【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥，尤其涉及pbx1在制備治療核輻射損傷藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、核輻射損傷通過(guò)損傷人類(lèi)遺傳物質(zhì)dna，導(dǎo)致“致癌、致畸、致突變”等作用的發(fā)生，甚至引發(fā)生殖毒性，嚴(yán)重危害后代發(fā)育。核輻射對(duì)人體組織造成的損傷依輻射量、暴露程度、輻射類(lèi)型及身體暴露部位而異，損傷可以是局部的，也可以是全身性的，其對(duì)人體組織的損傷可能導(dǎo)致創(chuàng)面反復(fù)發(fā)生，難以愈合，經(jīng)久難治，給患者帶來(lái)巨大的痛苦，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此積極救治核輻射損傷是每個(gè)人類(lèi)社會(huì)共同面臨著的重大科學(xué)問(wèn)題，也是重大的社會(huì)問(wèn)題。
2、目前應(yīng)對(duì)核輻射和核緊急情況的藥物主要分為兩類(lèi)：一類(lèi)是阻止或減少放射性元素吸收并促進(jìn)其排出的藥物，另一類(lèi)是對(duì)輻射損傷起修復(fù)作用的藥物。這些藥物主要包括：用于阻止或減少甲狀腺對(duì)放射性碘吸收的碘化鉀、用于去除人體內(nèi)部的放射性銫和鉈的普魯士藍(lán)、用于促進(jìn)金屬及放射性元素排泄的螯合劑、用于減輕急性輻射骨髓造成的損傷的細(xì)胞因子以及用于治療嘔吐、腹瀉和感染的藥物等。盡管如此，以上藥物在救治核輻射損傷時(shí)仍存在不足：1)作用效果有限，主要是阻止或促進(jìn)放射性核素的排除，缺乏有效的修復(fù)核輻射損傷的藥物；2)上述藥物難以通過(guò)血腦屏障，對(duì)核輻射造成的腦損傷修復(fù)效果甚微；3)上述藥物缺乏有效減少核輻射造成的dna損傷，常常導(dǎo)致與dna損傷相關(guān)的“致癌、致畸、致突變”作用和生殖毒性的發(fā)生。
3、近年來(lái)隨著干細(xì)胞研究的不斷深入以及移植技術(shù)的廣泛應(yīng)用，干細(xì)胞在組織修復(fù)、器官重建和基因治療中發(fā)揮的再生醫(yī)學(xué)作用備受關(guān)注。間充質(zhì)干細(xì)胞(me
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例的目的在于提供pbx1在制備治療核輻射損傷藥物中的應(yīng)用，旨在解決上述
技術(shù)介紹
中提出的問(wèn)題。
2、本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，pbx1在制備治療核輻射損傷藥物中的應(yīng)用，所述pbx1的編碼基因序列如seq?id?no.1所示。
3、本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例的另一目的在于提供一種tat-pbx1重組蛋白，所述重組蛋白的制備包括以下步驟：采用pcr法擴(kuò)增所述pbx1的編碼基因，通過(guò)克隆將pcr產(chǎn)物連到克隆載體上，通過(guò)藍(lán)白篩選挑取正確連接的白色克隆；經(jīng)過(guò)菌液pcr、酶切鑒定及基因測(cè)序鑒定后，將陽(yáng)性克隆中的pbx1編碼基因片段通過(guò)酶切、t4連接的方式插入原核表達(dá)載體ptat-ha上，再轉(zhuǎn)入原核表達(dá)菌株中，經(jīng)氨芐抗性篩選，獲取陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子；在表達(dá)培養(yǎng)基中活化，擴(kuò)大培養(yǎng)，離心收集沉淀；將沉淀置于裂解液中超聲破碎溶解，離心收取上清，過(guò)濾后，進(jìn)行純化，再通過(guò)脈沖稀釋的方式進(jìn)行復(fù)性，對(duì)復(fù)性液進(jìn)行透析和超濾，得到所述tat-pbx1重組蛋白。
4、本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例的另一目的在于提供一種過(guò)表達(dá)tat-pbx1病毒，所述病毒載體為慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒中的一種。
5、本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例的另一目的在于提供一種治療核輻射損傷藥物，所述藥物包括所述tat-pbx1重組蛋白或所述過(guò)表達(dá)tat-pbx1病毒。
6、優(yōu)選的，所述藥物還包括輔料。
7、本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例的另一目的在于提供一種治療核輻射損傷醫(yī)療器械，所述醫(yī)療器械上裝載上述藥物。
