【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及納米顆粒，尤其是涉及負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒及制備方法與應用。
技術介紹
1、聚脫氧核糖核苷酸(pdrn，polydeoxyribonucleotide)是一種用于再生醫學的生物活性天然化合物。此化合物包含分子量在50到1,500kda之間的脫氧核糖核苷酸混合物，來源于鮭魚鱒魚(oncorhynchusmykiss)或鮭魚(oncorhynchusketa)精子dna的受控純化和滅菌過程。該程序保證不存在可能引起免疫反應的活性蛋白質和肽。pdrn可通過激活a2受體和dna挽救途徑發揮組織修復、抗缺血和抗炎等多種功效，從而被廣泛用于皮膚修復、潰瘍愈合等領域。
2、現有研究中，pdrn的應用方式集中在注射給藥和經皮給藥的方式，注射給藥包括真皮內注射、皮下組織注射和腹腔注射，這些方法能確保pdrn直接到達體內深部，發揮促進細胞再生、抗炎和抗氧化的功效。但是注射的方法存在產品普及度低，疼痛等不良反應。經皮給藥的藥效與藥物覆蓋的表面積和脂溶性成正比，pdrn為親水性大分子，很難穿過皮膚從而發揮功效。口服給藥具有便利性、非無菌生產要求和副作用少等優勢，但口服pdrn仍面臨著挑戰。pdrn具有高分子量、親水性和負電荷等獨特的物理化學性質，在口服遞送時會遇到不穩定、低細胞攝取等問題。除此之外，胃腸道(git)是天然設計的，用于化合物消化和加工，具有惡劣的ph條件、酶、較厚的黏液層和各類腸細胞，為pdrn的吸收提供了理化屏障、粘液屏障和上皮屏障。
3、茶葉的主要成分是茶多酚、氨基酸、生物堿、糖、蛋白質
4、現有文獻中pdrn的應用方式局限于注射給藥和經皮給藥，注射給藥的患者依從性差且無菌要求高，經皮給藥的藥物吸收能力較差，這在很大程度上限制的pdrn的應用。現有文獻中負載pdrn的藥物載體會使用乳化劑或低毒試劑，存在安全風險。
5、為此，本專利技術提出了一種負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法來解決
技術介紹
提出的問題。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒及制備方法與應用，負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒在胃腸模擬液中具有穩定的脂質雙分子層結構，可口服用于治療疾病，為pdrn的口服應用提供了新的策略，具有較好的應用前景。
2、為實現上述目的，本專利技術提供了負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
3、步驟一，提取茶葉囊泡樣納米顆粒，將茶葉清洗切碎進行榨汁，離心瓶收集初產物，進行差速離心，離心后，棄沉淀，取上清液，將上清液加入超速離心機中離心，獲得茶葉囊泡樣納米顆粒；
4、步驟二，制備負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒，聚脫氧核糖核苷酸與茶葉囊泡樣納米顆粒混合，低功率超聲，37℃，0～100rpm，1～3h孵育促進膜融合；將混合好的溶液加入超速離心機中離心，去除游離聚脫氧核糖核苷酸；
5、步驟三，表征負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒，間接法測定負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒中聚脫氧核糖核苷酸的包封率和載藥量；使用動態光散射粒度儀測定負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的流動力學粒徑與多分散指數；使用納米顆粒跟蹤分析儀檢測負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的粒徑；通過透射電子顯微鏡觀察負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的結構。
6、優選的，步驟一中，差速離心的離心參數為1000×g離心10min，3000×g離心20min，10000×g離心40min。
7、優選的，超速離心機中離心參數為130000×g～170000×g離心60～90min。
8、優選的，步驟一中，提取茶葉囊泡樣納米顆粒的具體操作如下：取100g～200g茶葉，去除粗大莖及黃葉、蟲葉，用超純水清洗1～3遍，將其切碎后倒入榨汁機，加入200ml～400ml超純水，榨汁60～120s；榨好的混合物用擠壓器擠壓，離心瓶收集初級產物；初級產物配平放入高速離心機中進行差速離心，以去除大顆粒、死細胞及細胞碎片，離心參數為1000×g離心10min，3000×g離心20min，10000×g離心40min；高速離心后，棄沉淀，取上清，將上清加入超速離心機中，130000×g～170000×g離心60～90min獲得茶葉細胞外囊泡，使用濃度為0.9％的氯化鈉溶液重懸收集，-80℃保存，取用時避免反復凍融。
9、優選的，步驟二中，制備負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的具體操作如下：聚脫氧核糖核苷酸與茶葉囊泡樣納米顆粒以1～8:1的比例混合，低功率超聲，10～30s開，30～50s關，4～8個循環載藥；37℃，0～100rpm，1～3h孵育促進膜融合；將溶液加入超速離心機中，130000×g～170000×g離心60～90min，去除游離聚脫氧核糖核苷酸。
10、優選的，步驟三中，間接法測定負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒中聚脫氧核糖核苷酸的包封率和載藥量的操作為：取200μl～500μl載藥后的負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒加入至100kd～300kd超濾離心管，10000rpm～15000rpm離心10min～30min，檢測濾出液在260nm的吸光度。
11、優選的，步驟三中，使用動態光散射粒度儀測定負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的流動力學粒徑與多分散指數的操作為：取適量負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒溶于1.5～2ml去離子水中，茶葉囊泡樣納米顆粒的終濃度為0.5～2mg/ml，使用動態光散射粒度儀測定茶葉囊泡樣納米顆粒的流動力學粒徑與多分散指數，測定三次求平均值。
12、優選的，步驟三中，通過透射電子顯微鏡觀察負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的結構的操作為：取混勻后的樣品滴加于碳支持膜銅網上，靜置5分鐘；用濾紙從銅網邊緣吸掉殘留的液體，將2％磷鎢酸滴加于銅網上，室溫下染色30秒，用濾紙吸去多余的染液，自然晾干后放置透射電子顯微鏡下觀察。
