【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，涉及從牦牛肽粉中提取和純化具有生物活性的肽類物質，特別涉及一種具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法。
技術介紹
1、阿爾茲海默癥（alzheimer's?disease，ad）是一種多發性、進行性的神經退行性疾病，其主要的病理特征是在大腦細胞外沉積淀粉樣蛋白(aβ)形成斑塊和在細胞內tau蛋白聚集造成神經纖維纏結。目前美國食品藥品監督管理局（fda）批準了一系列可以治療阿爾茲海默癥的藥物，其中應用膽堿酯酶抑制劑（che1）的原理相對廣泛，包括多奈哌齊、加蘭他敏和卡巴拉汀。其中多奈哌齊可以通過增加大腦中的乙酰膽堿酯酶（ache）濃度來改善神經元細胞的完整性，還可以通過干擾app的n末端部分暴露于aβ肽的過程抑制神經變性聯級反應。此外還有非競爭性的nmda受體拮抗劑作為藥物，如美金剛，可恢復正常的谷氨酸能神經傳遞。這些藥物往往只針對與單一機制，并且只能起到延緩作用，甚至還存在較為嚴重的副作用。因此亟需尋求一種多功能活性物質，以應對阿爾茲海默癥發病機制的復雜性和多樣性。
2、傳統的生物活性肽研究通常側重于通過抑制特定酶活性或依賴蛋白質-配體相互作用來展現其生物活性，通常需要通過濕化學實驗、體外細胞實驗和動物實驗進行驗證。然而，這些傳統方法不僅效率較低，且成本高昂、耗時長，并且依賴于昂貴的實驗設備和技術。
3、食品蛋白質是制備生物活性肽的可持續來源，食源生物活性肽近年來備受學界矚目，其中牦牛肽展現出多元生物活性，具備取材便利、生物相容性佳、安全性高等顯著優勢，在醫藥健康領域已然
技術實現思路
1、本專利技術的目的是針對現有的技術存在上述問題，提出了一種具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法。
2、本專利技術的目的可通過下列技術方案來實現：一種具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉的制備方法，具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉的制備方法具體包括以下步驟：
3、s1制備酶解液：將牦牛肽粉加入到蒸餾水中，攪拌均勻，得到初始牦牛肽液，將初始牦牛肽液在加熱的條件下進行調整ph作業，調整ph值作業后，進行超聲分散處理，得到預酶解牦牛肽液，將預酶解牦牛肽液采用復合酶進行酶協同水解作業和滅酶作業后，得到酶解液，按照重量比，牦牛肽粉:蒸餾水為1:15，在酶協同水解作業，使用的復合酶包括胰蛋白酶和風味蛋白酶，按照重量比，胰蛋白酶:風味蛋白酶為1:0.6；
4、s2過濾：將酶解液首先通過離心分離作業去除固體殘渣，然后取分離后的上清液，將上清液采用分子量截斷小于2kda的超濾膜進行超濾處理，得到目標濾液；
5、s3凝膠色譜分離：將目標濾液進行凝膠色譜分離作業，收集分子量＜1kda的組分，得到預純化牦牛肽液；
6、s4純化：使用反相高效液相色譜技術，通過梯度洗脫方式對預純化牦牛肽液進行純化作業，得到初始牦牛肽產品；在梯度洗脫中，使用的流動相包括a相和b相，a相為0.05%的三氟乙酸水溶液；b相為0.05%的三氟乙酸乙腈水溶液，在三氟乙酸乙腈水溶液中，乙腈含量為75%。
7、s5干燥：將初始牦牛肽產品進行濃縮和干燥作業，得到牦牛低聚肽粉，牦牛低聚肽粉產品含有肽yp，肽yp組成如下：亮氨酸-谷氨酸-酪氨酸-甘氨酸。
8、在步驟s1中，復合酶的添加量為6000u/g；復合酶酶解條件為：ph值為7.3-8.0，酶解溫度為40-50℃，酶解時間4-5小時。
9、在步驟s1中，超聲分散處理參數如下：溫度：40-50℃；超聲頻率：40-60khz，超聲功率：200-300w，處理時間：15-20分鐘。
10、在步驟s1中，滅菌作業參數如下：溫度：80-90℃；時間：10-15分鐘。
11、在步驟s2中，離心分離作業參數如下：轉速：4000-6000r/min；離心時間：10-15分鐘。
12、在步驟s3中的凝膠色譜分離作業，設計如下：色譜柱選用sephadexg-25型色譜柱，紫外檢測器檢測波長為220nm，平衡緩沖液為0.01m磷酸鹽緩沖液，0.01m磷酸鹽緩沖液的ph值為7.2；進樣濃度為5mg/ml。
13、在步驟s4的純化作業中，設計如下：選用的色譜柱為waterssymmetryc18，孔徑為100?，尺寸為25×150mm，填充顆粒大小為5μm；檢測波長為215nm；柱溫箱工作溫度為32℃。
14、在步驟s4中，針對梯度洗脫設計如下：0-45分鐘：流動相a的濃度從98%均勻減少至45%，45-50分鐘：流動相a的濃度從45%均勻降低至0%，50-55分鐘：流動相a的濃度為0%，僅使用流動相b。
15、在步驟s5中，采用冷凍干燥的方式進行干燥作業。
16、與現有技術相比，本專利技術具有以下有益效果：
17、1、選用復合酶進行酶解：采用復合酶（胰蛋白酶和風味蛋白酶的組合）進行協同水解，不僅提高了肽類分子的水解效率，而且能使得低聚肽的分子量適中，復合酶酶解條件（如ph、溫度、酶解時間）的精確控制，有助于確保肽的質量和效果。超聲分散處理通過超聲波的作用，能夠有效地提高酶解液的均勻性，促進酶的作用，從而提高低聚肽的提取效果。
