【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一株抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體及其應用。
技術介紹
1、發熱伴血小板減少綜合征（severe?fever?with?thrombocytopenia?syndrome，sfts）是由發熱伴血小板減少綜合征病毒（severe?fever?with?thrombocytopeniasyndrome?virus，sftsv）（新布尼亞病毒（sftsv））感染引起的傳染性疾病，以發熱和血小板減少為主要臨床特征，sfts導致的較高的發病率和死亡率已造成嚴重公共衛生問題；新布尼亞病毒（sftsv）感染引起的傳染性疾病的臨床表現以發熱伴血小板減少為主要特征，少數患者病情較重且發展迅速，可因多臟器功能衰竭而死亡。
2、sftsv感染可導致無癥狀感染、輕度發熱、嚴重出血或多器官功能衰竭，甚至死亡等各種臨床表現。sfts的發病機制非常復雜，尚未完全闡明。近年來，sfts病例逐年上升，且病死率始終維持較高水平，并且研究發現，新布尼亞病毒存在人傳人、動物傳人現象，嚴重地威脅人類健康，但至今仍無供人類使用的許可疫苗和特異性抗病毒藥物。預防sftsv感染，一方面，應遠離疫源地，做好防護，避免蜱蟲叮咬；另一方面，加快疫苗以及抗病毒藥物的研制具有重大意義。近年來，sfts病例逐年上升，且病死率始終維持較高水平，研制有效的疫苗和特異性抗病毒藥物是預防和治療sfts最有效的方法之一。
3、sftsv包含l、m、s三個基因組片段，l段編碼rna依賴性rna聚合酶(rdrp)，m段編碼gn和gc包膜糖蛋白，分
4、抗體在多種病毒性疾病的治療中發揮了關鍵作用，如由漢坦病毒、巨細胞病毒、狂犬病毒和呼吸道合胞病毒感染引起的疾病，中和抗體有望被開發成為預防和治療病毒性傳染病的藥物，并且能夠為疫苗的設計提供參考。以往研究表明，康復患者的血漿對于發熱伴血小板減少綜合征病例具有潛在的治療作用，其中起到關鍵作用的就是康復患者血液中的中和抗體。目前尚無針對新布尼亞病毒的特異性治療藥物獲得批準。因此，找到能夠有效中和新布尼亞病毒的單克隆抗體十分重要，對發熱伴血小板減少綜合征的臨床治療工作具有重要意義。
5、基于現有技術存在的技術問題，本專利技術的目的是提供一種抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體，以能夠有效中和發熱伴血小板減少綜合征病毒，進而提供其在制備發熱伴血小板減少綜合征檢測試劑盒中的應用，以及在制備預防和/或治療發熱伴血小板減少綜合征的藥物中的應用。
技術實現思路
1、基于上述目的，本專利技術首先提供了一株抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈可變區的cdr1、cdr2和cdr3區的氨基酸序列如seq?id?no:1第26-33、51-58和97-106位所示，輕鏈可變區的cdr1、cdr2和cdr3區的氨基酸序列如seq?id?no:3第27-36、54-56和93-101位所示。
2、在一個優選的實施方案中，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列如seq?idno:1所示，輕鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no:3所示。在本專利技術中具有該重鏈可變區和輕鏈可變區的一個具體技術方案的抗體被命名為“mm04抗體”。
3、在一個更為優選的實施方案中，所述單克隆抗體的重鏈恒定區的氨基酸序列如seq?id?no:5所示，輕鏈恒定區的氨基酸序列如seq?id?no:7所示，所述輕鏈為kappa鏈。
4、其次，本專利技術提供了一種編碼上述單克隆抗體的重鏈和輕鏈的多核苷酸，編碼所述單克隆抗體的重鏈可變區的多核苷酸序列如seq?id?no:2所示，編碼所述單克隆抗體的輕鏈可變區的多核苷酸序列如seq?id?no:4所示。
5、在一個優選的實施方案中，編碼所述單克隆抗體的重鏈恒定區的多核苷酸的序列如seq?id?no:6所示，編碼所述單克隆抗體的輕鏈恒定區的多核苷酸的序列如seq?id?no:8所示。
6、第三，本專利技術提供了一種含有上述編碼單克隆抗體的重鏈和輕鏈的多核苷酸的載體。
7、在一個優選的實施方案中，所述載體為真核表達載體，在本專利技術的一個具體實施方案中，所述表達載體為pcdna3.1。
8、第四，本專利技術提供了含有所述載體的宿主細胞。
9、所述宿主細胞包括原核細胞、真菌細胞、昆蟲細胞、包括但不限于cos細胞、cho細胞、bhk細胞、hek293細胞；優選地，所述宿主細胞是哺乳動物細胞；在本專利技術的一個具體實施方案中，所述宿主細胞為hek?293f細胞。
10、第五，本專利技術提供了上述的單克隆抗體在制備發熱伴血小板減少綜合征檢測試劑盒中的應用。所述試劑盒基于抗原抗體特異性結合的免疫學特性，可以用于檢測標本中的特異性抗原，即，發熱伴血小板減少綜合征病毒顆粒，或其gn蛋白是否存在，所述檢測方法包括但不限于：酶聯免疫法、放射免疫法、化學發光免疫法等、檢測可以為離體檢測，也可以為原位檢測。
11、第六，本專利技術提供了上述的單克隆抗體在制備預防和/或治療發熱伴血小板減少綜合征的藥物中的應用。
12、最后，本專利技術提供了一種藥物組合物，所述組合物含有上述的單克隆抗體。