13、負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒，是由上述的制備方法制備所得。
14、本專利技術還提供了負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的應用，應用于制備治療炎癥性腸病的口服藥物。
15、本專利技術采用上述負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒及制備方法與應用的優點和有益效果是：
16、本專利技術負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒在胃腸模擬液中具有穩定的脂質雙分子層結構，可口服用于治療疾病，為pdrn的口服應用提供了新的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于：步驟一中，差速離心的離心參數為1000×g離心10min，3000×g離心20min，10000×g離心40min。
3.根據權利要求1所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于：超速離心機中離心參數為130000×g～170000×g離心60～90min。
4.根據權利要求1所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟一中，提取茶葉囊泡樣納米顆粒的具體操作如下：取100g～200g茶葉，去除粗大莖及黃葉、蟲葉，用超純水清洗1～3遍，將其切碎后倒入榨汁機，加入200mL～400mL超純水，榨汁60～120S；榨好的混合物用擠壓器擠壓，離心瓶收集初級產物；初級產物配平放入高速離心機中進行差速離心，以去除大顆粒、死細胞及細胞碎片，離心參數為1000×g離心10min，3000×g離心20min，10000×g離心40min；高速離心后，棄沉淀，取上清，將上
5.根據權利要求1所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟二中，制備負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的具體操作如下：聚脫氧核糖核苷酸與茶葉囊泡樣納米顆粒以1～8：1的比例混合，低功率超聲，10～30s開，30～50s關，4～8個循環載藥；37℃，0～100rpm，1～3h孵育促進膜融合；將溶液加入超速離心機中，130000×g～170000×g離心60～90min，去除游離聚脫氧核糖核苷酸。
6.根據權利要求1所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟三中，間接法測定負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒中聚脫氧核糖核苷酸的包封率和載藥量的操作為：取200μL～500μL載藥后的負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒加入至100kD～300kD超濾離心管，10000rpm～15000rpm離心10min～30min，檢測濾出液在260nm的吸光度。
7.根據權利要求1所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟三中，使用動態光散射粒度儀測定負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的流動力學粒徑與多分散指數的操作為：取適量負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒溶于1.5～2mL去離子水中，茶葉囊泡樣納米顆粒的終濃度為0.5～2mg/mL，使用動態光散射粒度儀測定茶葉囊泡樣納米顆粒的流動力學粒徑與多分散指數，測定三次求平均值。
8.根據權利要求1所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟三中，通過透射電子顯微鏡觀察負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的結構的操作為：取混勻后的樣品滴加于碳支持膜銅網上，靜置5分鐘；用濾紙從銅網邊緣吸掉殘留的液體，將2％磷鎢酸滴加于銅網上，室溫下染色30秒，用濾紙吸去多余的染液，自然晾干后放置透射電子顯微鏡下觀察。
9.負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒，其特征在于：是由如權利要求1-8任一項所述的制備方法制備所得。
10.如權利要求9所述的負載PDRN的茶葉囊泡樣納米顆粒在制備治療炎癥性腸病口服藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于：步驟一中，差速離心的離心參數為1000×g離心10min，3000×g離心20min，10000×g離心40min。
3.根據權利要求1所述的負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于：超速離心機中離心參數為130000×g～170000×g離心60～90min。
4.根據權利要求1所述的負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟一中，提取茶葉囊泡樣納米顆粒的具體操作如下：取100g～200g茶葉，去除粗大莖及黃葉、蟲葉，用超純水清洗1～3遍，將其切碎后倒入榨汁機，加入200ml～400ml超純水，榨汁60～120s；榨好的混合物用擠壓器擠壓，離心瓶收集初級產物；初級產物配平放入高速離心機中進行差速離心，以去除大顆粒、死細胞及細胞碎片，離心參數為1000×g離心10min，3000×g離心20min，10000×g離心40min；高速離心后，棄沉淀，取上清，將上清加入超速離心機中，130000×g～170000×g離心60～90min獲得茶葉細胞外囊泡，使用濃度為0.9％的氯化鈉溶液重懸收集，-80℃保存，取用時避免反復凍融。
5.根據權利要求1所述的負載pdrn的茶葉囊泡樣納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟二中，制備負載聚脫氧核糖核苷酸的茶葉囊泡樣納米顆粒的具體操作如下：聚脫氧核糖核苷酸與茶葉囊泡樣納米顆粒以1～8：1的比例混合，低功率超聲，10～30s開，30～50s關，4～8個循環載藥；37℃，0～100rpm，1～3h孵育促進膜融合；將溶液加...
【專利技術屬性】
技術研發人員：胡成虎，曹婷婷，胡成彪，陳成，王巧寧，
申請(專利權)人：西北工業大學，
類型：發明
國別省市：
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