【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及光敏劑載體，具體涉及一種光敏劑載體及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、光動(dòng)力療法(pdt)是一種新型的腫瘤治療方法，其通過聯(lián)合使用光敏劑、氧氣和光照來實(shí)現(xiàn)治療效果。pdt的作用機(jī)理主要包括兩種類型的光動(dòng)力反應(yīng)：i型反應(yīng)是三重激發(fā)態(tài)的光敏劑與底物發(fā)生氫原子或電子轉(zhuǎn)移，形成自由基或自由基離子，這些自由基與組織中的活化氧相互作用產(chǎn)生氧化物，從而殺傷目標(biāo)細(xì)胞；ii型反應(yīng)是三重激發(fā)態(tài)的光敏劑將能量直接轉(zhuǎn)移給氧分子，形成單線態(tài)氧，由于單線態(tài)氧具有強(qiáng)烈的氧化性，能快速使癌細(xì)胞萎縮死亡。pdt治療過程中，光敏劑經(jīng)注射進(jìn)入人體后需要3～96小時(shí)才能在腫瘤組織中達(dá)到最大富集濃度，這個(gè)時(shí)間取決于光敏劑的性質(zhì)。當(dāng)光敏劑在腫瘤組織中富集到一定濃度時(shí)，使用特定波長(zhǎng)的光照射腫瘤部位，從而激活光敏劑產(chǎn)生光動(dòng)力效應(yīng)。
2、pdt具有雙重選擇性，一是基于光敏劑在正常組織和目標(biāo)組織中的濃度差異，二是通過空間限制和聚焦使光直接照射目標(biāo)組織。此外，pdt具有組織選擇性好，可特異性作用于靶組織；作用表淺，有效作用深度基本在0.01μm以下；對(duì)微血管組織的損傷作用強(qiáng)，特別適用于微血管疾病的治療；全身副反應(yīng)少，可多次重復(fù)使用；可與其他療法如手術(shù)、化療、放療等靈活配合使用。
3、光敏劑的發(fā)展已經(jīng)歷了多個(gè)階段。第一代光敏劑以血卟啉衍生物(hpd)為代表，但存在組分復(fù)雜、結(jié)構(gòu)不明確、作用光譜不理想、組織穿透能力差、排泄緩慢、易發(fā)生光毒反應(yīng)等缺點(diǎn)。第二代光敏劑在結(jié)構(gòu)明確性、組分單一性、吸收波長(zhǎng)等方面都有所改進(jìn)，包括卟啉類、苯并卟啉類等多種類型，在
4、cn102370980a公開了光動(dòng)力治療的納米氧化石墨烯載體的制備方法，該方法將納米氧化石墨烯表面經(jīng)親水性聚合物修飾后，再通過π-π堆積和疏水-疏水相互作用，負(fù)載含有大π共軛結(jié)構(gòu)的疏水性光敏劑，即得到可用于光動(dòng)力治療的產(chǎn)品。
5、然而，現(xiàn)有光敏劑仍存在以下問題：光敏劑分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，合成工藝繁瑣；光敏劑的水溶性差，生物相容性不理想；光敏劑在體內(nèi)的靶向性不足，難以在腫瘤組織中特異性富集；光敏劑的光動(dòng)力活性和穩(wěn)定性有待提高。
6、因此，開發(fā)一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、制備工藝簡(jiǎn)便、具有良好水溶性和生物相容性的新型光敏劑載體系統(tǒng)具有重要意義。通過將光敏劑分子與特定載體材料結(jié)合，不僅可以提高光敏劑的水溶性和生物相容性，還能增強(qiáng)其在腫瘤組織中的靶向性和光動(dòng)力活性，從而提高pdt的治療效果。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本專利技術(shù)的目的在于提供一種光敏劑載體及其制備方法和應(yīng)用，制備得到的光敏劑載體具有良好的水溶性，可通過π-π共軛作用與疏水性光敏劑結(jié)合，顯著改善其水溶性，載體通過ph敏感的硼酸酯鍵連接，可在腫瘤微酸性環(huán)境中特異性釋放，同時(shí)硼酸基團(tuán)可與過表達(dá)唾液酸的腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合，提高了藥物遞送的靶向性和安全性。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
3、一種光敏劑載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
4、(1)將4-羧基苯硼酸、edc、nhs加入到無水甲醇中，攪拌混合，獲得4-羧基苯硼酸活化液，滴加入聚乙烯亞胺的甲醇溶液中，攪拌反應(yīng)，將產(chǎn)物沉淀、洗滌、透析、凍干，得到中間體；
5、羧基活化偶聯(lián)：4-羧基苯硼酸(psa)在edc活化下首先生成o-酰基異脲中間體，nhs隨即進(jìn)攻形成活性酯結(jié)構(gòu)，提高了羧基反應(yīng)活性；該活性酯中間體與聚乙烯亞胺(pei)分子上的伯/仲氨基發(fā)生親核取代反應(yīng)，通過形成穩(wěn)定的酰胺鍵將苯硼酸基團(tuán)連接到pei骨架上，得到pei-psa中間體。
6、優(yōu)選的，步驟(1)中，攪拌混合條件為黑暗、室溫下攪拌混合30～60min；攪拌反應(yīng)條件為室溫下攪拌反應(yīng)12～24h。
7、優(yōu)選的，步驟(1)中，4-羧基苯硼酸、edc、nhs、無水甲醇的用量比為150～200mg：230～280mg：140～170mg：8～15ml；聚乙烯亞胺、聚乙烯亞胺的甲醇溶液的比為180～220mg：5～10ml；4-羧基苯硼酸、聚乙烯亞胺的用量比為150～200mg：180～220mg。
8、優(yōu)選的，步驟(1)中，所述聚乙烯亞胺的分子量mw＝1500～2000。
9、選用分子量為1500～2000的pei作為骨架，這一分子量范圍既保證了載體良好的水溶性和生物相容性，又避免了過高分子量引起的細(xì)胞毒性，同時(shí)提供了適量的氨基用于修飾。
10、步驟(1)中，將產(chǎn)物滴加入冰乙醚中進(jìn)行沉淀，離心分離，用冰乙醚洗滌三次，將沉淀溶解于超純水中，然后轉(zhuǎn)移至透析袋(mwco＝1000da)中透析48～72h，每12h更換透析液，透析結(jié)束后將溶液冷凍干燥48～72h，得到白色粘稠狀中間體，密封、避光、4℃保存。
