【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于多肽藥物制備方法，特別涉及替爾泊肽的制備方法。
技術介紹
1、替爾泊肽（tirzepatide）是一種葡萄糖依賴性促胰島素多肽（gip，又名：胃抑制多肽）受體和胰高血糖素樣肽-1（glp-1）受體雙重激動劑。gip和glp-1均為腸道分泌的激素，能夠促進胰島素分泌。替爾泊肽將2種促胰島素的作用整合至一個單分子中，代表了治療2型糖尿病的一類新型藥物。替爾泊肽可改善β細胞功能、提高胰島素的敏感性，從而證明了其療效。
2、替爾泊肽的結構如下：
3、h-tyr1-aib2-g1u3-gly4-thr5-phe6-thr7-ser8-asp9-tyr10-ser11-ile12-aib13-leu14-asp15-lys16-ile17-ala18-gin19-lys20(aeea-aeea-γ-glu-eicosanedioicacid)-ala21-phe22-val23-gin24-trp25-leu26-ile27-ala28-gly29-gly30-pro31-ser32-ser3-gly34-ala35-pro36-pro37-pro38-ser39-nh2。
4、目前多肽藥物最有效的化學合成方法是固相合成法，也就是從多肽的羧基端開始，將第一個氨基酸連接到樹脂上后，脫去氨基酸氨基的保護基，按照肽序，偶聯下一個氨基酸，脫去氨基保護基，再偶聯，重復循環的操作直到完成氨基酸組裝。將多肽從樹脂上裂解下來同時去除所有的保護基就可以得到多肽粗品，再經過純化、凍干得到多肽原料藥（api）。在
5、因此，設計開發一種低成本、合成工藝簡單和高品質的替爾泊肽制備方法具有重要的現實意義和產業價值。
技術實現思路
1、針對現有技術的不足，本專利技術提供了一種高收率，適用于工業化生產的替爾泊肽的制備方法，通過本專利技術的制備方法，可大幅減少偶聯的循環次數，減少溶劑的使用，且在替爾泊肽樹脂裂解后的析出過程中，無需離心，通過簡單的過濾即可得到替爾泊肽粗品，合成的替爾泊肽粗品的收率和純度高。
2、本專利技術提供了一種替爾泊肽的制備方法，所述替爾泊肽的氨基酸序列為
3、h-tyr1-aib2-g1u3-gly4-thr5-phe6-thr7-ser8-asp9-tyr10-ser11-ile12-aib13-leu14-asp15-lys16-ile17-ala18-gin19-lys20(aeea-aeea-γ-glu-eicosanedioicacid)-ala21-phe22-val23-gin24-trp25-leu26-ile27-ala28-gly29-gly30-pro31-ser32-ser3-gly34-ala35-pro36-pro37-pro38-ser39-nh2，所述制備方法包括：
4、以氨基樹脂為起始樹脂，用固相合成法按照所述替爾泊肽的氨基酸序列依次偶聯氨基酸和小片段肽合成替爾泊肽樹脂，所述替爾泊肽樹脂經裂解、純化得到替爾泊肽純品；其中，所述小片段肽為1~4四肽片段boc-tyr(tbu)-aib-glu(otbu)-g1y-oh、5~6二肽片段fmoc-thr(tbu)-phe-oh、7~8二肽片段fmoc-thr(tbu)-ser(tbu)-oh、10~11二肽片段fmoc-tyr(tbu)-ser(tbu)-oh、12~13二肽片段fmoc-ile-aib-oh、17~18二肽片段fmoc-ile-ala-oh、20側鏈肽fmoc-lys(aeea-aeea-γ-glu(α-otbu)-eicosanedioic?acid(mon-tbu))-oh、28~30三肽片段fmoc-ala-gly-g1y-oh、32~34三肽片段fmoc-ser(tbu)-ser(tbu)-gly-oh和36~38三肽片段fmoc-pro-pro-pro-oh；偶聯所述氨基酸和所述小片段肽的偶聯劑選自oxyma和dic、tptu和tmp或comu和diea；
5、偶聯所述氨基酸和所述小片段肽的順序如下：
6、。
7、優選地，所述偶聯劑為：所述偶聯順序為1、3、5和7-13的氨基酸所使用的偶聯劑為oxyma和dic，所述偶聯順序為2、4和6的小片段肽所使用的偶聯劑為tptu和tmp，所述偶聯順序為14-25的氨基酸和小片段肽所使用的偶聯劑為comu和diea。
8、優選地，本專利技術替爾泊肽的制備方法包括：
9、（a）用脫保護劑對所述起始樹脂進行脫保護；
10、（b）將所述偶聯劑加入fmoc-ser(tbu)-oh，進行氨基酸活化；
11、（c）將所述步驟（b）得到的活化后的氨基酸加入步驟（a）得到的樹脂中偶聯反應得到fmoc-ser(tbu)-樹脂；
12、（d）重復脫保護、氨基酸活化及偶聯反應步驟，依次偶聯剩余氨基酸和小片段肽，得到替爾泊肽樹脂；
13、（e）將所述步驟（d）制得的所述替爾泊肽樹脂加入裂解液中裂解，在裂解后的溶液中加入析出液析晶，經過濾、干燥得到替爾泊肽粗品；
14、（f）將所述步驟（e）中制得的所述替爾泊肽粗品采用色譜系統純化、并進行超濾換鹽和凍干，得到替爾泊肽純品。
