【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于納米載藥，具體涉及一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒及制備方法。
技術介紹
1、胰腺腫瘤被認為是臨床實踐中最危險和最具有挑戰性的腫瘤模型之一，患者五年生存率僅為9%。其高度惡性的主要原因在于胰腺腫瘤細胞表現代謝重編程，即腫瘤細胞內發生多種代謝途徑的變化以滿足其過度增長所需的生物能量和合成需求。這種代謝異常不僅影響腫瘤細胞自身，還逐漸擴展至整個腫瘤微環境，最終導致胰腺癌微環境中致密基質的形成及免疫抑制細胞的高表達特征。從調節腫瘤細胞代謝入手，通過對單細胞的干預來改善整個微環境，是一種有潛力的胰腺癌治療策略。
2、線粒體是細胞代謝的樞紐，參與多種氨基酸、脂質和核苷酸的生物合成，承擔著提供基礎能量和維持信號傳導的重要功能。此外，線粒體在多種細胞死亡過程中發揮關鍵作用，包括鐵死亡，凋亡，自噬等，其功能對于維持細胞活性至關重要。對于腫瘤細胞而言，線粒體是協調其代謝重編程的關鍵細胞器，通過整合多種細胞信號來維持腫瘤細胞活性，使其能夠在動態復雜的腫瘤微環境中適應和生長。因此靶向腫瘤細胞線粒體是一種有潛力的治療手段。值得注意的是當細胞受到外界刺激時，會通過形成遷移體將受損線粒體釋放出去，來實現線粒體質量控制，這個過程被稱為線粒體胞吐。在之前已有研究通過誘導線粒體胞吐實現納米遞藥系統在腫瘤微環境細胞間轉運，促進藥物滲透深處的腫瘤部位，發揮持續抗腫瘤作用。提示利用該現象可以促進藥物穿透組織，線粒體胞吐為穿透致密的腫瘤實質提供了有潛力的方法。?此外，腫瘤微環境中其他細胞線粒體代謝同樣影響到腫瘤的進展。例如，干擾cd8+?t細胞
3、吉西他濱作為臨床針對胰腺癌的一線化療藥物，主要通過作為核苷類似物摻入腫瘤細胞的生物合成進而抑制其活性。然而，隨著治療過程推進，胰腺腫瘤細胞常常會產生耐藥性，研究表明嘧啶生物合成通路在吉西他濱耐藥過程發揮了關鍵作用。dhodh是嘧啶生物合成中的關鍵酶，在細胞內可發揮兩部分的作用，一方面通過調節嘧啶代謝能夠部分逆轉腫瘤細胞對吉西他濱的耐藥性。另一方面dhodh通過還原泛醌可以抵抗鐵死亡誘導劑的作用。在本申請中，以來氟米特作為dhodh抑制劑，這種具有抗增殖活性的異噁唑類免疫抑制劑，已在多個抗腫瘤臨床研究中展示出良好潛力。然而，小分子藥物在化療中的應用受到其理化性質的限制，導致其在體內的溶解度、穩定性和靶向性不足。此外，由于代謝重編程現象，胰腺腫瘤表現致密基質的特征，這進一步限制了藥物到達深層腫瘤組織的能力。因此利用納米遞藥系統獨特的尺寸特性和功能多樣性，有助于克服胰腺癌致密基質屏障，延長治療藥物的循環時間，并通過靶向藥物遞送實現高效的胰腺癌治療。盡管已有很多研究探索了多種納米遞藥系統在胰腺腫瘤治療中的應用，但在臨床上并沒有取得實質性的進展，主要是由于制備工藝復雜和制劑生物安全性等問題。因此，亟待開發一種新的遞藥系統，不僅能遞送吉西他濱到深層腫瘤病灶的同時聯用其他策略改善吉西他濱的耐藥性。
技術實現思路
1、多酚存在于多種天然植物中具有良好的生物安全性，能夠通過形成配位鍵螯合金屬離子形成納米粒，同時這種結合具有ph依賴性，可以響應腫瘤細胞內酸性環境解螯合，因此是遞送治療性藥物，實現腫瘤相應釋放的優越載體。
2、因此，本申請提出了一種一鍋法制備多酚-鐵螯合納米粒，用于共遞送改良型吉西他濱和來氟米特。該納米粒制備工藝簡單，重復性好。并通過在納米粒表面修飾能夠靶向腫瘤細胞高表達的egfr的多肽，實現納米粒的主動靶向。納米粒可以實現干擾線粒體代謝并通過線粒體胞吐促進納米藥物的深層遞送，從而協同增效，誘導腫瘤細胞鐵死亡和線粒體自噬。通過調節腫瘤細胞代謝，該方法有望改善胰腺癌的免疫抑制微環境，增強小分子化療藥物的整體治療效果。