11、(2)將中間體溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入分子篩，攪拌下滴加入1,2,4-三羥基蒽醌的甲醇溶液，避光攪拌反應(yīng)，將產(chǎn)物抽濾、透析、冷凍干燥，得到所述光敏劑載體。
12、硼酸酯化：pei-psa中間體在ph?8.0～8.5的磷酸鹽緩沖液中，其苯硼酸基團(tuán)轉(zhuǎn)化為四面體構(gòu)型的硼酸鹽，與1,2,4-三羥基蒽醌(紅紫素)分子中的1,2-鄰位二醇發(fā)生可逆配位反應(yīng)，脫水形成環(huán)狀硼酸酯結(jié)構(gòu)，分子篩的存在促進(jìn)脫水平衡向產(chǎn)物方向移動(dòng)，得到具有ph響應(yīng)性的光敏劑載體。
13、優(yōu)選的，步驟(2)中，磷酸鹽緩沖液ph為8.0～8.5，分子篩為
14、
15、優(yōu)選的，步驟(2)中，中間體、磷酸鹽緩沖液、分子篩的用量比為100～150mg：15～20ml：1～2g；中間體與1,2,4-三羥基蒽醌的用量比為100～150mg：80～100mg；1,2,4-三羥基蒽醌與1,2,4-三羥基蒽醌的甲醇溶液的比為80～100mg：5ml。
16、優(yōu)選的，步驟(2)中，避光攪拌反應(yīng)條件為避光20～30℃、300～500r/min下攪拌反應(yīng)12～20h，反應(yīng)過程中每4h檢查一次ph，使溶液ph維持為8.0～8.5。
17、步驟(2)中，將產(chǎn)物抽濾除去分子篩，將濾液轉(zhuǎn)移至透析袋(mwco＝2000da)中，先后用ph為8.0的磷酸鹽緩沖液透析24h、超純水透析48h，每12h更換透析液，將溶液冷凍干燥48～72h，得到所述光敏劑載體，密封、避光、-20℃保存。
18、本專利技術(shù)還要求保護(hù)一種利用所述制備方法制備得到的光敏劑載體。
19、本專利技術(shù)還要求保護(hù)一種所述的光敏劑載體在制備光動(dòng)力療法藥物中的應(yīng)用。
20、優(yōu)選的，所述光敏劑為含有大π共軛結(jié)構(gòu)的疏水性光敏劑，包括卟啉類、酞菁類、葉綠素衍生物。
21、優(yōu)選的，所述光敏劑為紅紫素酰亞本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種光敏劑載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，攪拌混合條件為黑暗、室溫下攪拌混合30～60min；攪拌反應(yīng)條件為室溫下攪拌反應(yīng)12～24h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，4-羧基苯硼酸、EDC、NHS、無水甲醇的用量比為150～200mg：230～280mg：140～170mg：8～15mL；聚乙烯亞胺、聚乙烯亞胺的甲醇溶液的比為180～220mg：5～10mL；4-羧基苯硼酸、聚乙烯亞胺的用量比為150～200mg：180～220mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述聚乙烯亞胺的分子量MW＝1500～2000。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，磷酸鹽緩沖液pH為8.0～8.5，分子篩為
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，中間體、磷酸鹽緩沖液、分子篩的用量比為100～150
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，避光攪拌反應(yīng)條件為避光20～30℃、300～500r/min下攪拌反應(yīng)12～20h，反應(yīng)過程中每4h檢查一次pH，使溶液pH維持為8.0～8.5。
8.一種利用權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的光敏劑載體。
9.一種如權(quán)利要求8所述的光敏劑載體在制備光動(dòng)力療法藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述光敏劑為含有大π共軛結(jié)構(gòu)的疏水性光敏劑，包括卟啉類、酞菁類、葉綠素衍生物。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種光敏劑載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，攪拌混合條件為黑暗、室溫下攪拌混合30～60min；攪拌反應(yīng)條件為室溫下攪拌反應(yīng)12～24h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，4-羧基苯硼酸、edc、nhs、無水甲醇的用量比為150～200mg：230～280mg：140～170mg：8～15ml；聚乙烯亞胺、聚乙烯亞胺的甲醇溶液的比為180～220mg：5～10ml；4-羧基苯硼酸、聚乙烯亞胺的用量比為150～200mg：180～220mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述聚乙烯亞胺的分子量mw＝1500～2000。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光敏劑載體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，磷酸鹽緩沖液ph為8.0～8.5，分子篩為
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：崔丙存，彭旸，馮偉華，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：湖北理工學(xué)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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