【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域，特別涉及一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑及其制備方法和應用，所述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑是一種苯并咪唑類衍生物。
技術介紹
1、rna除了編碼和組裝蛋白質外，還參與了無數的細胞活動。人類的基因組中只有1-2%編碼蛋白質，但其中約80%被轉錄成rna。雖然大多數轉錄的rna是非編碼的，但許多非編碼rna在功能上參與調節細胞活動和疾病狀態。這些功能性的非編碼rna是相關疾病潛在的治療靶點。
2、目前，靶向rna的方法是使用優先靶向非結構化區域的寡核苷酸化合物，因此，靶向rna的治療方法的開發主要集中在使用寡核苷酸。然而，rna結構已被證明在重要的生物過程和疾病狀態中起著關鍵作用。由于rna生物學通常是由其形成的結構介導的，因此，靶向結構化rna可能是解決相關問題的潛在策略。然而，人們對結構化rna和小分子化合物之間的相互作用知之甚少，這也導致了人們認為用小分子化合物靶向結構化rna是不可行的。然而，近年來，已有大量研究表明小分子已經被研究用于靶向核糖體的三維結構、核糖體開關、某些病毒rna和核苷酸的重復擴增，小分子完全具備靶向rna的能力。
3、在疾病生物學中起作用的一類結構化rnas是非編碼micrornas（mirs）。它們是由高度結構化的前體產生的。pre-mir-21的前體（pri-mir-21）由drosha在細胞核中逐步加工為pre-mir-21，隨后pre-mir-21由dicer在細胞質中加工，產生成熟的mir-21，成熟的mir-2
4、通過對mirna等轉錄后加工的調控實現腫瘤、漸凍癥、奧爾波特綜合征（as）等重大疾病的治療是現階段國內外生物醫藥領域研究的熱點前沿。目前，下調mirna表達水平的方法，主要包括化學合成寡核苷酸（aso）和構建載體這兩種方法。化學合成寡核苷酸是采用反義mirna來阻斷特定mirna的活性。對于載體而言，主要是構建質粒或者病毒系統來表達與mirna前體的莖環結構互補的sirna。但這些方法因為價格較昂貴，目前大多處于實驗室階段，還無法真正用于臨床治療。因此，開發新型的手段來下調mirna水平，成為極為迫切的研究領域。
技術實現思路
1、為了解決現有技術中存在的下調mir-21的方法價格昂貴且未真正應用于臨床的缺點和不足，本專利技術的首要目的在于提供一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑；該轉錄后加工的剪切抑制劑在體內外能夠結合pre-mir-21并抑制其轉錄后加工的剪切，從而沉默、修飾和/或改善mir-21的表達，最終實現在體內抑制人乳腺癌細胞mda-mb-231的生長；所述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑穩定性好，便于儲存，成本低廉，抗腫瘤效果好。
2、本專利技術另一目的在于提供一種上述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑的制備方法。
3、本專利技術再一目的在于提供上述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應用。
4、本專利技術的又一目的在于提供一種含有上述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑的抗腫瘤藥物。
5、本專利技術的目的通過下述技術方案實現：
6、一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑，所述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑為具有如下式ⅰ所示結構的苯并咪唑類衍生物：
7、；
8、r1為胺類取代基；r2、r3、r4、r5、r7、r8、r9、r10分別為氟、氯、溴、烷基、氫、氨基、硝基、甲氧基、三氟甲基或胺類取代基；r6為氫、烷基、取代烷基、芳基或取代芳基；n為0、1、2或3。
9、優選的，r2、r3、r4、r5、r7、r8、r9、r10分別為烷基、氫、氨基、硝基、甲氧基、三氟甲基或胺類取代基；r6為氫、烷基或取代烷基；n為0、1或2。
10、更加優選的，r2、r3、r4、r5、r7、r8、r9、r10分別為烷基、氫、甲氧基、三氟甲基或胺類取代基；r6為氫或烷基；n為0或1。
11、進一步優選的，r2、r3、r4、r5、r7、r8、r9、r10分別為烷基、氫或胺類取代基；r6為氫；n為0。
12、所述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑更加優選為具有以下式ⅱ-ⅳ所示結構的化合物，分別命名為n2-（1h-苯并[d]咪唑-2-基）-n4-（2-（二乙氨基）乙基）喹唑啉-2,4-二胺、n2-（1h-苯并[d]咪唑-2-基）-n4-（2-嗎啉代乙基）喹唑啉-2,4-二胺和n2-（1h-苯并[d]咪唑-2-基）-n4-（3-（二甲氨基）丙基）喹唑啉-2,4-二胺；
13、；
14、上述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑的制備方法按照以下操作步驟：
15、（1）以取代的鄰氨基芳基甲酸為起始原料，與尿素在高溫下共熔融反應得到中間體1；
16、（2）中間體1與氯代試劑反應得到中間體2；
17、（3）中間體2在堿性條件下與胺類取代基發生親核取代反應得到中間體3；
18、（4）中間體3在酸性條件下與取代的苯并咪唑反應得到終產物pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑；或者中間體3在氮氣保護下，經鈀催化劑的催化，在堿性條件下與取代的苯并咪唑偶聯反應得到終產物pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑。
19、所述取代的鄰氨基芳基甲酸的結構如式ⅴ所示，所述中間體1的結構如式ⅵ所示，所述中間體2的結構如式ⅶ所示，所述中間體3的結構如式ⅷ所示：
20、；
21、其中，r1、r2、r3、r4、r5如前述所定義。
22、制備pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑的反應方程式如下：
23、。
24、其中，?n、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10如前述所定義。
25、所述步驟（1）中，反應溫度為150℃~300℃，優選180℃~220℃；反應時間為12h-72h，優選16h-24h；
26、所述步驟（2）中，反應溫度為130℃~220℃，優選150℃~180℃；反應時間為6h-24h，優選8h-12h；反應使用的溶劑為乙腈、丙酮、四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞砜、n,n-二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮或n,n-二甲基乙酰胺，優選n,n-二甲基甲酰胺；氯代試劑為氯化亞砜、三氯氧磷、三氯化磷或五氯化磷，優選三氯氧磷；
27、所述步驟（3）中，反應溫度為80℃~160℃，優選90℃~120℃；反應時間為1h-8h，優選2h-4h；反應使用的溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙腈、四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞砜本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：所述pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑為具有如下式Ⅰ所示結構的苯并咪唑類衍生物：
2.根據權利要求1所述的一種pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：
3.根據權利要求1所述的一種pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：
4.根據權利要求1所述的一種pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：
5.根據權利要求1所述的一種pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：
6.根據權利要求1-5任一項所述的pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑的制備方法，其特征在于按照以下操作步驟：
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于：
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：
9.根據權利要求1所述的pre-miR-21轉錄后加工的剪切抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應用，其特征在于：所述抗腫瘤藥物為抗三陰性乳腺癌的藥物。
10.一種包含了權利要求1所述
...【技術特征摘要】
1.一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：所述pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑為具有如下式ⅰ所示結構的苯并咪唑類衍生物：
2.根據權利要求1所述的一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：
3.根據權利要求1所述的一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：
4.根據權利要求1所述的一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑制劑，其特征在于：
5.根據權利要求1所述的一種pre-mir-21轉錄后加工的剪切抑...
【專利技術屬性】
技術研發人員：梁汝燊，盧宇靖，陳修財，陳靜，張藝瀚，孫琪，李淑儀，郭曉純，溫豪，關嘉倩，洪蕓蕓，陳浩，金富軍，
申請(專利權)人：廣東工業大學，
類型：發明
國別省市：
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