本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，通過制備一種pH敏感型復(fù)合磁性納米凝膠以磁性分離技術(shù)提取雞蛋卵黃高磷蛋白，其中pH敏感型復(fù)合磁性納米凝膠是以磁性多孔凝膠為內(nèi)核，聚多巴胺與辣根素對其表面修飾后，形成巰基化殼層，并在巰基化殼層上連接上鐵離子即得。本發(fā)明專利技術(shù)中結(jié)合在磁性多孔凝膠表面的聚多巴胺可以與帶有巰基的辣根素快速結(jié)合，巰基化殼層有利于鐵離子的結(jié)合，因此在外加磁場的作用下能夠快速分離出雞蛋卵黃高磷蛋白，最后撤去外加磁場并置于堿性環(huán)境中，能夠安全、高效地分離出雞蛋卵黃高磷蛋白。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于及食品加工和提取，具體涉及一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法。
技術(shù)介紹
1、雞蛋黃中含有許多生物活性成分，如卵黃球蛋白、脂蛋白、蛋黃油、卵磷脂、唾液酸等，還含有一種已知自然界中磷酸化程度最高的蛋白質(zhì)，即卵黃高磷蛋白，它是由脂蛋白與卵黃磷脂蛋白形成的復(fù)合體，含氮量11.9％，含磷量9.7％，占蛋黃總磷量的80％，碳水化合物的含量為6.5％，卵黃高磷蛋白約占蛋黃干物質(zhì)的4％，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳可知，其主要由兩種蛋白構(gòu)成：α-卵黃高磷蛋白和β-卵黃高磷蛋白；卵黃高磷蛋白是由216個氨基酸殘基組成的，其中124個是絲氨酸殘基，占其總氨基酸含量的56％，90％以上的絲氨酸殘基被磷酸化；卵黃高磷蛋白的制備方法大部分僅限于實驗室規(guī)模，幾乎都是以鮮雞蛋為原料耗時太長，脫脂時使用的溶劑和其他輔料為非食品級，且高磷蛋白的回收率低，所以，當(dāng)前的制備工藝僅能滿足實驗室研究的小批量要求，無法滿足商業(yè)化應(yīng)用的產(chǎn)能要求。
2、現(xiàn)有技術(shù)中，雞蛋卵黃高磷蛋白的常規(guī)提取步驟包括加水去除水溶性蛋白、加有機溶劑去除脂類物質(zhì)、加nacl溶液提取卵黃高磷蛋白、加熱純化，提取工序繁瑣且高磷蛋白得率較低，提取方法包括(nh4)2so4沉淀法、nacl溶液浸提法等，提取過程中不免使用大量的乙酸乙酯或非食品添加劑輔料硫酸銨，導(dǎo)致所制備的卵黃高磷蛋白存在使用局限性。目前利用磁性微球進行分離提取磷酸肽已有報道，但是磁性微球?qū)﹄u蛋卵黃高磷蛋白的分離鮮有報道，因此尋求一種安全高效的分離方法是非常重要的。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、要解決的技術(shù)問題：針對上述的技術(shù)問題，本專利技術(shù)的目的是提供一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其中以磁性多孔凝膠為內(nèi)核，聚多巴胺與辣根素對其表面修飾后，形成巰基化殼層，并在巰基化殼層上連接鐵離子，制得一種ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠。結(jié)合在磁性多孔凝膠表面的聚多巴胺可以與帶有巰基的辣根素快速結(jié)合，巰基化殼層有利于鐵離子的結(jié)合，雞蛋卵黃高磷蛋白對金屬陽離子有很強的親和力，因此有利于在外加磁場的作用下磁性分離出雞蛋卵黃高磷蛋白，最后撤去外加磁場并置于堿性環(huán)境中，能夠更加高效地分離出雞蛋卵黃高磷蛋白。
2、技術(shù)方案：一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，具體包括以下步驟：
3、步驟1.取雞蛋蛋黃液，加入2倍質(zhì)量的蒸餾水，4℃中磁力攪拌1h后，15000×g冷凍離心15-20min，去除上清液，收集沉淀得到蛋黃顆粒；
4、步驟2.將蛋黃顆粒懸浮于100g/lnacl溶液，質(zhì)量體積比為1:10，4℃中攪拌過夜后，加熱至85℃并保持20min，隨后用雙蒸水透析24h，15000×g冷凍離心15min，收集上清液，調(diào)節(jié)ph至8.0，4℃攪拌1h并再次離心收集上層清液凍干后，即得雞蛋卵黃前處理樣品；
5、步驟3.向雞蛋卵黃前處理樣品中加入醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，配成ph4-4.5、10mg/ml的樣品溶液；
6、步驟4.取樣品溶液并加入ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠，渦旋振蕩混合，30℃的恒溫?fù)u床中吸附80-100min，得到提取液，外加磁場后分離出雞蛋卵黃高磷蛋白與ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠的復(fù)合物，將復(fù)合物置于堿性溶液中，并撤去外加磁場，使得ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠分離開來，即得雞蛋卵黃高磷蛋白。
7、進一步的，所述步驟4中ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠與樣品溶液的質(zhì)量體積比為(4-5):1。進一步的，所述ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠的制備步驟為：
