【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及微生物相關，尤其涉及一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法。
技術介紹
1、微生物含量超標是食品安全的主要隱患之一，微生物檢測可以評估產品的衛生質量和安全性，判斷產品是否符合相關的標準和法規，保障消費者的健康權益。大腸菌群作為飲用水、食品、藥品的限量指標，幾乎是所有食品的必須檢測的項目。微生物能力驗證指利用實驗室間比對來判定實驗室能力，確保實驗室維持較高的檢測水平而對其能力進行考核、監督和確認的一種驗證活動。微生物標準品的制備是能力驗證組織者必須具備的技術，對于霉菌酵母菌和多數革蘭氏陽性細菌，現有的手段可以滿足標準品制作需求。但大腸菌群是革蘭氏陰性桿菌，使用凍干法會破壞蛋白質分子使細胞失活，大量殺死細胞；使用干接種法獲得的樣品水分不穩定，接種微生物的均勻性無法保證。目前對大腸菌群標準品制作的資料比較匱乏。所以需要一種可靠的手段制備大腸菌群定量標準品，用以組織微生物能力驗證活動。
2、真空冷凍干燥是最常見的保存微生物材料的方法之一，細胞在凍干過程中要經受冷凍和干燥兩種激烈因素的作用，細胞損傷是不可避免的。影響存活細胞質量的因素很多，有菌株、生長狀態、ph值、預凍溫度、凍干條件、保護劑等。對大多數細菌而言，冷凍干燥是否成功的關鍵都在于保護劑的使用，保護劑可以改變菌體處于凍干狀態下的物理條件和化學環境，減輕凍干過程對細胞的損傷，盡可能保持微生物原有的各種生理生化特點和生物活性。根據保護劑的性質可分為：多元醇類：如甘油、甘露醇、乙二醇；糖類：如葡聚糖、麥芽糊精、乳糖、蔗糖；氨基酸類：如脯氨酸、賴氨酸、丙氨
3、目前凍干保護劑種類繁多，對不同細菌的凍干保護作用和效果不盡相同，特別是對大腸菌群為代表的革蘭氏陰性桿菌的保護效果并不理想。因革蘭氏陰性桿菌特有的細胞壁構造，導致其對凍干條件的抗性并不佳，添加某種保護劑后，可能凍干后存活細胞數量并不低，但無法保存較長時間，在冷藏條件下七天，其數量可銳減1000倍甚至更多。但用于定量檢測的大腸菌群標準品要求其數量和特性必須具備穩定性。
4、有鑒于上述的缺陷，本設計人積極加以研究創新，以期創設一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，使其更具有產業上的利用價值。
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本專利技術的目的是提供一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法。
2、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，依次包括以下步驟：
4、步驟1、配制保護液，并加入菌液后混勻處理；
5、步驟2、將上述步驟1中混勻后的混合物裝盤預凍處理；
6、步驟3、將上述步驟2中預凍后的菌液樣品進行凍干處理；
7、步驟4、將上述步驟3中凍干后的菌液樣品進行定量分裝，并真空冷藏。
8、作為本專利技術的進一步改進，步驟1中的保護液由保護劑和無菌水組成，保護劑包括脫脂乳粉、海藻糖、蔗糖、谷氨酸鈉、糊精和抗壞血酸鈉。
9、作為本專利技術的進一步改進，保護劑中脫脂乳粉的用量為10％(w/v)，保護劑中海藻糖、蔗糖、谷氨酸鈉、糊精和抗壞血酸鈉的用量均≤3％(w/v)。
10、作為本專利技術的進一步改進，步驟1中的菌液體積占比≤1％。
11、作為本專利技術的進一步改進，步驟2中預凍處理條件為在-80℃下冷凍24h。
12、作為本專利技術的進一步改進，步驟3中菌液樣品在凍干機中進行凍干處理。
13、作為本專利技術的進一步改進，步驟3中凍干處理時間≤48h，且凍干后菌液樣品水分含量≤3％。
14、作為本專利技術的進一步改進，步驟4中凍干后的菌液樣品定量分裝至無菌密封袋內，去除無菌密封袋內的空氣后并封口處理。
15、作為本專利技術的進一步改進，步驟4中在2～8℃下冷藏。
16、作為本專利技術的進一步改進，步驟1中菌液為大腸桿菌且濃度為105～109cfu/ml。
17、借由上述方案，本專利技術至少具有以下優點：
18、本專利技術通過復配的保護劑配方并結合特定的保存條件，使凍干后的大腸菌群菌粉的微生物數量和特性保持長時間的穩定，從而可以制作用于定量檢測的大腸菌群標準品。
19、本專利技術制作的大腸菌群標準品可在冷藏條件下保持微生物數量和特性的穩定長達6個月。
20、常規的定量微生物標準品使用氣調包裝，本專利技術制作后若發生漏氣可及時發現。
21、上述說明僅是本專利技術技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本專利技術的技術手段，并可依照說明書的內容予以實施，以下以本專利技術的較佳實施例并配合附圖詳細說明如后。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，依次包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟1中的保護液由保護劑和無菌水組成，所述保護劑包括脫脂乳粉、海藻糖、蔗糖、谷氨酸鈉、糊精和抗壞血酸鈉。
3.如權利要求2所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述保護劑中脫脂乳粉的用量為10％(w/v)，所述保護劑中海藻糖、蔗糖、谷氨酸鈉、糊精和抗壞血酸鈉的用量均≤3％(w/v)。
4.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟1中的菌液體積占比≤1％。
5.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟2中預凍處理條件為在-80℃下冷凍24h。
6.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟3中菌液樣品在凍干機中進行凍干處理。
7.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其
8.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟4中凍干后的菌液樣品定量分裝至無菌密封袋內，去除無菌密封袋內的空氣后并封口處理。
9.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟4中在2～8℃下冷藏。
10.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟1中菌液為大腸桿菌且濃度為105～109CFU/mL。
...【技術特征摘要】
1.一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，依次包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟1中的保護液由保護劑和無菌水組成，所述保護劑包括脫脂乳粉、海藻糖、蔗糖、谷氨酸鈉、糊精和抗壞血酸鈉。
3.如權利要求2所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述保護劑中脫脂乳粉的用量為10％(w/v)，所述保護劑中海藻糖、蔗糖、谷氨酸鈉、糊精和抗壞血酸鈉的用量均≤3％(w/v)。
4.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟1中的菌液體積占比≤1％。
5.如權利要求1所述的一種可長期保存且含量穩定的細菌標準品制備方法，其特征在于，所述步驟2中預凍處理條件為在-80℃下冷凍24...
【專利技術屬性】
技術研發人員：季子非，金艷，鐵曉威，孟秀佳，
申請(專利權)人：歐陸分析技術服務蘇州有限公司，
類型：發明
國別省市：
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