試劑載體上的熒光染料；所述腫瘤診斷試劑載體為權利要求6所述的腫瘤診斷試劑載體或者權利要求7所述制備方法制備得到的腫瘤診斷試劑載體。
10.根據權利要求9所述的腫瘤診斷試劑，其特征在于，所述熒光染料包括DiD。
...【技術特征摘要】
1.一種蛋白突變體5h-psi或者表達所述蛋白突變體5h-psi的編碼基因或者重組載體或者重組菌在制備與腫瘤細胞結合的產品中的應用；
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述腫瘤細胞包括外膜含有磷脂酰絲氨酸的腫瘤細胞；所述與腫瘤細胞結合優選的包括與腫瘤細胞的細胞膜結合。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述產品的工作ph為5.5～6.5。
4.一種蛋白突變體5h-psi或者表達所述蛋白突變體5h-psi的編碼基因或者重組載體或者重組菌在制備腫瘤靶向藥物和/或腫瘤診斷試劑載體中的應用；
5.根據權利要求1～4任意一項所述的應用，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
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