3、本專利技術的目的在于基于胰腺癌病理特點及臨床技術現狀，提供一種實現靶向腫瘤病灶、響應釋藥，通過誘導細胞線粒體胞吐加強藥物穿透，實現調控腫瘤細胞代謝，增強的腫瘤治療療效的制劑設計策略。具體地，本專利技術提供了一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒及制備方法。由于多酚材料的生物安全性與多功能性，本專利技術利用聚多酚材料螯合鐵離子來遞送藥物，這種聚合物可以螯合鐵離子形成納米粒，并通過空腔包載改良型吉西他濱和來氟米特，這種納米粒可以包載小分子藥物，并且粒徑均一，形貌圓整。具有響應腫瘤細胞酸響應的特征，釋放鐵離子與藥物，具有優越的腫瘤蓄積特性，并且該納米顆粒可以誘導線粒體胞吐，促進納米粒深層次穿透，調節代謝誘導鐵死亡反應，緩解吉西他濱耐藥并實現腫瘤免疫抑制。
4、本專利技術基于胰腺癌微環境的特點，利用多酚納米粒螯合金屬離子的特性，形成空腔搭載藥物，具有響應酸性的腫瘤細胞胞內環境實現深度穿透，釋放藥物的目的。聚合物的結構設計如下：以生物可降解的聚乙二醇（peg）多酚的聚合物為骨架，隨后利用金屬離子螯合作用，包載疏水藥物改良型吉西他濱與來氟米特形成納米粒。通過將靶向腫瘤組織高表達表皮生長因子受體的ge11肽與材料結合，提高納米粒對胰腺腫瘤組織的靶向能力。納米粒在體循環中能夠穩定存在，在靶向功能分子ge11肽的作用下靶向腫瘤組織。通過誘導腫瘤細胞線粒體胞吐來促進納米粒穿透深層腫瘤組織，當攝取進入腫瘤細胞后多酚鐵螯合納米粒解體，調控腫瘤細胞線粒體代謝，通過腫瘤微環境的代謝-免疫網絡實現對整個微環境的調控。
5、為實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
6、本專利技術提供一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒，由兩親性多酚聚合物螯合鐵離子包載dhodh抑制劑和針對胰腺癌的化療藥物而得，所述聚合物包括：修飾有多酚的兩親性聚合物一，修飾有多酚且一端修飾有靶向多肽的兩親性聚合物二。
7、優選的，所述聚合物一大分子鏈自一端向另一端依次包含聚乙二醇親水性鏈段、聚賴氨酸-多酚嵌段。
8、優選的，所述針對胰腺癌的化療藥物為改良型吉西他濱。
9、優選的，所述聚合物二中靶向多肽為ge11。
10、優選的，所述dhodh抑制劑為來氟米特。
11、進一步優選的，所述來氟米特載藥量為7.31±0.32%，改良型吉西他濱載藥量為3.01±1.26%。
12、進一步優選的，所述聚合物一結構簡式如式ⅰ所示；聚合物二結構簡式如式ⅱ所示；
13、
14、式ⅰ
15、
16、式ⅱ
17、更進一步優選的，所述聚合物一和聚合物二的質量比為60：40。
18、優選的，所述適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒平均粒徑為150?nm；zeta電位為1.26?mv。
19、本專利技術中，經核磁共振氫譜測試表征式ⅰ得到所述的一個聚合物上連接有11個pca。
20、本專利技術中，所述ge11肽，結果簡式如式ⅲ中所示，該段多肽是一段可以與表皮生長因本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒，其特征在于，由兩親性多酚聚合物螯合鐵離子，包載針對胰腺癌的化療藥物和DHODH抑制劑而得，所述聚合物包括：修飾有多酚的兩親性聚合物一，修飾有多酚且一端修飾有靶向多肽的兩親性聚合物二。
2.根據權利要求1所述的一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒，其特征在于，所述聚合物一大分子鏈自一端向另一端依次包含聚乙二醇親水性鏈段、聚賴氨酸-多酚嵌段；
3.根據權利要求2所述的一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒，其特征在于，所述聚合物一結構簡式如式Ⅰ所示；聚合物二結構簡式如式Ⅱ所示；
