【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于基因工程，具體涉及一種藍莓耐鹽相關分子標記和應用。
技術介紹
1、藍莓(vacciniumspp.)為杜鵑花科(ericaceae)越橘屬植物，果實富含花青素、黃酮等多種生理活性成分，有抗氧化性強、提高免疫力等多種健康功效，具有極高的經濟價值和保健價值，是我國新興經濟林主導產業之一。藍莓對鹽脅迫十分敏感，土壤鹽漬化導致的栽培受限、植株生長不良等問題。但藍莓響應鹽脅迫的機制研究還非常有限，且主要集中于生理水平的研究，藍莓耐受鹽脅迫的關鍵基因及其分子和遺傳機制鮮有報道。挖掘藍莓耐鹽基因，并解析其作用機制是篩選和培育優良藍莓耐鹽品種的基礎。鹽脅迫是自然界中常見的非生物脅迫之一，其分布范圍廣、對植物生長危害大。植物長期生長在鹽漬化土壤中會引起滲透脅迫、離子毒害及氧化脅迫等多種次生脅迫，嚴重抑制其生長發育，甚至導致死亡。我國有10.0×107hm2鹽漬化土地，現有耕地的近1/4存在不同程度的鹽漬化，且伴隨灌溉依賴和化肥不當使用等因素，土壤鹽漬化逐年加劇。因此，開發與藍莓耐鹽性相關的分子標記，用于耐鹽性分子輔助樹種對藍莓生產具有重要意義。
2、鈉離子(na+)是鹽漬土中含量最豐富的可溶性陽離子。鹽脅迫條件下，植物葉片會積累過量的na+，導致k+/na+比率下降，引起離子毒害。促進葉片na+的排斥是植物維持k+/na+穩態、應對鹽脅迫的重要機制，na+離子轉運蛋白及其調控因子在此過程中發揮重要功能，但目前為止調控藍莓葉片na+排斥的基因還未見報道。因此，鑒定調控鹽脅迫下藍莓葉片na+含量及k+/na+比率的基因是解析
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種藍莓耐鹽相關分子標記和應用。
2、第一方面，本專利技術提供了檢測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中是否含有provchkt1；1-indel的物質在如下任一中的應用：
3、1)檢測或輔助檢測藍莓耐鹽性；
4、2)選育耐鹽藍莓；
5、所述provchkt1；1-indel的核苷酸序列為attgataa；
6、所述vchkt1；1基因編碼區如seq?id?no:1所示的dna分子。
7、上文中，所述vchkt1；1基因啟動子位于藍莓基因組中vchkt1；1基因上游，用于驅動該基因表達，在本專利技術的實施例中，vchkt1；1基因啟動子的核苷酸序列為seq?id?no:6或seq?id?no:7。
8、上文所述應用中，所述物質為如下任一種：
9、1)擴增provchkt1；1-indel的引物對；
10、2)含有1)所述引物對的pcr試劑或試劑盒；
11、3)直接測序所需儀器或試劑；
12、和/或，進一步地，所述引物對由seq?id?no:8所示的單鏈dna分子和seq?id?no:9所示的單鏈dna分子組成。
13、第二方面，本專利技術提供了第一方面中檢測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中是否含有provchkt1；1-indel的物質。
14、上文所述物質為如下任一種：
15、1)擴增provchkt1；1-indel的引物對；
16、2)含有1)所述引物對的pcr試劑或試劑盒；
17、和/或，進一步地，所述引物對由seq?id?no:8所示的單鏈dna分子和seq?id?no:9所示的單鏈dna分子組成。
18、第三方面，本專利技術提供了一種檢測或輔助檢測藍莓耐鹽性的方法，包括如下步驟：
19、檢測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中是否含有provchkt1；1-indel，
20、含有provchkt1；1-indel的藍莓的耐鹽性高于或候選高于不含有provchkt1；1-indel的藍莓；
21、或若待測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中含有provchkt1；1-indel，則待測藍莓為或候選為耐鹽品種，若待測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中不含有provchkt1；1-indel，則待測藍莓為或候選為鹽敏感型品種。