8、本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例提供的pbx1在制備治療核輻射損傷藥物中的應(yīng)用，pbx1屬于前b細(xì)胞白血病(pre-b?cell?leukemia，pbc)轉(zhuǎn)錄因子家族，其在維持干細(xì)胞的干性和自我更新、抵抗內(nèi)外源性活性氧(ros)誘發(fā)的氧化損傷、dna損傷以及在抗衰老，維持組織器官的穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用；由于pbx1作為轉(zhuǎn)錄因子，因其分子量較大，不能通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)，本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例構(gòu)建tat-pbx1重組蛋白，使得pbx1借助tat的穿膜作用，能夠進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)，發(fā)揮相應(yīng)抗氧化損傷作用，另外，進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)的pbx1具有強(qiáng)大的減少核輻射誘發(fā)的dna損傷能力，特別是ros介導(dǎo)的dna損傷作用。
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1.PBX1在制備治療核輻射損傷藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述PBX1的編碼基因序列如SEQ?ID?No.1所示。
2.一種TAT-PBX1重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白的制備包括以下步驟：采用PCR法擴(kuò)增如權(quán)利要求1所述的PBX1的編碼基因，通過(guò)克隆將PCR產(chǎn)物連到克隆載體上，通過(guò)藍(lán)白篩選挑取正確連接的白色克隆；經(jīng)過(guò)菌液PCR、酶切鑒定及基因測(cè)序鑒定后，將陽(yáng)性克隆中的PBX1編碼基因片段通過(guò)酶切、T4連接的方式插入原核表達(dá)載體pTAT-HA上，再轉(zhuǎn)入原核表達(dá)菌株中，經(jīng)氨芐抗性篩選，獲取陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子；在表達(dá)培養(yǎng)基中活化，擴(kuò)大培養(yǎng)，離心收集沉淀；將沉淀置于裂解液中超聲破碎溶解，離心收取上清，過(guò)濾后，進(jìn)行純化，再通過(guò)脈沖稀釋的方式進(jìn)行復(fù)性，對(duì)復(fù)性液進(jìn)行透析和超濾，得到所述TAT-PBX1重組蛋白。
3.一種過(guò)表達(dá)TAT-PBX1病毒，其特征在于，所述病毒載體為慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒中的一種。
4.一種治療核輻射損傷藥物，其特征在于，所述藥物包括如權(quán)利要求2所述的TAT-PBX1重組蛋白或如權(quán)利要求3所述的過(guò)表達(dá)TAT-PBX1病毒
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于，所述藥物還包括輔料。
6.一種治療核輻射損傷醫(yī)療器械，其特征在于，所述醫(yī)療器械上裝載所述如權(quán)利要求4所述的藥物。
...【技術(shù)特征摘要】
1.pbx1在制備治療核輻射損傷藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述pbx1的編碼基因序列如seq?id?no.1所示。
2.一種tat-pbx1重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白的制備包括以下步驟：采用pcr法擴(kuò)增如權(quán)利要求1所述的pbx1的編碼基因，通過(guò)克隆將pcr產(chǎn)物連到克隆載體上，通過(guò)藍(lán)白篩選挑取正確連接的白色克隆；經(jīng)過(guò)菌液pcr、酶切鑒定及基因測(cè)序鑒定后，將陽(yáng)性克隆中的pbx1編碼基因片段通過(guò)酶切、t4連接的方式插入原核表達(dá)載體ptat-ha上，再轉(zhuǎn)入原核表達(dá)菌株中，經(jīng)氨芐抗性篩選，獲取陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子；在表達(dá)培養(yǎng)基中活化，擴(kuò)大培養(yǎng)，離心收集沉淀；將沉淀置于裂解液中超聲破...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉晉宇，劉鑫鵬，王玉婕，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：吉林大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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