4.根據權利要求1-3任一項所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，步驟（1）：將N6-芐氧羰基-L-賴氨酸與三光氣置于兩口燒瓶中，抽真空，氬氣隔絕空氣后，再加入無水四氫呋喃溶解，而后于50?℃進行攪拌反應，得到白色的塊狀固體Lys(z)-NCA；
6.根據權利要求4所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其
7.根據權利要求4所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，步驟（4）a：CH3O-PEG-poly-Lysine(z)置于單口燒瓶，加入三氟乙酸、溶于醋酸的33%氫溴酸溶液反應，室溫攪拌進行反應，3h后透析凍干得到產物CH3O-PEG-poly-Lysine；
8.根據權利要求4所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，步驟（5）a中的CH3O-PEG-poly-Lysine、三乙胺按照摩爾比1：?1，置于兩口燒瓶，抽真空，在氬氣保護下室溫攪拌反應30?min，后按照1：16摩爾比，往燒瓶內加入無水二甲亞砜溶解的PCA，反應18h，反應完成后使用(MWCO:?7000)透析袋對裝載反應物并在去離子水透析24?h，每隔8?h換一次水，冷凍干燥后得到產物；CH3O-PEG-poly-Lysine-PCA；
9.根據權利要求4所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，步驟（6）：吉西他濱與三乙胺置于兩口燒瓶，抽真空，氬氣隔絕空氣后，往燒瓶內加入無水N,N-二甲基甲酰胺溶解后，降溫至0℃，然后將硬脂酰氯加入體系后放置于35?℃的油浴，攪拌進行反應，24h后采用薄層色譜法監測反應的進行；通過柱層析純化得到改良型吉西他濱；
10.根據權利要求1-3任一項所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒在制備治療胰腺癌的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒，其特征在于，由兩親性多酚聚合物螯合鐵離子，包載針對胰腺癌的化療藥物和dhodh抑制劑而得，所述聚合物包括：修飾有多酚的兩親性聚合物一，修飾有多酚且一端修飾有靶向多肽的兩親性聚合物二。
2.根據權利要求1所述的一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒，其特征在于，所述聚合物一大分子鏈自一端向另一端依次包含聚乙二醇親水性鏈段、聚賴氨酸-多酚嵌段；
3.根據權利要求2所述的一種適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒，其特征在于，所述聚合物一結構簡式如式ⅰ所示；聚合物二結構簡式如式ⅱ所示；
4.根據權利要求1-3任一項所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，步驟（1）：將n6-芐氧羰基-l-賴氨酸與三光氣置于兩口燒瓶中，抽真空，氬氣隔絕空氣后，再加入無水四氫呋喃溶解，而后于50?℃進行攪拌反應，得到白色的塊狀固體lys(z)-nca；
6.根據權利要求4所述的適配胰腺癌的酸響應遞藥納米粒的制備方法，其特征在于，步驟（3）：將mal-peg-poly-lysine(z)，ge11多肽溶于體積比為1：1的pbs和dmso混合溶劑中，置于室溫反應過夜，透析凍干得到產物ge11-peg-?poly-lysine(z)；步驟（3）中的mal-peg-poly-lysine...
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