【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)涉及nr1d1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，屬于生物。
技術(shù)介紹
1、在雌性動(dòng)物中，每個(gè)發(fā)情周期的排卵成功對(duì)于后代的產(chǎn)生具有決定性意義。卵泡的發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，從原始卵泡的形成到最終的排卵，其中僅有少數(shù)卵泡能夠成熟并進(jìn)入排卵階段，而其余的卵泡均閉鎖甚至死亡。卵泡閉鎖是指卵泡結(jié)構(gòu)受損和發(fā)育受阻，這一現(xiàn)象在哺乳動(dòng)物中持續(xù)存在。研究顯示，顆粒細(xì)胞的增殖與凋亡在卵泡發(fā)育和閉鎖過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色。盡管卵泡發(fā)育與顆粒細(xì)胞功能之間的關(guān)系已有所揭示，但其上游調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡的信號(hào)機(jī)制仍不甚明了。
2、在哺乳動(dòng)物中，眾多行為和生理功能均在晝夜交替進(jìn)行以適應(yīng)外界環(huán)境的變化，這一現(xiàn)象被稱(chēng)為“晝夜節(jié)律”，由機(jī)體內(nèi)部調(diào)節(jié)以適應(yīng)內(nèi)外環(huán)境變化所介導(dǎo)。從系統(tǒng)角度分析，晝夜節(jié)律不僅受大腦的調(diào)控，還受到生殖器官如睪丸和卵巢等的調(diào)節(jié)。晝夜節(jié)律的關(guān)鍵因子bmal1/clock復(fù)合物啟動(dòng)核受體家族成員nr1d1的轉(zhuǎn)錄。核心生物鐘蛋白（bmal1，nr1d1和dbp）通過(guò)e-box，rore和d-box等位于啟動(dòng)子區(qū)域及外顯子區(qū)域的cis調(diào)控元件，調(diào)節(jié)生物的晝夜節(jié)律，進(jìn)而維持生物學(xué)功能。nr1d1基因敲除的雌雄小鼠均表現(xiàn)出不育現(xiàn)象，這表明晝夜節(jié)律系統(tǒng)對(duì)哺乳動(dòng)物的繁殖功能至關(guān)重要。已有研究指出nr1d1參與精子發(fā)生，并通過(guò)socs3/jak/stat3信號(hào)通路抑制上皮性卵巢癌細(xì)胞的增殖，參與調(diào)節(jié)包括代謝、炎癥、細(xì)胞凋亡和自噬等多種生物學(xué)過(guò)程。
3、顆粒細(xì)胞及其相關(guān)激素的分泌為卵母細(xì)胞的發(fā)育提供了充足的物理和化學(xué)環(huán)境，對(duì)卵母細(xì)胞的成熟發(fā)
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專(zhuān)利技術(shù)的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，推測(cè)nr1d1可能通過(guò)影響顆粒細(xì)胞功能來(lái)調(diào)節(jié)卵泡發(fā)育，進(jìn)而影響家畜的繁殖過(guò)程。為證實(shí)該推測(cè)，本專(zhuān)利技術(shù)提出nr1d1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，?通過(guò)sirna技術(shù)下調(diào)nr1d1的表達(dá)水平，并利用分子實(shí)驗(yàn)及商品化試劑盒檢測(cè)nr1d1對(duì)顆粒細(xì)胞功能的影響，為nr1d1在繁殖功能中的研究奠定基礎(chǔ)。
2、本專(zhuān)利技術(shù)第一目的在于提供nr1d1基因在制備用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品中的應(yīng)用，使制備得到的調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品至少具有調(diào)控顆粒細(xì)胞凋亡、活力、細(xì)胞增殖和基因表達(dá)中至少一種作用。
3、本專(zhuān)利技術(shù)的第二目的在于提供一種用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品。
4、本專(zhuān)利技術(shù)的第三目的在于提供一種顆粒細(xì)胞的調(diào)控方法。
5、本專(zhuān)利技術(shù)的第四目的在于提供上述用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品或上述顆粒細(xì)胞的調(diào)控方法的應(yīng)用。
6、本專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的：本專(zhuān)利技術(shù)提供了nr1d1基因在制備用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品中的應(yīng)用；所述調(diào)控顆粒細(xì)胞包括：調(diào)控顆粒細(xì)胞增殖凋亡，調(diào)控顆粒細(xì)胞基因的表達(dá)，和調(diào)控顆粒細(xì)胞活力及類(lèi)固醇激素相關(guān)基因中的至少一種。
7、所述調(diào)控顆粒細(xì)胞基因的表達(dá)包括調(diào)控bax基因、bcl2基因、hsd17b12基因、cyp11a1基因和cyp19a1中的至少一種。
8、本專(zhuān)利技術(shù)還提供了一種用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括用于抑制表達(dá)nr1d1基因的小干擾rna（sirna），序列如seq?id?no:1和seq?id?no:2所示。
9、本專(zhuān)利技術(shù)進(jìn)一步提供了一種顆粒細(xì)胞的調(diào)控方法，所述調(diào)控方法包括根據(jù)ncbi數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的綿羊nr1d1基因的cds區(qū)序列，設(shè)計(jì)nr1d1的小干擾rna（sirna），該序列由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成，利用上述序列進(jìn)行qpcr實(shí)驗(yàn)。
10、本專(zhuān)利技術(shù)還提供了所述用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品或所述顆粒細(xì)胞的調(diào)控方法在如下(1)～(4)中至少一種應(yīng)用；
