【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，尤其涉及一種用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗及其制備方法和應用。
技術介紹
1、很多抗原蛋白感染的自然途徑始于上呼吸道的粘膜表面。其中，鼻腔是病毒初期感染的儲庫和后期肺部感染的毒源，也是抵御病毒的第一道防線。鼻內接種疫苗能模擬正常的病毒感染途徑，刺激呼吸道粘膜產生局部特異性免疫應答和有效的交叉保護免疫反應。目前全球約有二十種粘膜疫苗已經進入臨床試驗，但絕大部分是以腺病毒為載體的鼻腔疫苗，由于大部分人體內存在腺病毒的中和抗體，接種后會產生抑制作用而影響其有效性。
2、近年來，致力于開發抗原和佐劑共遞送的納米疫苗平臺進展迅速，如脂質體、兩親性嵌段共聚物等用于遞送平臺的納米載體。基于納米顆粒遞送系統的納米顆粒疫苗與病原體有相似的分子尺寸和較大的比表面積，能夠模擬病原體入侵，易于被受體識別，增強抗原提呈作用；可展示多重抗原表位，也可裝載佐劑，從而誘導更強的免疫應答，是極具潛力的疫苗研發平臺之一。目前，有二十多種候選納米顆粒疫苗已進入臨床試驗階段，另有約六十種處于臨床前開發階段，但絕大多數無法有效地刺激機體產生粘膜免疫應答。
3、麥芽糊精是一種植物多糖，具有粘膜佐劑活性和免疫調節作用，還能刺激細胞免疫和體液免疫應答，促進抗原提呈，誘導ifn-γ、il-5和il-12等細胞因子的分泌。2’,3’-環鳥苷單磷酸-腺苷單磷酸(2’,3’-cgamp)是一種cgas-sting途徑的激動劑，可以促進促炎細胞因子和ⅰ型干擾素的產生，誘導抗原提呈細胞的成熟，上調共刺激信號并增強其提呈或交叉提呈抗原的能力。但2
4、綜上，目前幾乎所有肌肉注射接種的疫苗都無法誘導產生有效的粘膜免疫應答來阻止病毒從上呼吸道入侵，因此如何獲得一種用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗已成為目前亟待解決的問題。
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本專利技術提供一種用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗及其制備方法和應用，本專利技術制備的納米顆粒疫苗可用于黏膜免疫，實現了疫苗佐劑和大分子量抗原蛋白的共遞送，能夠顯著增強機體的粘膜免疫應答，同時也能誘導產生強烈的系統性體液免疫和細胞免疫應答，且粒徑均一，分散性好。
2、為達此目的，本專利技術采用以下技術方案：
3、第一方面，本專利技術提供了一種用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗，所述納米顆粒為核殼結構，核心為具有疏水基團的化合物，外殼為麥芽糊精，所述外殼表面負載抗原蛋白偶聯陽離子聚合物的偶聯物和佐劑。
4、本專利技術中，將具有疏水基團的化合物與麥芽糊精連接形成具有核殼結構的納米顆粒，并在外殼負載抗原蛋白，由于該納米顆粒與病原體有相似的分子尺寸和較大的比表面積，能夠模擬病原體入侵，易于被受體識別，增強抗原提呈作用。且麥芽糊精和佐劑具有較強的協同作用，能夠顯著增強免疫效果。
5、優選地，所述疏水基團包括c10-c20的烴基、酯基、芳基、胺基或酰胺基中的任意一種或至少兩種的組合。所述c10-c20，例如可以是c10、c11、c12、c13、c14、c15、c16、c17、c18、c19或c10等。
6、優選地，所述具有疏水基團的化合物包括l-苯丙氨酸甲酯、十六烷胺、十八硫醇或十八烷胺中的任意一種或至少兩種的組合。
7、優選地，所述具有疏水基團的化合物與麥芽糊精通過化學鍵進行連接形成納米顆粒。
8、優選地，所述化學鍵包括酰胺鍵、酯鍵或硫醚鍵中的任意一種或至少兩種的組合。
9、優選地，所述麥芽糊精的葡萄糖當量為4-20，例如可以是4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20等。
10、優選地，所述麥芽糊精為羧基化麥芽糊精。
11、優選地，所述抗原蛋白包括新型冠狀病毒抗原蛋白新型冠狀病毒抗原蛋白rbd、新型冠狀病毒抗原蛋白rbd二聚體、新型冠狀病毒抗原蛋白rbd三聚體、s蛋白抗原，呼吸道合胞病毒抗原f蛋白、g蛋白以及流感病毒抗原ha蛋白或na蛋白中的任意一種或至少兩種的組合。
12、優選地，所述抗原蛋白包括新型冠狀病毒抗原蛋白。
13、在本專利技術的一個實施例中，選用的是新型冠狀病毒抗原蛋白，該蛋白在本專利技術的結構中主要起到抗原的作用，連接在納米顆粒中能夠顯著提高免疫應答，在理論上不同的抗原蛋白連接在本專利技術的結構中均可具有較好的效果。
14、優選地，所述新型冠狀病毒抗原蛋白的結構為rbd三聚體。
15、優選地，所述新型冠狀病毒抗原蛋白的氨基酸序列為seq?id?no:1。
16、seq?id?no:1：
17、mfvflvllplvssqenqklianqfnsaigkiqdslsstasalgklqdvvnqnaqalntlvkqllvprgsggsggsgglevlfqgpdvdlgdisginasvvniqkeidrlnevaknlneslidlqelrvqptesivrfpnitnlcpfgevfnatrfasvyawnrkrisncvadysvlynsasfstfkcygvsptklndlcftnvyadsfvirgdevrqiapgqtgkiadynyklpddftgcviawnsnnldskvggnynylyrlfrksnlkpferdisteiyqagstpcngvegfncyfpeqsygfoptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkhhhhhh。
