【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及二斑葉螨防治，尤其涉及一種靶向二斑葉螨gaba基因的dsrna及其應用。
技術介紹
1、1983年，二斑葉螨首次出現于北京[1]，并迅速蔓延到河北、山東、陜西、寧夏、甘肅等地[2]，成為一種對環境和人類健康造成極大威脅的外來物種。據研究報道，二斑葉螨的寄主植物高達1100多種，對世界范圍內如蔬菜，棉花，果樹和花卉等重要經濟作物造成危害[3]。二斑葉螨是一種常見的害螨，它們通常會在植物的葉脈周圍聚集并繁殖。種群密度增長至一定數量時，蟲體尾部會吐絲并轉移到新的葉片進行危害。除了寄主植物的葉片，二斑葉螨還危害植株的花蕊、莖稈、果柄等部位，吸取其內部的汁液，使其從正常的綠色變為黃色，嚴重者可造成整株植物枯萎并死亡。二斑葉螨的普遍存在以及其快速的繁殖能力，加之它們的高敏感性，導致它們在田野中的防控變得困難。這種害螨的數量正在逐漸增加，并且會給農業帶來極其惡劣的后果，導致巨額的財務損失。其中若螨和成螨危害最嚴重，本專利技術以成螨期的二斑葉螨進行研究。
2、目前，二斑葉螨的防治方法包括農業、生物和化學技術。農業防治一般是通過田間管理措施或選擇抗性作物品種來對二斑葉螨進行防治，如秋季深耕、冬季漫灌等方法均可消滅大量越冬害蟲(螨)[9]。但受制于不同地區、勞動力和季節等因素，農業防治的效果沒有化學防治的效果好[7][8]；生物防治通過利用二斑葉螨的捕食性和寄生性天敵，可以有效地控制它們的繁殖。其捕食性天敵有捕食螨、捕食性蜘蛛和捕食性昆蟲等等；其寄生性天敵則包括一些細菌、真菌及病毒[10]。盡管生物防治在環境友好、害蟲(螨
3、一種化學農藥剛上市時防治效果可普遍達到90％以上，但是由于在同一地區長期依賴單一殺螨劑、用藥不科學不規范，導致二斑葉螨出現抗藥性[12]。由于二斑葉螨具有快速繁殖和短的世代周期，而且它們還能夠獨自進行生育，這使得它們更容易產生抗藥性。研究表明，目前二斑葉螨已經對96種殺蟲劑產生了不同程度的耐藥性[5]，成為全球最嚴重的有害生物之一[11]。近年來，由于新型殺螨劑研發周期長，多地二斑葉螨田間種群已經對傳統殺螨劑出現耐藥性，并且會隨著使用時間的增長而產生更高的耐藥性水平。而新研發出的殺螨劑，也表現為低抗，中抗和高抗水平。目前對化學農藥的依賴程度較高，間接導致了二斑葉螨抗藥性產生的加速。根據最新的研究結果，我國的許多二斑葉螨田間種群都表現出了極強的抗阿維菌素能力，其抗性倍數可達316.67～1809.51倍[4]。研究表明，殺蟲(螨)劑作用靶標位點的突變有可能造成害蟲(螨)對藥劑的敏感性降低，導致害蟲(螨)的再猖獗。目前對化學農藥的依賴度仍高居不下，產生的抗藥性相關問題得不到根本性的解決。另外化學農藥對環境的危害，不符合可持續發展的觀念。因此，從長遠發展的眼光來看，探索一種高效、對環境友好且不易產生抗藥性的農藥十分有必要。
4、rna干擾是一個用來探索細胞內基因組表現的方法，它通過將內源性和外來性的雙鏈rna(double-strand?rna，dsrna)導入細胞內，然后經由dicer核酸酶將它們裂解為21～23bp的雙鏈rna(small?interference?rna)，sirna可以利用其自身的機制，將核酸酶、解螺旋酶結合起來，構建出rna-inducing?silence?complex(risc)沉默結合體，它可以有效地抑制目的基因的表達[16][17]，使得目的蛋白的表達水平顯著低于正常水平，最終導致其對應的生理功能的喪失[13][14][15]。rnai方法在生物學上被廣泛應用，它的獨特之處在于其快速、精確、穩定以及可遺傳。
5、本專利技術以二斑葉螨為研究對象，測出六類主流殺螨劑作用靶標基因序列并設計引物，合成出相應dsrna后，通過注射法rnai實驗對二斑葉螨敏感品系(ss)進行生物測定，并篩選出合適的rnai分子靶標，由此提供一種提供一種靶向二斑葉螨gaba基因的dsrna，用于防治二斑葉螨。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種靶向二斑葉螨gaba基因的dsrna及其應用，用于防治二斑葉螨。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用了如下技術方案：
3、本專利技術提供一種靶向二斑葉螨gaba基因的dsrna，所述dsrna是由如seq?id?no.1所示的核苷酸序列作為正義rna和其反向互補序列作為反義rna組成的雙鏈rna。
4、本專利技術還提供上述的dsrna的應用，所述應用包括以下中的至少一種：
5、1)防治二斑葉螨或制備防治二斑葉螨的產品；
6、2)促進二斑葉螨死亡或制備促進二斑葉螨死亡的產品；
7、3)抑制二斑葉螨生長或制備抑制二斑葉螨生長的產品；
8、4)抑制二斑葉螨體gaba基因的表達或制備抑制二斑葉螨體gaba基因表達的產品。
9、本專利技術還提供一種用于防治二斑葉螨的組合物，所述組合物包括如權利要求1所述的dsrna，以及，殺螨劑。
10、本專利技術至少具備以下有益效果：
11、本專利技術提供的了靶向二斑葉螨gaba基因的dsrna及其制備方法和應用；通過注射方式將該dsrna片段注射進入螨蟲腹部，對靶標gaba基因的沉默效果佳，該特異性靶向二斑葉螨gaba的dsrna具有靶向降解gaba基因的高效作用；本專利技術的dsrna在實現gaba基因沉默后，能夠顯著增強如殺螨劑對二斑葉螨的殺螨效果。本專利技術提供的dsrna靶向性高、制備成本低廉，實用性強。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種靶向二斑葉螨GABA基因的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA是由如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列作為正義RNA和其反向互補序列作為反義RNA組成的雙鏈RNA。
2.權利要求1所述的dsRNA的應用，其特征在于，所述應用包括以下中的至少一種：
3.一種用于防治二斑葉螨的組合物，其特征在于，所述組合物包括如權利要求1所述的dsRNA，以及，殺螨劑。
4.如權利要求1所述的靶向二斑葉螨GABA基因的dsRNA的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，在步驟S1之前還包括以下步驟：
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述S1中，提取二斑葉螨總RNA，包括：
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述S5中，回收PCR產物，包括：
8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述S6中，合成并純化dsRNA，包括dsRNA的合成，所述dsRNA的合成包括以下步驟：
9.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述S6中，合成并純
...【技術特征摘要】
1.一種靶向二斑葉螨gaba基因的dsrna，其特征在于，所述dsrna是由如seq?id?no.1所示的核苷酸序列作為正義rna和其反向互補序列作為反義rna組成的雙鏈rna。
2.權利要求1所述的dsrna的應用，其特征在于，所述應用包括以下中的至少一種：
3.一種用于防治二斑葉螨的組合物，其特征在于，所述組合物包括如權利要求1所述的dsrna，以及，殺螨劑。
4.如權利要求1所述的靶向二斑葉螨gaba基因的dsrna的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4...
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