【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域，涉及靶向gprc5d的car-t細胞及其制備方法和應用。
技術介紹
1、gprc5d是一種c型7通道跨膜受體蛋白，屬于g蛋白偶聯受體家族，為gprc5亞家族的成員之一。作為孤兒受體，gprc5d在正常人體組織中表達較低，通常僅在毛囊細胞中表達，而在骨髓瘤、淋巴瘤、白血病等惡性腫瘤細胞中特異性地表達。目前大多數gprc5d藥物還處于臨床試驗階段或者研發階段，因此，有必要開發具有更高活性和治療效果的gprc5d細胞藥物，以進行相關疾病的治療研究和應用。
2、嵌合抗原受體t細胞（chimeric?antigen?receptor?t?cell，car-t）療法是目前治療難治復發血液系統腫瘤的重要方法。但此療法缺乏腫瘤特異性的靶抗原，易產生脫靶效應，會導致體液免疫功能缺失，以及嚴重的細胞因子釋放綜合征(crs)等，因此靶點的選擇是car-t細胞治療重要的研究內容。
技術實現思路
1、鑒于此，為了彌補現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一種靶向gprc5d的car-t細胞及其制備方法和應用，所述靶向gprc5d的car-t細胞能夠特異性識別和殺傷多發性骨髓瘤，有希望為今后靶向gprc5d的其他免疫效應細胞療法的設計提供依據，有希望為與gprc5d表達相關的疾病或病癥的治療提供一種新的方法。
2、本專利技術的上述目的通過以下技術方案得以實現：
3、本專利技術第一方面提供了一種特異性靶向gprc5d抗原的抗體，所述抗體包括：p>
4、1）氨基酸序列如seq?id?no:1-2所示的重鏈可變區的cdr1；或
5、2）氨基酸序列如seq?id?no:3-4所示的重鏈可變區的cdr2；或
6、3）氨基酸序列如seq?id?no:5-6所示的重鏈可變區的cdr3；或
7、4）氨基酸序列如seq?id?no:7-8所示的輕鏈可變區的cdr1；或
8、5）氨基酸序列如seq?id?no:9所示的輕鏈可變區的cdr2；或
9、6）氨基酸序列如seq?id?no:10-11所示的輕鏈可變區的cdr3。
10、進一步，所述抗體的重鏈可變區氨基酸序列包含seq?id?no:1、seq?id?no:3、seqid?no:5的組合或seq?id?no:2、seq?id?no:4、seq?id?no:6的組合。
11、進一步，所述抗體的重鏈可變區氨基酸序列如seq?id?no:12-13、seq?id?no:16所示。
12、進一步，所述抗體的輕鏈可變區氨基酸序列包含seq?id?no:7、seq?id?no:9、seqid?no:10的組合或seq?id?no:8、seq?id?no:9、seq?id?no:11的組合。
13、進一步，所述抗體的輕鏈可變區氨基酸序列如seq?id?no:14-15、seq?id?no:17所示。
14、在本專利技術中，術語“抗原結合片段”通常是指一個與抗原結合或與抗原結合（即特異性結合）的完整抗體（即與它們所衍生的完整抗體）競爭的抗體的多肽片段，在某些實施方案中，所述抗原結合片段包括但不限于vhh、fab、fab’、f（ab’）2和fv片段。
15、進一步，所述抗原結合片段為fv片段。
16、進一步，所述fv片段為scfv。
17、在本專利技術中，術語“特異性”、“靶向”、“結合”指結合作用對抗原是選擇性的，且可以與非期望的或非特異的相互作用區別。抗原結合位點與特定抗原結合的能力可以通過酶聯免疫吸附測定法（elisa）或本領域已知的常規結合測定法測定。
18、在某些實施方案中，本專利技術所述的抗體可變區的cdr1-3的序列可基于上述的氨基酸序列根據kabat、imgt、chothia、abm或contact編號系統定義獲得，根據kabat、imgt、chothia、abm或contact編號系統定義的cdr序列同樣在本專利技術的保護范圍內。
19、在本專利技術中，術語“抗體”在本專利技術中以最廣義使用，而且明確覆蓋抗原結合片段、單克隆抗體、多克隆抗體、人源性抗體、嵌合抗體和自至少兩種完整抗體形成的多特異性抗體（例如雙價抗體），只要它們展現期望的生物學活性。
