【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫學領域，尤其涉及一種工程化雜交細胞膜顆粒的制備方法和應用。
技術介紹
1、上皮性卵巢癌(epithelial?ovarian?tumor,eoc)是婦科惡性腫瘤中極具致命性的一種。據2022年的統計數據，全球新增eoc病例達324,603例，死亡病例為206,956例。目前，手術治療聯合鉑類和紫杉醇化療是臨床上常用的治療手段，在治療初期，多數患者能夠取得一定療效。然而，其治療效果存在明顯局限性，近乎一半的患者會出現多次復發，部分患者還會發生腫瘤轉移，且有患者出現鉑類耐藥現象，無法從化療中獲益。這就迫切需要開發新型治療方法，以徹底清除癌細胞，并對eoc的復發與轉移進行有效預防和治療，從而滿足當前的醫療需求。
2、近年來，腫瘤微環境在腫瘤發生發展過程中的關鍵作用日益受到重視。腫瘤微環境由腫瘤細胞、基質細胞(如癌相關成纖維細胞，cafs)、免疫細胞及其分泌因子以及細胞外基質(extracellular?matrix,ecm)等多種組分共同構成。眾多研究表明，腫瘤微環境是腫瘤進展、免疫抑制發生、化療耐藥產生以及復發轉移的重要誘因。例如，針對cafs的細胞毒藥物治療，無論是清除cafs還是對其進行重編程，均能在一定程度上抑制腫瘤的復發與轉移；針對腫瘤微環境中免疫細胞的免疫檢查點阻滯治療策略，可使免疫應答由促瘤型轉變為抑瘤型，顯著改善腫瘤患者的預后與生存狀況；針對細胞外基質的中和抗體治療，能夠有效改善免疫細胞浸潤并促進藥物遞送。
3、盡管上述針對腫瘤微環境各組分的治療方法在一定程度上取得了積極效應
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提出一種工程化雜交細胞膜顆粒的制備方法及其應用，所述制備方法中，采用了癌細胞和cafs(癌相關成纖維細胞)雙靶向包裝載體，包載卡鉑(carboplatin，cbp)以及靶向p65的sirna(即sip65)；從而提供了一種多維度一體式治療策略，能夠同時靶向腫瘤微環境中的腫瘤細胞、cafs、免疫細胞以及細胞外基質，進而達成對腫瘤微環境的優化以及治療敏感性的增強。
2、具體而言，本專利技術首先針對來源于自體腫瘤組織的癌細胞和cafs的細胞膜，進行ph20(透明質酸酶)的工程化過表達修飾處理，后續經提取操作獲取細胞膜，故而既能對致密腫瘤微環境中的ecm實施降解與滲透作用，又展現出對癌細胞和cafs的雙靶向能力。因此，本專利技術為腫瘤組織的藥物滲透提供了高效且高靶向性的載體保障，在卵巢癌治療領域具有積極的意義與潛在的應用價值。
3、本專利技術的技術方案是這樣實現的：
4、第一方面，本專利技術提供了一種工程化雜交細胞膜顆粒的制備方法，包括如下步驟：
5、s1使用pdda對二維納米片層結構材料ti2c3?mxene進行表面修飾獲得pmxene；將sip65和卡
6、鉑負載至pmxene表面，合成pmcs；其中，所述sip65為靶向p65的sirna；
7、s2構建過表達ph20的卵巢癌細胞；
8、s3分別提取腫瘤細胞膜和卵巢癌cafs細胞膜；
9、s4將過表達ph20的卵巢癌細胞、腫瘤細胞膜和卵巢癌cafs細胞膜，與負載了所述sip65和卡鉑的pmcs通過脂質體擠壓器擠出。
10、優選地，在一些具體的實施例中，所述步驟s1中，將50ml2wt.％的pdda緩慢滴入10ml?1mg/ml?mxene分散液中；然后在空氣氣氛下攪拌混合物，用去離子水洗滌。
11、優選地，在一些具體的實施例中，所述步驟s1中，所述sip65的靶向序列包括seqid?no：1-4中的一種。
12、所述sip65序列包括h_sip65#1、h_sip65#2、m_sip65#3或m_sip65#4。其中h_sip65#1和h_sip65#2為人源sip65序列，m_sip65#3和m_sip65#4為鼠源sip65序列，分別如下：
13、 sirna targeted?sequences(5'→3') seq?id?no h_sip65#1 ccggattgaggagaaacgtaaaa 1 h_sip65#2 aacgtaaaaggacatatgagacc 2 m_sip65#3 aagacattgaggtgtatttcacg 3 m_sip65#4 ttgaagagaagcgcaaaaggacc 4
14、優選地，在一些具體的實施例中，所述步驟s1中，還包括如下步驟：
15、(a1)將10mg?pmxene粉末溶解于100ml無菌雙蒸餾水中，對所得混合物攪拌12h，隨后對攪拌
16、后的混合物進行超聲處理30min，以使所述pmxene粉末分散為單個顆粒；
17、(a2)將30mg卡鉑與250μg?sip65混合形成混合液，將所述混合液加入到100ml濃度為0.1mg/ml的pmxene溶液中，在4℃條件下攪拌12h，得到pmcs納米顆粒；
18、(a3)對上述制備得到的納米顆粒進行多次洗滌、離心和再懸浮操作，以去除未吸附的卡鉑和sip65。
19、優選地，在一些具體的實施例中，所述步驟s2中，還包括如下步驟：
20、(b1)將人ph20基因過表達質粒轉染至skov3細胞、caov-3細胞或a2780細胞中，獲得ph20過表達skov3細胞；
21、(b2)將鼠ph20基因過表達質粒轉染至id8細胞或ovhm細胞中，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種工程化雜交細胞膜顆粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括：所述步驟S1中，將50mL2wt.％的PDDA緩慢滴入10mL?1mg/mL?MXene分散液中；然后在空氣氣氛下攪拌混合物，用去離子水洗滌。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括：所述步驟S1中，所述sip65的靶向序列包括SEQ?ID?NO：1-4中的一種。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，還包括如下步驟：
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中，還包括如下步驟：
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中，還包括如下步驟：
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S4中，還包括如下步驟：
8.一種產品，其特征在于，包括，根據權利要求1-7中任一項所述的制備方法所制備的工程化雜交細胞膜顆粒。
9.權利要求1-7中任一項所述的制備方法或權利要求8所述產品的應用，其特
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，包括如下中至少一種：
...【技術特征摘要】
1.一種工程化雜交細胞膜顆粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括：所述步驟s1中，將50ml2wt.％的pdda緩慢滴入10ml?1mg/ml?mxene分散液中；然后在空氣氣氛下攪拌混合物，用去離子水洗滌。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括：所述步驟s1中，所述sip65的靶向序列包括seq?id?no：1-4中的一種。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟s1中，還包括如下步驟：
5.根據權利要求1所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：汪宏波，姚雨薇，張家瑞，程爽爽，
申請(專利權)人：華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院，
類型：發明
國別省市：
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