【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于農藥檢測，尤其涉及一種哺乳動物血漿、組織器官、尿液、糞便中新型新煙堿類殺蟲劑殘留量的分析檢測方法，采用液相色譜ultimate?3000串聯軌道阱高分辨質譜q-exactive來測定各基質樣本中新型新煙堿類殺蟲劑殘留量。
技術介紹
1、新煙堿類殺蟲劑是繼有機氯殺蟲劑、有機磷殺蟲劑、氨基甲酸酯類殺蟲劑和擬除蟲菊酯類殺蟲劑等之后的一類殺蟲劑，它可以通過選擇性地與昆蟲體內的煙堿乙酰膽堿受體結合，影響昆蟲的中樞神經系統，造成昆蟲持續興奮、麻痹，進而達到殺蟲的效果。但由于傳統新煙堿類殺蟲劑的廣泛使用，大量靶標昆蟲對其產生了不同水平的抗性，且造成部分益蟲如蜜蜂等的死亡或以及食蟲鳥類數量的銳減。因此，新型新煙堿類殺蟲劑應運而生。
2、新型新煙堿類殺蟲劑對具有新煙堿類殺蟲劑抗性的昆蟲有較高的殺蟲活性，且對于蜜蜂等昆蟲有較低的毒性。其中氯噻啉和氟啶蟲酰胺兩種新型新煙堿類殺蟲劑分別于2002年和2007年在我國登記注冊，其分別約占我國市場份額的5％和10％。由于其被廣泛應用，且具有低揮發性、高水溶性等特性，導致在全球范圍內不同環境介質中不斷檢測出這些殺蟲劑。
3、目前對新型新煙堿類殺蟲劑的研究大多集中于環境和作物中的殘留水平以及對昆蟲的毒性安全評價，而對其在哺乳動物體內的內暴露水平研究還很匱乏，相關的分析檢測方法亟需建立。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種哺乳動物血漿、組織器官、尿液、糞便中新型新煙堿類殺蟲劑殘留量的分析檢測方法，操作簡單，穩定性好，
2、為了實現上述目的，本申請采用了如下技術方案：
3、本專利技術提供了一種哺乳動物血漿、組織器官、尿液、糞便中新型新煙堿類殺蟲劑殘留量的分析檢測方法，包括以下步驟：
4、s1：哺乳動物血漿/組織器官/尿液/糞便樣品前處理；
5、其中，哺乳動物血漿的前處理方法為：
6、將哺乳動物血漿樣品解凍之后，移取血漿樣品于離心管中，加入乙腈沉淀蛋白，經渦旋、振蕩處理后離心，得上清液；
7、利用hlb?spe固相萃取小柱對上清液進行濃縮和凈化，首先用milli-q水和有機溶劑對hlb?spe固相萃取小柱進行活化，然后將上清液過hlb?spe固相萃取小柱后用有機溶劑對hlb?spe固相萃取小柱進行洗脫，收集洗脫液；
8、將洗脫液于氮氣流下氮吹濃縮，再用溶劑定容，然后將所得溶液離心，移取上清液，待上機檢測；
9、哺乳動物組織器官的前處理方法為：
10、稱取勻漿后的組織器官樣品并加入有機溶劑，經振蕩、離心處理后，得上清液；
11、利用hlb?spe固相萃取小柱對上清液進行濃縮和凈化，首先用milli-q水和有機溶劑對hlb?spe固相萃取小柱進行活化，然后將上清液過hlb?spe固相萃取小柱后收集流出液；
12、將收集液于氮氣流下氮吹濃縮，再用溶劑定容，然后將所得溶液離心，移取上清液，待上機檢測；
13、哺乳動物尿液的前處理方法為：
14、將哺乳動物尿液樣品解凍之后，移取尿液樣品利用hlb?spe固相萃取小柱進行濃縮和凈化，首先用有機溶劑和milli-q水對hlb?spe固相萃取小柱進行活化，然后將尿液樣品過hlb?spe固相萃取小柱后用有機溶劑對hlb?spe固相萃取小柱進行洗脫，收集洗脫液；
15、然后將洗脫液于氮氣流下氮吹至近干，再用溶劑定容，然后將所得溶液離心，移取上清液，待上機檢測；
16、哺乳動物糞便的前處理方法為：
17、哺乳動物糞便冷凍干燥后，充分研磨，稱量糞便樣品并加入有機溶劑，經振蕩、離心處理后，得上清液；
18、利用hlb?spe固相萃取小柱對上清液進行濃縮和凈化，首先用milli-q水和有機溶劑對hlb?spe固相萃取小柱進行活化，然后將上清液過hlb?spe固相萃取小柱后收集流出液；
19、將收集液于氮氣流下氮吹濃縮，再用溶劑定容，然后將所得溶液離心，移取上清液，待上機檢測；
20、s2：處理后的樣品進行上機檢測，具體儀器分析方法為：
