【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及大熊貓繁殖，尤其是涉及一種大熊貓真孕的預測方法。
技術介紹
1、大熊貓（ailuropodamelanoleuca）在妊娠中存在兩大顯著特點。一方面是延長著床。延長著床的發生使得大熊貓妊娠期一般85-185天。另一方面，大熊貓還會出現假孕現象。假孕大熊貓表現出同真懷孕大熊貓相似的行為學、生理學和性激素變化。其中，行為學和生理學現象包括食欲減退、做窩、乳房增大等；性激素方面表現為真懷孕和假孕大熊貓尿液孕酮所維持的時間和含量并沒有差異。假孕個體最后基本上診斷為妊娠失敗，而妊娠失敗推測與未觀察到的胚胎或者胎兒死亡有關。目前，對大熊貓真孕的預測方法大致包括分子生物學法及b超法兩種。
2、在申請號為“cn202210794976.5”的專利文件中公開了一種檢驗大熊貓懷孕早期的分子方法，利用懷孕大熊貓和未懷孕大熊貓之間顯著差異表達的先天性免疫和適應性免疫基因作為markers，通過實時熒光定量pcr，對待測樣品中的markers進行定量檢測。該篇專利文件從分子生物學層面上檢驗大熊貓懷孕情況，雖然能在一定程度上對大熊貓真孕與否進行預測，但是其所使用的待測樣品獲取難度相對較大，且操作難度相對較高，專業性較強。
3、而采用b超診斷技術判斷大熊貓是否真孕方法，一方面由于胎兒只有母體重量的約1/1000，在診斷操作中對b?超檢測技術人員要求較高，否則容易將腸道食物等誤判為胎兒。另一方面，接受?b?超檢測的大熊貓需要長期馴化才能按照指令配合b?超檢測，每年參與配種的大熊貓中，接受馴化并配合b?超檢測檢測的個體占少數
4、因此，本專利技術提供一種大熊貓真孕的預測方法，用于解決上述所提出的技術問題。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種大熊貓真孕的預測方法，其不僅能精準且科學地判斷配種大熊貓真孕予否，而且預測結果提前到真孕大熊貓臨產前1-2周，對提前改變真孕大熊貓的飼養管理，新生大熊貓接生工作的制定實施及優化圈養大熊貓的繁殖管理具有重要意義。再者，本專利技術提供的預測方法不僅簡化了操作工序，節省了大量的人力物力，也豐富了大熊貓真孕與假孕的甄別方法。
2、為實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：
3、一種大熊貓真孕的預測方法，包括以下步驟：
4、第一步、對配種后的雌性大熊貓進行尿樣采集，然后檢測尿液中的孕激素濃度及新蝶呤濃度；用測得的孕激素濃度及新蝶呤濃度分別除以尿樣中的肌酐濃度，得到孕激素校正值及新蝶呤校正值，并將（ng/ml?cr）作為孕激素校正值及新蝶呤校正值的計量單位；
5、第二步、從雌性大熊貓尿液中孕激素校正值首次高于100ng/ml?cr起，至孕激素校正值升至峰值前期間對應的新蝶呤校正值的平均值計為n1；孕激素校正值從峰值首次降至低于200ng/ml?cr期間對應的新蝶呤校正值的平均值計為n2；當n2/n1值介于1.39-2.08（95%ci）時，指示配種大熊貓為真孕，否則為假孕。
6、更進一步地，雌性大熊貓尿樣采集頻率為1次/周；且尿液采集時間為早上7:00-9:00。
7、更進一步地，所述尿樣采集的具體操作如下：雌性大熊貓排尿后用一次性注射器從干凈的獸舍地面吸取2ml尿液并裝入采樣管中，然后標注好對應的大熊貓名字與采樣日期。
8、更進一步地，采集的雌性大熊貓尿樣在室溫條件下以3000r/min的速率離心處理10min，然后取離心后尿樣備用。
9、更進一步地，采用酶聯免疫法測定雌性大熊貓尿樣中孕激素濃度與新蝶呤濃度。
10、更進一步地，采用商品化elisa試劑盒測定雌性大熊貓尿樣中的新蝶呤濃度。
11、與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：
12、1、本專利技術基于妊娠期間母體處于生殖應激狀態下，其免疫力會隨著妊娠的發展而逐漸降低這一生理特征對雌性大熊貓進行真孕預測，不僅能精準且科學地判斷配種大熊貓真孕予否，而且預測結果提前到真孕大熊貓臨產前1-2周，對提前改變真孕大熊貓的飼養管理，新生大熊貓接生工作的制定實施及優化圈養大熊貓的繁殖管理具有重要意義。再者，本專利技術提供的預測方法從妊娠代謝產物方向入手豐富了大熊貓真孕與假孕的甄別方法。
13、2、本專利技術從妊娠代謝產物方向入手，采用elisa方法無需b超診斷的專業培訓，也無需對配種大熊貓進行馴化，節省大量人力物力。此外，相較于分子生物學方法，本專利技術以大熊貓尿液為待測樣品，樣品獲取較為容易，同時，孕激素與新蝶呤濃度的檢測方法也比較簡單，易于實施。
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1.一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于：雌性大熊貓尿樣采集頻率為1次/周；且尿液采集時間為早上7:00-9:00。
3.根據權利要求1所述的一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于，所述尿樣采集的具體操作如下：雌性大熊貓排尿后用一次性注射器從干凈的獸舍地面吸取2ml尿液并裝入采樣管中，然后標注好對應的大熊貓名字與采樣日期。
4.根據權利要求1所述的一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于：采集的雌性大熊貓尿樣在室溫條件下以3000r/min的速率離心處理10min，然后取離心后尿樣備用。
5.根據權利要求1所述的一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于：采用酶聯免疫法測定雌性大熊貓尿樣中孕激素濃度與新蝶呤濃度。
6.根據權利要求1所述的一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于：采用商品化ELISA試劑盒測定雌性大熊貓尿樣中的新蝶呤濃度。
【技術特征摘要】
1.一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于：雌性大熊貓尿樣采集頻率為1次/周；且尿液采集時間為早上7:00-9:00。
3.根據權利要求1所述的一種大熊貓真孕的預測方法，其特征在于，所述尿樣采集的具體操作如下：雌性大熊貓排尿后用一次性注射器從干凈的獸舍地面吸取2ml尿液并裝入采樣管中，然后標注好對應的大熊貓名字與采樣日期。
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃河，葉宗金，侯蓉，劉玉良，蘭景超，羅娌，李明喜，楊奎興，張名岳，李嚴，胡賢彪，蔡開來，
申請(專利權)人：成都大熊貓繁育研究基地，
類型：發明
國別省市：
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