18、優選地，所述偶聯物與納米顆粒的連接方式為靜電吸附。
19、優選地，所述佐劑包括2’,3’-cgamp、cpg或polyi：c中的一種或至少兩種的組合。
20、優選地，所述佐劑和偶聯物的連接方式為靜電吸附。
21、優選地，所述陽離子聚合物包括聚乙烯亞胺、樹狀大分子或殼聚糖中的任意一種或至少兩種的組合。
22、優選地，所述陽離子聚合物的分子量為0.5-30kda，例如可以是0.5kda、1.5kda、1.8kda、25kda、3.0kda、5.0kda、6.0kda、10.0kda、15.0kda、20.0kda、25.0kda、28.0kda或30.0kda。
23、優選地，所述納米顆粒、偶聯物和佐劑的質量比為1:(5-20):(0.5-2)。所述(5-20)，例如可以是5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20等。
24、優選地，所述納米顆粒疫苗的粒徑為20-200nm，例如可以是20nm、40nm、60nm、80nm、100nm、120nm、140nm、160nm、180nm或200nm等。
25、本專利技術中，納米顆粒的大小在上述范圍內，與病原體有相似的分子尺寸，能夠更容易被受體識別，從而進行抗原提呈，顯著增強免疫效果。
26、第二方面，本專利技術提供了一種根本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述納米顆粒疫苗為核殼結構，核心為具有疏水基團的化合物，外殼為麥芽糊精，所述外殼表面負載抗原蛋白偶聯陽離子聚合物的偶聯物和佐劑。
2.根據權利要求1所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述疏水基團包括C10-C20的烴基、酯基、芳基、胺基或酰胺基中的任意一種或至少兩種的組合；
3.根據權利要求1或2所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述麥芽糊精為羧基化麥芽糊精；
4.根據權利要求1-3中任一項所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述陽離子聚合物包括聚乙烯亞胺、樹狀大分子或殼聚糖中的任意一種或至少兩種的組合；
5.根據權利要求2-4中任一項所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述納米顆粒、偶聯物和佐劑的質量比為1:(5-20):(0.5-2)；
6.一種根據權利要求1-5中任一項所述的用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：將麥芽糊精進行羧基化后接枝具有疏水基團的化合物形成納米顆粒，將抗原蛋白與陽離子聚合物進行偶聯形成偶聯物，將納米顆粒和偶聯物進行第一次
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述納米顆粒的制備方法包括將羧基化的麥芽糊精進行氧化后，加入具有疏水基團的化合物和氰基硼氫化鈉；
8.根據權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述第一次混合中，納米顆粒和偶聯物的質量比為1:(5-20)；
9.一種根據權利要求1-5中任一項所述的用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗在制備與抗原蛋白感染相關疾病的藥物中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述藥物還含有藥學上可接受的輔料；
...【技術特征摘要】
1.一種用于黏膜免疫的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述納米顆粒疫苗為核殼結構，核心為具有疏水基團的化合物，外殼為麥芽糊精，所述外殼表面負載抗原蛋白偶聯陽離子聚合物的偶聯物和佐劑。
2.根據權利要求1所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述疏水基團包括c10-c20的烴基、酯基、芳基、胺基或酰胺基中的任意一種或至少兩種的組合；
3.根據權利要求1或2所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述麥芽糊精為羧基化麥芽糊精；
4.根據權利要求1-3中任一項所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述陽離子聚合物包括聚乙烯亞胺、樹狀大分子或殼聚糖中的任意一種或至少兩種的組合；
5.根據權利要求2-4中任一項所述的納米顆粒疫苗，其特征在于，所述納米顆粒、偶聯物和佐劑的質量比為1:(5-20):(0.5-2)；
6.一種根據權利要求1-5中...
【專利技術屬性】
技術研發人員：于衛立，胡濤，田雨，齊金銘，申莉娟，
申請(專利權)人：中國科學院過程工程研究所，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。