21、利用液相色譜ultimate?3000串聯軌道阱高分辨質譜q-exactive對目標化合物進行定量分析。
22、在以上技術方案中，s2中，所使用的色譜柱為hypersil?gold?tm?c18色譜柱，預柱為hypersil?gold?tm?c18，流動相分別為含0.1％甲酸的milli-q水和乙腈，質譜在正電離模式下獲得全掃描質譜數據，掃描范圍為100-750da，分辨率為140,000，高純氮氣被作為鞘氣和輔助氣，鞘氣壓力和輔助氣壓力分別為35psi和15arb，噴霧電壓為+3000v；離子傳輸管溫度為350℃，h-esi加熱溫度為300℃，采用電噴霧離子源。
23、在以上技術方案中，所述哺乳動物為老鼠、貓、狗、牛、羊、兔子、驢、馬其中之一。
24、在以上技術方案中，哺乳動物糞便冷凍干燥的時間為5-7天。
25、在以上技術方案中，固相萃取過程中使用的有機溶劑為乙腈、含0.1％甲酸的乙腈和體積比為3：7的乙腈：二氯甲烷其中之一。根據不同的殺蟲劑選擇不同有機溶劑。
26、在以上技術方案中，用于定容的溶劑為乙腈。
27、本專利技術的有益效果在于：本專利技術通過有機溶劑提取、固相萃取、有機溶劑洗脫和氮吹濃縮一系列實驗操作步驟，提供了一種操作簡單、回收率高、穩定性好適用于處理哺乳動物血漿、組織器官、尿液、糞便樣本的前處理方法，然后將前處理獲得到的樣品利用液相色譜ultimate?3000串聯軌道阱高分辨質譜q-exactive對目標殺蟲劑進行定量分析。本專利技術分析檢測方法為評估新型新煙堿類殺蟲劑在哺乳動物體中的內暴露水平提供參考。
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1.一種哺乳動物血漿、組織器官、尿液、糞便中新型新煙堿類殺蟲劑殘留量的分析檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述分析檢測方法，其特征在于：S2中，所使用的色譜柱為HypersilGold?TM?C18色譜柱，預柱為Hypersil?Gold?TM?C18，流動相分別為含0.1％甲酸的Milli-Q水和乙腈，質譜在正電離模式下獲得全掃描質譜數據，掃描范圍為100-750Da，分辨率為140,000，高純氮氣被作為鞘氣和輔助氣，鞘氣壓力和輔助氣壓力分別為35psi和15arb，噴霧電壓為+3000V；離子傳輸管溫度為350℃，H-ESI加熱溫度為300℃，采用電噴霧離子源。
3.根據權利要求1所述分析檢測方法，其特征在于：所述哺乳動物為老鼠、貓、狗、牛、羊、兔子、驢、馬其中之一。
4.根據權利要求1所述分析檢測方法，其特征在于：哺乳動物糞便冷凍干燥的時間為5-7天。
5.根據權利要求1所述分析檢測方法，其特征在于：固相萃取過程中使用的有機溶劑為乙腈、含0.1％甲酸的乙腈和體積比為3：7的乙腈：二氯甲烷其中之一。p>
6.根據權利要求1所述分析檢測方法，其特征在于：用于定容的溶劑為乙腈。
...【技術特征摘要】
1.一種哺乳動物血漿、組織器官、尿液、糞便中新型新煙堿類殺蟲劑殘留量的分析檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述分析檢測方法，其特征在于：s2中，所使用的色譜柱為hypersilgold?tm?c18色譜柱，預柱為hypersil?gold?tm?c18，流動相分別為含0.1％甲酸的milli-q水和乙腈，質譜在正電離模式下獲得全掃描質譜數據，掃描范圍為100-750da，分辨率為140,000，高純氮氣被作為鞘氣和輔助氣，鞘氣壓力和輔助氣壓力分別為35psi和15arb，噴霧電壓為+3000v；離...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張曉冉，段義爽，梁芳雨，王璞，梁勇，
申請(專利權)人：江漢大學，
類型：發明
國別省市：
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