20、在本專利技術中，經修飾得到的與本專利技術第一方面所述的抗體的氨基酸序列具有至少約80％、約81％、約82％、約83％、約84％、約85％、約86％、約87％、約88％、約89％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的抗體序列也屬于本專利技術的保護范疇。術語“修飾”是指對氨基酸序列任何形式的修飾，例如氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加。術語“取代”是指用不同的氨基酸替換一個或多個原本氨基酸序列中的氨基酸。術語“缺失”是指在原本氨基酸序列中減少一個或多個氨基酸。術語“插入”或“添加”是指在氨基酸序列中的改變導致與原本氨基酸序列相比，一個或多個氨基酸的添加。術語“同一性”又稱“同源性”，是指序列與本專利技術提供的序列至少約80％、約81％、約82％、約83％、約84％、約85％、約86％、約87％、約88％、約89％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％相同的氨基酸序列。為了確定序列同一性，可通過本領域技術人員了解的各種方式進行序列比對，例如，使用blast、blast-2、align、needle、megalign（dnastar）、snapgene或dnaman軟件等。本領域技術人員能夠確定用于比對的適當參數，包括在所比較的全長序列中實現最優比對所需要的任何算法。
21、在某些實施方案中，本專利技術的抗體通過人工合成方式獲得。人工合成抗體的方法在本領域是已知的，例如通過氨基酸直接合成法得到本專利技術的抗體。在某些實施方案中，本專利技術的抗體通過基因工程表達獲得?；蚬こ瘫磉_系統包括原核細胞表達系統、真核細胞表達系統和無細胞系表達系統。其中原核細胞表達系統的包括大腸桿菌表達系統。真核細胞表達系統包括酶母表達系統、昆蟲細胞表達系統和哺乳動物細胞表達系統。
22、本專利技術第二方面提供了一種靶向gprc5d的嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體包含由本專利技術第一方面所述的抗體組成的胞外抗原結合結構域。
23、進一步，所述靶向gprc5d抗原的抗體由重鏈可變區和輕鏈可變區組成，在一個實施方案中所述重鏈可變區和輕鏈可變區可直接相連，在一個實施方案中所述重鏈可變區和輕鏈可變區可通過至少一個linker連接，其排列方式可為vh—linker—vl或vl—linker—vh。
24、進一步，所述linker包括但不限于甘氨酸聚合物(g)n、甘氨酸-絲氨酸聚合物、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-絲氨酸聚合物、lrqkd(gggs)2erp、dgggs、lrqrdgerp、tgekp、kesgsvsseqlaqfrsl本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種特異性靶向GPRC5D抗原的抗體，其特征在于，所述抗體包括：
2.根據權利要求1所述的抗體，其特征在于，所述抗體包括抗原結合片段、單克隆抗體、多克隆抗體、人源化抗體、嵌合抗體或多價抗體；
3.一種靶向GPRC5D的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體包含由權利要求1-2任一項所述的抗體組成的胞外抗原結合結構域；
4.一種抗體衍生物，其特征在于，所述抗體衍生物包括權利要求1-2任一項所述的抗體及與其偶聯的可檢測標記物。
5.根據權利要求4所述的抗體衍生物，其特征在于，所述可檢測標記物包括放射性同位素、金屬納米材料、熒光素、生物素、親和素、生物素/抗生物素蛋白復合體、生物素/親和素蛋白復合體、發色團、電子致密物質和酶中的至少一種。
6.一種生物材料，其包括：
7.一種組合物，所述組合物包括權利要求1-2任一項所述的抗體、權利要求3所述的嵌合抗原受體、權利要求4-5任一項所述的抗體衍生物、權利要求6所述的生物材料；
8.一種試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1-2任一項所述的抗體、權利要求3所
9.如下任一項方法：
10.如下任一項應用：
...【技術特征摘要】
1.一種特異性靶向gprc5d抗原的抗體，其特征在于，所述抗體包括：
2.根據權利要求1所述的抗體，其特征在于，所述抗體包括抗原結合片段、單克隆抗體、多克隆抗體、人源化抗體、嵌合抗體或多價抗體；
3.一種靶向gprc5d的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體包含由權利要求1-2任一項所述的抗體組成的胞外抗原結合結構域；
4.一種抗體衍生物，其特征在于，所述抗體衍生物包括權利要求1-2任一項所述的抗體及與其偶聯的可檢測標記物。
5.根據權利要求4所述的抗體衍生物，其特征在于，所述可檢測標記物包括放射性同位素、金屬納米...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉丹，李姝琦，施明，趙璇，李思瑾，侯睿，王旭，管章春，鄭駿年，
申請(專利權)人：徐州醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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