8、s1.將可得然膠溶于0.1mol/l氫氧化鈉溶液中，得到濃度為2-3％的可得然膠溶液，再加入fe3o4粉末，攪拌浸潤，靜置1-5h，過濾，洗滌、冷凍干燥，得到磁性多孔凝膠；
9、s2.將磁性多孔凝膠與濃度為1mg/ml的聚多巴胺溶液混合，超聲20-30min，室溫下攪拌反應(yīng)20-24h，過濾、洗滌、干燥，即得聚多巴胺包覆的磁性多孔凝膠；
10、s3.將辣根素溶于乙醇溶液中，制得辣根素溶液，加入聚多巴胺包覆的磁性多孔凝膠后，攪拌浸潤，過濾、洗滌、干燥，制得磁性多孔凝膠-聚多巴胺-辣根素納米凝膠；
11、s4.將磁性多孔凝膠-聚多巴胺-辣根素納米凝膠分散于ph為5的5mg/mlfecl3溶液中，攪拌浸潤，過濾、洗滌、干燥，即得ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠。
12、進一步的，所述步驟s1中fe3o4粉末與可得然膠溶液的質(zhì)量體積比為1:(2-20)。
13、進一步的，所述步驟s2中磁性多孔凝膠與聚多巴胺溶液的質(zhì)量體積比為1:(1-2)。
14、進一步的，所述步驟s3中辣根素溶液的濃度為8-10％；所述聚多巴胺包覆的磁性多孔凝膠與辣根素溶液的質(zhì)量體積比為1:(3-5)。
15、有益效果：
16、1.本專利技術(shù)雞蛋卵黃高磷蛋白中含有大量磷酸化的絲氨酸，使分子攜帶負(fù)電荷，對金屬陽離子有很強的親和力，易與ca2+、fe3+、mg2+、mn2+等離子相結(jié)合，且結(jié)合后非常穩(wěn)定，因此復(fù)合磁性納米凝膠表面的fe3+與雞蛋卵黃高磷蛋白的強結(jié)合力，可以安全高效的從蛋黃中磁性分離出卵黃高磷蛋白；
17、2.本專利技術(shù)中辣根素中的巰基具有與金屬離子形成絡(luò)合物的能力，結(jié)合在復(fù)合磁性納米凝膠表面的聚多巴胺可以與帶有巰基的辣根素快速、高效的反應(yīng)，使得fe3+可以更穩(wěn)定的結(jié)合在復(fù)合磁性納米凝膠的表面；另外，辣根素中的鐵元素與復(fù)合磁性納米凝膠表面的fe3+，有利于更大程度的結(jié)合雞蛋卵黃高磷蛋白，提升提取率；
18、3.裸露的磁性納米凝膠容易因相互作用發(fā)生團聚，影響納米凝膠在溶液中的分散性和穩(wěn)定性，從而嚴(yán)重影響磁性納米凝膠的應(yīng)用，而聚多巴胺對復(fù)合磁性納米凝膠進行表面修飾后，改善了復(fù)合磁性納米凝膠在水中的溶解性、穩(wěn)定性和生物相容性，并有利于在外層接上辣根素的-sh基團；
19、4.本專利技術(shù)中以fe3o4和可得然膠制備出磁性多孔凝膠材料，具有高比表面積、豐富的活性基團和良好的磁響應(yīng)性，從而有利于磁性分離提取雞蛋卵黃高磷蛋白，避免大量使用有機溶劑，提取步驟更簡便、安全、高效；
20、5.本專利技術(shù)中復(fù)合磁性納米凝膠在酸性環(huán)境下吸附能力較好，因此在解吸過程中將雞蛋卵黃高磷蛋白與ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠的復(fù)合物置于堿性環(huán)境中，減弱卵黃高磷蛋白與fe3+之間的結(jié)合力，同時撤去外加磁場，從而實現(xiàn)最大程度的解吸，以便于收集雞蛋卵黃高磷蛋白。
本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，所述步驟4中pH敏感型復(fù)合磁性納米凝膠與樣品溶液的質(zhì)量體積比為(4-5):1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，所述pH敏感型復(fù)合磁性納米凝膠的制備步驟為：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，所述步驟S1中Fe3O4粉末與可得然膠溶液的質(zhì)量體積比為1:(2-20)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，所述步驟S2中磁性多孔凝膠與聚多巴胺溶液的質(zhì)量體積比為1:(1-2)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，所述步驟S3中辣根素溶液的濃度為8-10％；所述聚多巴胺包覆的磁性多孔凝膠與辣根素溶液的質(zhì)量體積比為1:(3-5)。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，所述步驟4中ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠與樣品溶液的質(zhì)量體積比為(4-5):1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在于，所述ph敏感型復(fù)合磁性納米凝膠的制備步驟為：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種雞蛋卵黃高磷蛋白的提取方法，其特征在...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：胥偉，郭丹郡，王宏勛，侯溫甫，易陽，
申請(專利權(quán))人：湖北小胡鴨醬鹵食品研究院有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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