【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分子育種，尤其是涉及柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性及柑橘抗性育種中的應用。
技術介紹
1、近年來，我國柑橘產業發展迅猛，逐漸成為南方山區的主要經濟支柱，在鄉村振興及生態保護中發揮重要作用。然而，柑橘產業的發展卻飽受柑橘潰瘍病等病害的制約。柑橘潰瘍病是由地毯草黃單胞桿菌柑橘亞種(xanthomonascitrisubsp.citri，xcc)引起的細菌性病害，危害當前大多數主栽柑橘品種，在我國主要柑橘產區均有發生，且發病面積有持續擴大的趨勢。因此，加強對柑橘潰瘍病防控對柑橘的產業發展具有重要意義。
2、盡管世界各柑橘產區政府、生產者和研究者都高度重視柑橘潰瘍病防控研究，但因該病傳播途徑廣、傳播速度快、防控難度大，迄今無法根治。傳統防控手段(病樹焚燒和農藥使用等)需要投入大量人力和物力，且會對環境造成巨大危害。因此，柑橘潰瘍病的防治更多寄希望于培育抗病新種質。在抗病育種方面一代代柑橘人進行了長期雜交育種，但由于雜交育種周期長導致育種效率很低。
3、分子育種可定向、高效培育抗病新種質，目前已得到快速發展和廣泛應用。近年來，通過生物技術手段已獲得一些抗潰瘍病的柑橘資源，例如轉柞蠶抗菌肽d基因的錦橙、新會橙、臍橙株系；過表達csbzip40的晚錦橙株系；基因定點編輯柑橘潰瘍病感病基因cslob1啟動子獲得的對柑橘潰瘍病抗性提高的植株等。但優質候選基因仍然匱乏，且功能和作用機制研究不深，致使多基因協同對抗柑橘潰瘍病還難以實現，制約了柑橘抗潰瘍病分子育種的發展。因此，亟待有針對性地挖掘更多與柑橘
4、研究表明，gdp-l-半乳糖磷酸化酶(gdp-l-galactose?phosphorylase，ggp)參與抗壞血酸(ascorbic?acid,asa)生物合成，是l-半乳糖途徑中催化gdp-l-半乳糖和l-半乳糖-1-磷酸之間的轉化的關鍵節點。馬鈴薯中的stggp可通過正向調控asa含量來增強對暗脅迫的抗性，辣椒中的caggp則對鹽脅迫有正向調控作用，柑橘中的ggp基因家族參與光、asa生物合成、植物生長發育等響應。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性及柑橘抗性育種中的應用，以提供一個與柑橘潰瘍病抗性緊密相關的基因，為柑橘潰瘍病抗性育種提供新的候選基因，為獲得高抗柑橘潰瘍病品種、降低農藥和焚燒等傳統防治方法造成的環境污染貢獻力量。
2、為實現上述目的，本專利技術提供柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，降低csggp2基因的表達量，柑橘潰瘍病抗性增強；csggp2基因的cds序列如seq?id?no.1所示。
3、優選的，csggp2基因的表達量降低程度越大，柑橘潰瘍病抗性越強。
4、優選的，采用rnai干擾的方法降低csggp2基因的表達量。
5、優選的，擴增柑橘rnai干擾片段的引物為csggp2-rnai-f和csggp2-rnai-r，csggp2-rnai-f的序列如seq?id?no.3所示，csggp2-rnai-r的序列如seq?id?no.4所示。
6、優選的，擴增柑橘rnai干擾片段的pcr擴增程序為：98℃，5min；98℃，30s，56℃，30s，72℃，1.5min，35個循環；72℃延伸10min，體系采用高保真酶所附說明書配制。
7、如上所述柑橘csggp2基因的rnai載體、工程菌在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，工程菌為包含柑橘csggp2基因rnai載體的用于擴繁或侵染的菌株。
8、如上所述柑橘csggp2基因在抗柑橘潰瘍病品種選育中的應用。
9、如上所述柑橘csggp2基因的rnai載體、工程菌在抗柑橘潰瘍病品種選育中的應用。
10、因此，本專利技術提供的柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性及柑橘抗性育種中的應用，其具體技術效果如下：
11、(1)本專利技術首次公開顯著降低柑橘csggp2基因的表達水平，可以顯著提高柑橘對潰瘍病的抗性，且csggp2基因的表達量降低程度越大，柑橘潰瘍病抗性越強，當表達量降為野生型柑橘的2％時，病斑面積降為野生型的53％；
12、(2)柑橘csggp2基因轉錄水平的降低不會對植株的表型和發育產生明顯影響；
13、(3)本專利技術提供的柑橘csggp2基因可以作為研究橘潰瘍病抗性的候選基因，可以獨立用于抗柑橘潰瘍病分子育種，也可以與其他的抗病或感病基因一起進行柑橘抗潰瘍病分子育種，具有重要的應用價值。
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1.柑橘CsGGP2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：降低CsGGP2基因的表達量，柑橘潰瘍病抗性增強；CsGGP2基因的CDS序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的柑橘CsGGP2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：CsGGP2基因的表達量降低程度越大，柑橘潰瘍病抗性越強。
3.根據權利要求1所述的柑橘CsGGP2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：采用RNAi干擾的方法降低CsGGP2基因的表達量。
4.根據權利要求3所述的柑橘CsGGP2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：擴增柑橘RNAi干擾片段的引物為CsGGP2-RNAi-F和CsGGP2-RNAi-R，CsGGP2-RNAi-F的序列如SEQ?ID?NO.3所示，CsGGP2-RNAi-R的序列如SEQ?ID?NO.4所示。
5.根據權利要求3所述的柑橘CsGGP2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于，擴增柑橘RNAi干擾片段的PCR擴增程序為：98℃，5min；98℃，30s，56℃，30s，72
6.如權利要求1中所述柑橘CsGGP2基因的RNAi載體、工程菌在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：工程菌為包含柑橘CsGGP2基因RNAi載體的用于擴繁或侵染的菌株。
7.如權利要求1中所述柑橘CsGGP2基因在抗柑橘潰瘍病品種選育中的應用。
8.如權利要求6中所述柑橘CsGGP2基因的RNAi載體、工程菌在抗柑橘潰瘍病品種選育中的應用。
...【技術特征摘要】
1.柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：降低csggp2基因的表達量，柑橘潰瘍病抗性增強；csggp2基因的cds序列如seq?id?no.1所示。
2.根據權利要求1所述的柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：csggp2基因的表達量降低程度越大，柑橘潰瘍病抗性越強。
3.根據權利要求1所述的柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：采用rnai干擾的方法降低csggp2基因的表達量。
4.根據權利要求3所述的柑橘csggp2基因在提高柑橘潰瘍病抗性中的應用，其特征在于：擴增柑橘rnai干擾片段的引物為csggp2-rnai-f和csggp2-rnai-r，csggp2-rnai-f的序列如seq?id?no.3所示...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李強，張晨希，張淼，劉一琪，何厚整，宋慶瑋，林朵，鐘欣，李曼，楊鈺芹，趙峻杰，陳善春，何永睿，
申請(專利權)人：西部重慶科學城種質創制大科學中心，
類型：發明
國別省市：
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