11、1.?調(diào)控顆粒細(xì)胞功能；2.?調(diào)控卵泡發(fā)育；3.?調(diào)控卵巢發(fā)育；4.?制備調(diào)控卵泡發(fā)育的產(chǎn)品，
12、基于本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的nr1d1基因?qū)︻w粒細(xì)胞的調(diào)控作用，本專(zhuān)利技術(shù)提供了nr1d1基因在制備用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品中的應(yīng)用，用于調(diào)控顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品，顆粒細(xì)胞的調(diào)控方法及其應(yīng)用。
13、本專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，nr1d1基因能夠促進(jìn)顆粒細(xì)胞的增殖；nr1d1基因能夠抑制顆粒細(xì)胞的凋亡；nr1d1基因能夠促進(jìn)顆粒細(xì)胞的活力；nr1d1基因還與顆粒細(xì)胞中bax基因、bcl2基因、hsd17b12基因、cyp11a1基因和cyp19a1基因的表達(dá)相關(guān)，nr1d1基因可以抑制bax基因，促進(jìn)bcl2基因、hsd17b12基因、cyp11a1基因和cyp19a1基因的表達(dá)。
14、鑒于nr1d1基因在顆粒細(xì)胞調(diào)控中的作用，本專(zhuān)利技術(shù)提供的顆粒細(xì)胞的調(diào)控方法及其相關(guān)產(chǎn)品能夠有效地調(diào)控顆粒細(xì)胞的增殖凋亡和活力，并調(diào)控卵泡發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)。鑒于顆粒細(xì)胞對(duì)卵泡和卵巢發(fā)育的調(diào)控作用，上述顆粒細(xì)胞的調(diào)控方法以及產(chǎn)品進(jìn)一步應(yīng)用于調(diào)控卵泡和卵巢的發(fā)育，或用于制備調(diào)控卵泡和卵巢發(fā)育的產(chǎn)品，其有益效果是實(shí)現(xiàn)對(duì)卵泡和/或卵巢的體內(nèi)或體外調(diào)控作用，為顆粒細(xì)胞、卵泡以及卵巢的發(fā)育以及生理生化功能的研究提供了方法和產(chǎn)品的保障。此外，有助于深化對(duì)卵泡發(fā)育后期卵母細(xì)胞成熟機(jī)制的認(rèn)識(shí)，進(jìn)一步挖掘卵泡發(fā)育相關(guān)因子，完善卵泡發(fā)育相關(guān)信號(hào)通路，揭示卵泡發(fā)育的機(jī)制，優(yōu)化卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)體系。這對(duì)于哺乳動(dòng)物超數(shù)排卵、多胎品種選育、改善卵泡發(fā)育異常以及治療不孕癥等研究領(lǐng)域具有重要的意義。
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1.NR1D1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用,其特征在于：包括調(diào)控NR1D1基因siRNA所示序列在制備調(diào)控綿羊顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品中的應(yīng)用，序列如SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述?NR1D1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，其特征在于：所述調(diào)控綿羊顆粒細(xì)胞包括調(diào)控顆粒細(xì)胞增殖凋亡、調(diào)控顆粒細(xì)胞活力、調(diào)控顆粒細(xì)胞基因的表達(dá)和調(diào)控卵泡顆粒細(xì)胞類(lèi)固醇激素分泌基因中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述?NR1D1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，其特征在于：NR1D1基因siRNA所示序列在下調(diào)NR1D1基因的表達(dá)水平，抑制綿羊顆粒細(xì)胞凋亡的基因表達(dá)中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述?NR1D1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，其特征在于：所述調(diào)控綿羊顆粒細(xì)胞增殖凋亡的基因包括調(diào)控BAX、BCL2基因表達(dá)中的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述?NR1D1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，其特征在于：所述調(diào)控顆粒細(xì)胞活力包括下調(diào)顆粒細(xì)胞中NR1D1基因的表達(dá)，細(xì)胞活力和增殖水平升高。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述?NR1D1
...【技術(shù)特征摘要】
1.nr1d1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用,其特征在于：包括調(diào)控nr1d1基因sirna所示序列在制備調(diào)控綿羊顆粒細(xì)胞的產(chǎn)品中的應(yīng)用，序列如seq?id?no:1和seq?id?no:2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述?nr1d1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，其特征在于：所述調(diào)控綿羊顆粒細(xì)胞包括調(diào)控顆粒細(xì)胞增殖凋亡、調(diào)控顆粒細(xì)胞活力、調(diào)控顆粒細(xì)胞基因的表達(dá)和調(diào)控卵泡顆粒細(xì)胞類(lèi)固醇激素分泌基因中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述?nr1d1基因在調(diào)控顆粒細(xì)胞中的應(yīng)用，其特征在于：nr1d1基因sirna所示序列在下調(diào)nr1d1基因的表達(dá)水平，抑制綿羊顆...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張艷麗，蔡玉，徐輝，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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