15、優選地，所述起始樹脂為rink?amide樹脂、rink?amide-am樹脂、rink?amide-mbha樹脂或sieber樹脂，所述起始樹脂的取代度為0.3~0.6mmol/g。
16、優選地，所述脫保護劑為pip/dmf溶液，所述pip的體積濃度為20%~50%。
17、優選地，所述裂解液為tfa/edt/tis/h2o/苯酚裂解液，所述tfa/edt/tis/h2o/苯酚裂解液通過如下方法制備：配制體積比例為tfa:edt:tis:h2o=90:5:2.5:2.5的第一溶液，然后向所述第一溶液中加入苯酚，所述苯酚的質量為所述第一溶液質量的2%。
18、優選地，所述析出液選自mtbe和ea、mtbe和ipac、或乙醚和ea，所述mtbe和ea、mtbe和ipac、乙醚和ea中兩種組分的體積比均為1：1。
19、優選地，所述步驟（f）中，將所述步驟（e）中制得的所述替爾泊肽粗品采用色譜系統進行兩次純化，所述色譜系統采用反相c18色譜柱，所述純化包括：
20、（f-1）：將所述步驟（e）制得的所述替爾泊肽粗品溶解在30%乙腈水溶液中，過濾，收集濾液；
21、（f-2）：將所述濾液進行第一次純化，流動相a為ph為3的磷酸水溶液，流動相b為本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種替爾泊肽的固相制備方法，所述替爾泊肽的氨基酸序列為
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯劑為：所述偶聯順序為1、3、5和7-13的氨基酸所使用的偶聯劑為Oxyma和DIC，所述偶聯順序為2、4和6的小片段肽所使用的偶聯劑為TPTU和TMP，所述偶聯順序為14-25的氨基酸和小片段肽所使用的偶聯劑為COMU和DIEA。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述起始樹脂為Rink?Amide樹脂、Rink?Amide-AM樹脂、Rink?Amide-MBHA樹脂或Sieber樹脂，所述起始樹脂的取代度為0.3~0.6mmol/g。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述脫保護劑為PIP/DMF溶液，所述PIP的體積濃度為20%~50%。
6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述裂解液為TFA/EDT/Tis/H2O/苯酚裂解液，所述TFA/EDT/Tis/H2O/苯酚裂解液通過如下方法制備：配制體積比例
7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述析出液選自MTBE和EA、MTBE和IPAc、或乙醚和EA，所述MTBE和EA、MTBE和IPAc、乙醚和EA中兩種組分的體積比均為1：1。
8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（f）中，將所述步驟（e）中制得的所述替爾泊肽粗品采用色譜系統進行兩次純化，所述色譜系統采用反相C18色譜柱，所述純化包括：
9.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（f）的所述超濾換鹽步驟中，濾膜孔徑為1-2nm，壓力設置為1.5Mpa。
10.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯反應中的溶劑為選自DMF、DCM、DMAc、NMP中的至少一種。
...【技術特征摘要】
1.一種替爾泊肽的固相制備方法，所述替爾泊肽的氨基酸序列為
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯劑為：所述偶聯順序為1、3、5和7-13的氨基酸所使用的偶聯劑為oxyma和dic，所述偶聯順序為2、4和6的小片段肽所使用的偶聯劑為tptu和tmp，所述偶聯順序為14-25的氨基酸和小片段肽所使用的偶聯劑為comu和diea。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述起始樹脂為rink?amide樹脂、rink?amide-am樹脂、rink?amide-mbha樹脂或sieber樹脂，所述起始樹脂的取代度為0.3~0.6mmol/g。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述脫保護劑為pip/dmf溶液，所述pip的體積濃度為20%~50%。
6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述裂解液為tfa/edt/tis/h2o...
【專利技術屬性】
技術研發人員：何志泉，侯志東，陳程云，許金行，范琳琳，吳永帆，
申請(專利權)人：福建基諾厚普生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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