【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于基因工程，具體涉及蒺藜苜蓿非編碼rna?lal在調(diào)控苜蓿耐鹽性中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、公開該
技術(shù)介紹
部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本專利技術(shù)的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。
2、紫花苜蓿(medicago?truncatula)，豆科苜蓿屬多年生宿根草本植物，因其花開紫色，故取名為紫花苜蓿。苜蓿屬多為野生品種，常作為多年生栽培的有紫花苜蓿、黃花苜蓿，屬紫花苜蓿的蛋白質(zhì)最高，故種植面積也為最大。同時(shí)，紫花苜蓿根系發(fā)達(dá)，耐寒耐旱性強(qiáng)，能防水固土、固氮肥田，被稱為“牧草之王”。
3、紫花苜蓿本身具有較強(qiáng)的耐鹽性，其中有些品種的耐鹽性較強(qiáng)，具有在鹽地推廣的潛力。盡管苜蓿對(duì)鹽脅迫具有一定的耐受性，但是土地鹽化日益加劇，嚴(yán)重影響了紫花苜蓿的產(chǎn)量和品質(zhì)。通過(guò)品種改良的方式獲得高耐鹽品種培育周期較長(zhǎng)，因此，開展紫花苜蓿品種耐鹽機(jī)制研究，通過(guò)基因工程手段實(shí)現(xiàn)紫花苜蓿高耐鹽品種的快速培育具有重要意義。
4、高通量測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步表明，90％以上的基因組包含大量的非編碼rna。這些ncrnas根據(jù)其長(zhǎng)度又可分為小rna和長(zhǎng)非編碼rna(lncrma)。非編碼rna(ncrnas)在動(dòng)物和植物的轉(zhuǎn)錄組中占相當(dāng)大的比例，盡管缺乏蛋白質(zhì)編碼的能力，但它在基因表達(dá)的調(diào)控中起著重要的作用。長(zhǎng)鏈非編碼rna(lncrna)的長(zhǎng)度從200nt到幾十kb不等，是一類重要的非編碼rna，在真核生物中被證明具有多種功能。大多數(shù)lncrna可以被rna聚合
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)基于測(cè)序和轉(zhuǎn)錄組分析技術(shù)，在蒺藜苜蓿的基因組中發(fā)現(xiàn)了一種未被報(bào)道的非編碼rna，序列如seq?id?no:1所示，命名為lncrna?lal，以下文件中以lal進(jìn)行指代。
2、經(jīng)驗(yàn)證，上述lal是一種蒺藜苜蓿應(yīng)答鹽脅迫長(zhǎng)鏈非編碼rna，抑制該非編碼rna的表達(dá)能夠提高苜蓿植株的耐鹽性；進(jìn)一步的，本專利技術(shù)還針對(duì)該非編碼rna調(diào)控鹽脅迫的機(jī)制進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，mtlhcb1通過(guò)抑制lncrna?lal表達(dá)提高蒺藜苜蓿的耐鹽能力，依據(jù)上述研究結(jié)果的啟示，本專利技術(shù)提供如下的技術(shù)方案：
3、本專利技術(shù)第一方面，提供一種非編碼rna?lal，其序列如下：
4、acuguguaugaccucgaguucacgguucuuggcaaaugucucugggucggcagaaaucacuucucauugguaugguguaguuuuggcucacuuuccaggggcaaaguuuguggcauaggcccaugcauuguuguuaacugggucagcaagguggucagcgagguucucaauaggucccuuuccggugacaauggccugaacgaagaauccaaacauagagaacauagcuaaccuaccauuuuuuaguucuuucaccuucaacucugcaaaagccucgggaucuucggcaaggcccaaggggucaaagcugccaccuggguagaguggaucgacuaccucgccuagagguccaccagcaauacgguaacccucaacagcacccauuaagauaacuuggacagcccauauagcaaggaugcuuugugcauggacuagacuuggguuac(seq?id?no:1所示)。
5、第二方面，非編碼rna?lal在調(diào)控苜蓿耐鹽性中的應(yīng)用。
6、上述應(yīng)用的具體形式包括但不限于以下任意一種：
7、1)通過(guò)抑制苜蓿植株中非編碼rna?lal的表達(dá)以提高植株的耐鹽性；
8、2)將非編碼rna?lal的抑制劑應(yīng)用于制備一種提高苜蓿耐鹽性的產(chǎn)品；
9、3)通過(guò)檢測(cè)非編碼rna?lal的含量，對(duì)耐鹽植株進(jìn)行篩選；
10、4)將非編碼rna?lal的檢測(cè)引物應(yīng)用于制備耐鹽苜蓿篩選試劑盒。
11、上述1)方面中，所述“抑制”的方式包括敲除、沉默或突變苜蓿中相應(yīng)的序列、位點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)抑制該lncrna表達(dá)的目的。
