【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物領域，具體涉及一種基于cmv啟動子的多核苷酸及其應用。
技術介紹
1、重組蛋白表達系統是一種利用基因工程技術將目標基因導入宿主細胞中，通過宿主細胞的生物合成機制來表達和產生特定蛋白質的技術。重組蛋白表達系統是生物制藥領域中的重要工具，用于大規模生產具有特定功能的蛋白質。通過構建和優化表達系統，可以提高蛋白質的產量、純度和活性，從而滿足生物制藥的需求。
2、強啟動子對于表達外源基因的效率具有重要的影響，強啟動子能夠更有效地吸引rna聚合酶，從而增加轉錄的起始頻率，從而顯著提高外源基因的表達水平。
3、cmv啟動子（cmv?promoter）來自人巨細胞病毒（cytomegalovirus,?cmv），具有強大的轉錄活性，廣泛應用于真核細胞中，是一種廣泛應用于基因表達研究和基因工程中的啟動子序列。
4、啟動子是影響外源基因表達的關鍵作用元件，選擇更合適的啟動子可以顯著提高外源基因的表達水平，直接增加目標蛋白的產量，這對于工業生產和科學研究都是非常重要的。高產量意味著更高的生產效率和更低的成本。
5、總之，提升外源蛋白表達對于科學研究、工業生產、醫療應用和經濟發展都具有重要的意義。
技術實現思路
1、易錯pcr?主要使用低保真度的?taq?dna?聚合酶，在pcr過程中隨機引入突變。通過調整核苷酸、酶及鎂離子的用量，獲得無序列傾向性的突變體庫。隨機突變?pcr是易錯pcr的具體應用，隨機突變?pcr?應使用?cdna?或僅
2、隨機突變?pcr?的優點之一是在無需分離克隆和獲得序列信息的情況下，可以對核酸群體進行重復隨機突變。得到突變體庫以后篩選出有特殊性質的個體，該個體還可直接用作第二次突變pcr?的模板，連續反復地進行隨機誘變，使每一次獲得的小突變累積而發生重要的有益突變。
3、為了實現提升外源基因表達水平，增加外源蛋白產量的目的，本專利技術提供了以下技術方案：
4、本專利技術第一個方面公開了一種具有啟動子活性的多核苷酸，所述多核苷酸的核苷酸序列如seq?id?no：1、2或3任一項所示。
5、其中，所述多核苷酸由cmv啟動子經隨機突變pcr篩選獲得。
6、本專利技術第二個方面公開了一種表達盒，所述表達盒包含上述具有啟動子活性的多核苷酸。
7、本專利技術第三個方面公開了一種重組載體，所述重組載體包含上述具有啟動子活性的多核苷酸，或表達盒。
8、本專利技術第四個方面公開了一種重組宿主細胞，所述重組宿主細胞含有上述具有啟動子活性的多核苷酸，表達盒，或上述的重組載體。
9、本專利技術第五個方面公開了一種增強目的基因表達的方法，所述方法包括將上述具有啟動子活性的多核苷酸與目的基因可操作地連接。
10、其中具有啟動子活性的多核苷酸，構建和篩選方法如下：
11、s1、通過易錯pcr技術，對cmv啟動子進行一輪隨機突變后測序，構建突變體庫；
12、s2、對s1的突變體庫瞬時轉染并進行表達量測定，選取表達量高的突變質粒；
13、s3、篩選表達量增加的突變質粒進行第二輪隨機突變并測序，構建突變體庫；
14、s4、對s3的突變體庫瞬時轉染并進行表達量測定，選取表達量高的突變質粒；
15、s5、篩選s4中具有突變cmv啟動子、高表達的突變質粒，測序后確定多核苷酸的序列。
16、本專利技術第六個方面公開了上述具有啟動子活性的多核苷酸，表達盒，重組載體，或上述的重組宿主細胞在增強目的基因的表達、生產目標蛋白中的用途。
17、與現有技術相比，本專利技術具有如下技術效果：
18、本專利技術構建一種含有細胞表達強啟動子的質粒，通過易錯pcr技術，以cmv啟動子為基礎，引入隨機突變，篩選獲得更強的啟動子序列。本專利技術中得到的多核苷酸作為啟動子使用，可以明顯增加外源目的蛋白的表達量，為提高瞬轉和穩轉的外源蛋白表達量提供了基礎。
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1.一種具有啟動子活性的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的核苷酸序列如SEQID?NO：1、2或3任一項所示。
2.如權利要求1所述的一種具有啟動子活性的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸由CMV啟動子經隨機突變PCR篩選獲得。
3.一種表達盒，其特征在于，所述表達盒包含如權利要求1-2任一項所述具有啟動子活性的多核苷酸。
4.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體包含如權利要求1-2任一項所述具有啟動子活性的多核苷酸，或權利要求3所述的表達盒。
5.一種重組宿主細胞，其特征在于，所述重組宿主細胞含有如權利要求1-2任一項所述具有啟動子活性的多核苷酸，或權利要求3所述的表達盒，或權利要求4所述的重組載體。
6.一種增強目的基因表達的方法，所述方法包括將如權利要求1-2任一項所述具有啟動子活性的多核苷酸與目的基因可操作地連接。
7.根據權利要求1或2任一項所述的具有啟動子活性的多核苷酸，其特征在于，具體構建和篩選方法如下：
8.如權利要求1-2任一項所述具有啟動子活性的多核苷酸，權利要求3所述的表
...【技術特征摘要】
1.一種具有啟動子活性的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的核苷酸序列如seqid?no：1、2或3任一項所示。
2.如權利要求1所述的一種具有啟動子活性的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸由cmv啟動子經隨機突變pcr篩選獲得。
3.一種表達盒，其特征在于，所述表達盒包含如權利要求1-2任一項所述具有啟動子活性的多核苷酸。
4.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體包含如權利要求1-2任一項所述具有啟動子活性的多核苷酸，或權利要求3所述的表達盒。
5.一種重組宿主細胞，其特征在于，所述重組宿主細...
【專利技術屬性】
技術研發人員：丁玥，黃一凡，肖志華，
申請(專利權)人：上海奧浦邁生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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