13、本專利技術提供的抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體mm04顯示出對病毒良好的體外中和活性，其ic50值為0.16?μg/ml，對sftsv?gn表現出較高的親和力，其kd值為13.3?pm。在對攻毒小鼠的治療中顯示了100%的保護率。而且本專利技術提供的抗體mm04與現有技術公開的抗sftsv?gn抗體jkl2、jkl8、jkl77、jkl79（cn?118373906a）完全不競爭.識別不同表位，因此，本專利技術提供的抗體與現有技術中的其它抗體組合可應用于雙抗夾心等免疫學檢測技術，顯示了本專利技術提供的抗體在制備發熱伴血小板減少綜合征檢測試劑盒的應用前景。以及，本專利技術還顯示了所述抗體在制備預防和/或治療發熱伴血小板減少綜合征的藥物中的應用前景，尤其是本專利技術提供的抗體與其它的識別相同抗原不同表位的現有技術抗體作為抗體組合，可以應用于發熱伴血小板減少綜合征的雞尾酒組合療法。
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1.?一株抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈可變區CDR1、CDR2和CDR3區氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1第26-33、51-58和97-106位所示，輕鏈可變區CDR1、CDR2和CDR3區氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3第27-36、54-56和93-101位所示。
2.?根據權利要求1所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQID?NO:3所示。
3.?根據權利要求2所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈恒定區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:5所示，輕鏈恒定區的氨基酸序列如SEQID?NO:7所示。
4.?一種編碼權利要求1-3任一所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體的重鏈和輕鏈的多核苷酸，其特征在于，編碼所述單克隆抗體的重鏈可變區的多核苷酸序列如SEQID?NO:2所示，編碼所述單克隆抗體的輕鏈可變區的多核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。
5.?根據權利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，編碼所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體的重鏈恒定區的多核苷酸的序列如SEQ?ID?NO:6所示，編碼所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體的輕鏈恒定區的多核苷酸的序列如SEQ?ID?NO:8所示。
6.一種含有權利要求5所述的編碼所述抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體的重鏈和輕鏈的多核苷酸的表達載體。
7.一種含有權利要求6所述表達載體的宿主細胞。
8.權利要求1-3任一項所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體在制備發熱伴血小板減少綜合征檢測試劑盒中的應用。
9.權利要求1-3任一項所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體在制備預防和/或治療發熱伴血小板減少綜合征的藥物中的應用。
10.一種藥物組合物，其特征在于，所述組合物含有權利要求1-3任一項所述的抗新布尼亞病毒Gn蛋白的單克隆抗體。
...【技術特征摘要】
1.?一株抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈可變區cdr1、cdr2和cdr3區氨基酸序列如seq?id?no:1第26-33、51-58和97-106位所示，輕鏈可變區cdr1、cdr2和cdr3區氨基酸序列如seq?id?no:3第27-36、54-56和93-101位所示。
2.?根據權利要求1所述的抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no:1所示，輕鏈可變區的氨基酸序列如seqid?no:3所示。
3.?根據權利要求2所述的抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈恒定區的氨基酸序列如seq?id?no:5所示，輕鏈恒定區的氨基酸序列如seqid?no:7所示。
4.?一種編碼權利要求1-3任一所述的抗新布尼亞病毒gn蛋白的單克隆抗體的重鏈和輕鏈的多核苷酸，其特征在于，編碼所述單克隆抗體的重鏈可變區的多核苷酸序列如seqid?no:...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉瑋，黎浩，劉波，吳軍，張爍，沈霆波，張小愛，王西，趙潤州，王甜甜，張斌，侯旭宸，
申請(專利權)人：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，
類型：發明
國別省市：
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