18、2、精確的純化流程：通過凝膠色譜和反相高效液相色譜（hplc）兩種技術，進行多次純化處理，可以有效去除雜質，提高牦牛低聚肽的純度。凝膠色譜的使用能夠根據分子量對肽進行初步分離，進一步使用hplc進行精細純化，有效保留目標成分，去除不必要的雜質和大分子，提升純度和生物活性。
19、3、冷凍干燥：采用冷凍干燥（凍干）方式進行干燥，可以避免熱敏性物質的破壞，保持牦牛低聚肽的活性成分，便于產品的長期存儲和使用。
20、4、安全性：采用的原料（牦牛肽粉）以及整個工藝流程都避免了使用化學溶劑，確保產品的天然性和安全性。
21、綜上述所述，本專利技術提供了一種精細的制備具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉的方法，本專利技術具有高效的酶解過程、精確的純化流程、保證生物活性的凍干技術、精準的工藝控制以及高效的提取和生產能力。這些特點使得最終產品在質量、純度、生物活性及安全性方面具有顯著優勢，能為阿爾茲海默癥的干預提供更可靠的天然選擇。...
【技術保護點】
1.一種具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，其特征在于，具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法具體包括以下步驟：
2.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，其特征在于，在步驟S1中，復合酶的添加量為6000u/g；復合酶酶解條件為：pH值為7.3-8.0，酶解溫度為40-50℃，酶解時間4-5小時。
3.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，在步驟S1中，超聲分散處理參數如下：溫度：40-50℃；超聲頻率：40-60kHz，超聲功率：200-300W，處理時間：15-20分鐘。
4.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，在步驟S1中，滅菌作業參數如下：溫度：80-90℃；時間：10-15分鐘。
5.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，在步驟S2中，離心分離作業參數如下：轉速：4000-6000r/min；離心時間：10-15分鐘。
6.如權利要求1所述具有干預阿
7.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，其特征在于，在步驟S4的純化作業中，設計如下：選用的色譜柱為WatersSymmetryC18，孔徑為100?，尺寸為25×150mm，填充顆粒大小為5μm；檢測波長為215nm；柱溫箱工作溫度為32℃。
8.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，其特征在于，在步驟S4中，針對梯度洗脫設計如下：0-45分鐘：流動相A的濃度從98%均勻減少至45%，45-50分鐘：流動相A的濃度從45%均勻降低至0%，50-55分鐘：流動相A的濃度為0%，僅使用流動相B。
9.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，其特征在于，在步驟S5中，采用冷凍干燥的方式進行干燥作業。
...【技術特征摘要】
1.一種具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，其特征在于，具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法具體包括以下步驟：
2.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，其特征在于，在步驟s1中，復合酶的添加量為6000u/g；復合酶酶解條件為：ph值為7.3-8.0，酶解溫度為40-50℃，酶解時間4-5小時。
3.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，在步驟s1中，超聲分散處理參數如下：溫度：40-50℃；超聲頻率：40-60khz，超聲功率：200-300w，處理時間：15-20分鐘。
4.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，在步驟s1中，滅菌作業參數如下：溫度：80-90℃；時間：10-15分鐘。
5.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默癥功效的牦牛低聚肽粉產品的制備方法，在步驟s2中，離心分離作業參數如下：轉速：4000-6000r/min；離心時間：10-15分鐘。
6.如權利要求1所述具有干預阿爾茲海默...
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