22、上文檢測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中是否含有provchkt1；1-indel方法具體為提取待測藍莓葉片的基因組dna為模板，用引物對ⅰ擴增待測藍莓，檢測擴增產物；
23、若擴增產物得到50bp的產物，則待測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中含有provchkt1；1-indel；若擴增產物得到41-42bp的產物，則待測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中不含有provchkt1；1-indel。
24、第四方面，本專利技術提供了一種檢測或輔助檢測藍莓耐鹽性的方法，包括如下步驟：
25、用第二方面中所述引物對藍莓進行pcr擴增，檢測pcr擴增產物，
26、所述pcr擴增產物得到50bp的產物的藍莓的耐鹽性高于或候選高于所述pcr擴增產物得到41-42bp的產物的藍莓；
27、或，若所述pcr擴增產物得到50bp的產物，則待測藍莓為或候選為耐鹽品種，若所述pcr擴增產物得到41-42bp的產物，則待測藍莓為或候選為鹽敏感型品種。
28、第五方面，本專利技術提供了一種選育耐鹽藍莓的方法，包括如下步驟：選取第三方面中所述含有provchkt1；1-indel的藍莓，培育，得到耐鹽藍莓。
29、第六方面，本專利技術提供了一種選育耐鹽藍莓的方法，包括如下步驟：選取第四方面中中所述pcr擴增產物為50bp的藍莓，培育，得到耐鹽藍莓。
30、本專利技術的有益效果如下：
31、(1)本專利技術提供了一種新的藍莓耐鹽基因，及其核苷酸序列和其對應的蛋白質氨基酸序列，并且在此耐鹽基因內，鑒定了一個位于啟動子中插入或缺失的，與藍莓耐鹽性連鎖的核苷酸片段，該片段的插入或缺失，可作為藍莓耐鹽分子標記。本專利技術還提供了一種用于檢測本專利技術的藍莓耐鹽分子標記的引物對和試劑盒，以及檢測藍莓是否耐鹽的方法。
32、(2)由于藍莓耐鹽性屬于數量性狀遺傳，表型分析耗時費力，上述的藍莓耐鹽基因及其蛋白質、分子標記、引物對和試劑盒都可以應用于篩選和培育藍莓耐鹽品種，在藍莓幼苗期就可鑒定，省時而且準確，可以加速藍莓耐鹽品種選育進程。
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1.檢測藍莓基因組中VcHKT1；1基因啟動子中是否含有ProVcHKT1；1-InDel的物質在如下任一中的應用：
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：
3.權利要求1或2中檢測藍莓基因組中VcHKT1；1基因啟動子中是否含有ProVcHKT1；1-InDel的物質。
4.根據權利要求3所述的物質，其特征在于：所述物質為如下任一種：
5.一種檢測或輔助檢測藍莓耐鹽性的方法，包括如下步驟：
6.一種檢測或輔助檢測藍莓耐鹽性的方法，包括如下步驟：
7.一種選育耐鹽藍莓的方法，包括如下步驟：選取權利要求5中所述含有ProVcHKT1；1-InDel的藍莓，培育，得到耐鹽藍莓。
8.一種選育耐鹽藍莓的方法，包括如下步驟：選取權利要求6中所述PCR擴增產物為50bp的藍莓，培育，得到耐鹽藍莓。
【技術特征摘要】
1.檢測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中是否含有provchkt1；1-indel的物質在如下任一中的應用：
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：
3.權利要求1或2中檢測藍莓基因組中vchkt1；1基因啟動子中是否含有provchkt1；1-indel的物質。
4.根據權利要求3所述的物質，其特征在于：所述物質為如下任一種：
...
【專利技術屬性】
技術研發人員：曹一博，張凌云，宋慧芳，趙鑫焱，
申請(專利權)人：北京林業大學，
類型：發明
國別省市：
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