12、上述2)方面中，所述“抑制劑”包括用于抑制、敲除或沉默非編碼rna?lal表達(dá)的重組載體或工程菌，還包括用于抑制第一方面所示非編碼rna?lal表達(dá)的試劑。所述重組載體的一種實(shí)施方式為基于crispr系統(tǒng)的基因編輯重組載體；所述試劑為能夠抑制植物組織中非編碼rna?lal表達(dá)、合成的化學(xué)試劑，包括小分子化合物實(shí)體或核酸類物質(zhì)，如適配體等。
13、上述3)方面所述的篩選，可行的篩選方法如pcr方法，具體的實(shí)例如實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)方法。
14、上述4)方面中，所述非編碼rna?lal的檢測(cè)引物，其序列如seq?id?no:2-3所示。
15、另外，上述應(yīng)用中所稱的苜蓿，包括但不限于褐斑苜蓿、天藍(lán)苜蓿、小苜蓿、南苜蓿、早花苜蓿、花苜蓿、蒺藜苜蓿、紫花苜蓿、黃苜蓿、野苜蓿中的任意一種；更為優(yōu)選的，為紫花苜蓿。
16、以上一個(gè)或多個(gè)技術(shù)方案的有益效果是：
17、本專利技術(shù)首先提供了一種苜蓿基因組中的新型lncrna?lal，并明確了該非編碼rna在調(diào)控苜蓿耐鹽性中的應(yīng)用。根據(jù)本專利技術(shù)的研究結(jié)果，lal存在于蒺藜苜蓿且負(fù)責(zé)調(diào)控蒺藜苜蓿應(yīng)答鹽脅迫其突變后增強(qiáng)植物鹽耐受性，且蒺藜苜蓿基因mtlhcb1能夠被lal調(diào)控呈現(xiàn)不同的表達(dá)水平，為苜蓿耐鹽性的研究提供了相應(yīng)的參考依據(jù)，也為苜蓿耐鹽品種的研發(fā)提供了可行的研究思路。
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1.一種非編碼RNA?LAL，其特征在于，其序列如SEQ?ID?NO:1所示。
2.非編碼RNA?LAL在調(diào)控苜蓿耐鹽性中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用的具體形式如下：
4.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，1)方面中，所述抑制的方式為敲除、沉默或突變苜蓿中相應(yīng)的序列、位點(diǎn)。
5.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，2)方面中，所述抑制劑包括用于抑制、敲除或沉默非編碼RNA?LAL表達(dá)的重組載體或工程菌，還包括用于抑制非編碼RNA?LAL表達(dá)的試劑。
6.如權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于，所述重組載體為基于CRISPR系統(tǒng)的基因編輯重組載體；所述試劑為能夠抑制植物組織中非編碼RNA?LAL表達(dá)、合成的化學(xué)試劑，包括小分子化合物實(shí)體或核酸類物質(zhì)。
7.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，3)方面所述的篩選方法為實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。
8.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，4)方面中，所述非編碼RNA?LAL的檢測(cè)引物，其序列如SEQ?ID?NO:2-3所示。
10.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，為紫花苜蓿。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種非編碼rna?lal，其特征在于，其序列如seq?id?no:1所示。
2.非編碼rna?lal在調(diào)控苜蓿耐鹽性中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用的具體形式如下：
4.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，1)方面中，所述抑制的方式為敲除、沉默或突變苜蓿中相應(yīng)的序列、位點(diǎn)。
5.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，2)方面中，所述抑制劑包括用于抑制、敲除或沉默非編碼rna?lal表達(dá)的重組載體或工程菌，還包括用于抑制非編碼rna?lal表達(dá)的試劑。
6.如權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于，所述重組載體為基于crisp...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周傳恩，趙陽(yáng)，劉婭菲，張斐然，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：山東大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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