【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于食品生物，具體地說，涉及一種西式干腌火腿來源的抗炎肽復合物及其制備方法與應用。
技術介紹
1、炎癥是一種通過保護宿主免受病原體和組織損傷來維持體內平衡，并涉及組織修復、再生和重塑的生物過程，在宿主的免疫防御系統中起關鍵作用。過度的炎癥反應會對機體產生重大影響，甚至導致心腦血管疾病、腫瘤、癌癥、糖尿病、動脈粥樣硬化和哮喘等疾病的發生和惡化。目前抑制或干預炎癥相關信號通路，減少炎性細胞因子（il-6、tnf-α、il-1β）的分泌已經成為預防和治療炎癥的研究主流。常用的抗炎藥物（類固醇、非類固醇抗炎藥和抗生素等）都有一定的副作用，長期服用可降低組織的可修復性、引起胃腸黏膜損傷等。因此研究開發具有治療或輔助治療炎癥的功能且安全無副作用的天然活性物質成為研究者關注的焦點。
2、生物活性肽是生命和食品科學領域的研究熱點之一，通常由2-20個氨基酸殘基組成，根據氨基酸組成、序列及結構的不同可發揮抗高血壓、抗糖尿病、抗氧化、抗菌、抗炎、抗癌等多種生理功能。目前biopep數據庫中列出了5135個生物活性肽。生物活性肽相比傳統化學藥物具有更高的組織親和力和特異性，且副作用小，在預防和治療疾病方面具有廣闊的前景。
3、西式干腌火腿獨特的加工工藝以及漫長的加工過程使其肌肉蛋白質在內源酶和外源微生物的共同作用下降解程度高，成為富含生物活性肽的重要載體，可以成為活性肽的直接來源。目前多種干腌火腿來源的生物活性肽被成功分離純化與鑒定，研究主要集中在血管緊張素轉換酶抑制活性、抗氧化活性、抗菌性等，而目前國內外關于西式干
4、目前抗炎肽的制備方法主要有微生物發酵法、酶解法和化學合成法等。微生物發酵法是利用微生物代謝活動中的蛋白酶在發酵過程中將蛋白質降解為活性肽的過程，其工藝簡單、成本低，但是產物受原料、菌種和工藝的影響，發酵過程不易控制，容易造成產品質量不穩定、產品標準化低的問題。酶解法是通過蛋白酶水解使蛋白質中的肽鍵斷裂，釋放出生物活性肽，是制備活性肽最常用的方法，但由于蛋白酶酶切位點的隨機性和不確定性，導致篩選蛋白酶的工作量繁重且有一定盲目性。化學合成法則是基于已知活性肽氨基酸序列的前提下，從氨基酸c末端到n末端進行縮合反應。幾種方法各有利弊，在實際應用中則需要根據實際情況進行選擇。
5、抗炎肽的分離純化和鑒定也是重要的環節，目前多數研究將傳統分離技術和現代生物技術相結合對目標產物進行針對性的分離，但缺少對西式干腌火腿抗炎活性相關組分的制備、鑒定和驗證，并且制備分離的方法不同，得出的活性產物也有區別。目前biopep-uwm數據庫中具有抗炎活性且有氨基酸序列數據的多肽僅有50條，因此通過開發西式干腌火腿來源的抗炎肽及發現新序列肽對于其高值利用和在抗炎性產品研究領域具有重要意義。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種西式干腌火腿來源的抗炎肽復合物及其制備方法與應用。
2、為了實現本專利技術目的，第一方面，本專利技術提供抗炎肽（抗炎活性肽），所述抗炎活性肽的氨基酸序列如lpfp（seq?id?no:1）、pyppp（seq?id?no:2）和ipppl（seq?id?no:3）任一所示，優選lpfp（seq?id?no:1）。
3、第二方面，本專利技術提供一種抗炎肽復合物，包含如seq?id?no:1-3任一所示序列的肽中的兩條或三條或者以上述三條活性肽為主要成分的復合物。
4、第三方面，本專利技術還提供所述抗炎肽或所述抗炎肽復合物的制備方法，以西式干腌火腿為原料提取抗炎肽或抗炎肽復合物，所述西式干腌火腿的發酵成熟周期為1年及以上。
5、進一步地，所述西式干腌火腿的制備方法包括：將原料豬腿修整成型，去除血水，經過鹽漬（溫度為0~4℃，約20d）、腌制（溫度為3~7℃，相對濕度60~80%，約60d）、熟化（溫度12~18℃，相對濕度60~85%，不少于280d）等加工程序成熟；
6、具體制備方法包括下列步驟：
7、（1）粗肽制備：取成熟的西式干腌火腿瘦肉，去除筋膜組織，切塊絞碎后加入鹽酸溶液均質勻漿，勻漿液靜置離心后取上清液加入無水乙醇沉淀蛋白，接著取上清液用0.45μm濾膜過濾后旋蒸濃縮，冷凍干燥得粗肽粉i。
8、（2）超濾和凝膠過濾層析分離：將粗肽粉i復溶成質量濃度為25mg/ml的粗肽液，超濾截留分子量小于3kda的肽段，冷凍干燥得肽粉ii。將肽粉ii配置成質量濃度為10~50mg/ml的肽液，采用sephadexg-15葡聚糖凝膠柱分離，上樣量為2.0~4.0ml，洗脫液為超聲脫氣后的超純水，流速為1~1.5ml/min，檢測波長為280nm，收集得到兩個主要組分（f1和f2）。
9、（3）鑒定和篩選：選取具有最佳抗炎效果的組分，通過測序結合生物信息學進行分析篩選以及體外細胞實驗驗證，得到抗炎肽復合物及3個新抗炎肽（seq?id?no:1-3）。
10、優選地，步驟（2）中，所述肽粉ii配置的質量濃度為50mg/ml，采用sephadexg-15葡聚糖凝膠柱分離，上樣量為4.0ml，洗脫液流速為1.5ml/min。
11、優選地，步驟（3）中所述抗炎效果判定具體操作為：建立脂多糖誘導的raw264?.7巨噬細胞炎癥模型，當肽孵育組的no釋放量以及炎性細胞因子（il-6或tnf-α或il-1β）的分泌量低于模型組(lps組)的釋放量時，認為該肽具有抗炎潛能；反之則認為該肽不具有抗炎潛能。
12、為實現上述目的及其他相關目的，本專利技術提供一種抗炎肽復合物的篩選方法，包括下列步驟：
13、（1）通過peptideranker工具對肽段進行潛在生物活性評分；
14、（2）通過biopep-uwm數據庫對（1）中評分0.8以上的肽段進行生物活性預測，結合抗炎活性氨基酸及其組成序列特征，篩選含有ipp、py、lpf等抗炎活性氨基酸序列的肽段；
15、（3）通過biopep-uwm數據庫對（2）中肽段序列進行新穎性檢查，得到3個新抗炎肽。
16、借由上述技術方案，本專利技術至少具有下列優點及有益效果：
17、(一)本專利技術以西式干腌火腿為原料，經過直接提取分離純化和結合生物信息學技術篩選獲得天然的小分子抗炎肽復合物。制備成本低，條件溫和，有效的保持了肽的抗炎活性，且制備過程污染少，綠色環保；
18、?(二)本專利技術拓展了西式干腌火腿多肽的應用范圍，既可以促進其高值化利用，又能作為一種潛在功能性因子應用于抗炎性產品當中。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種西式干腌火腿來源的抗炎肽，其特征在于，所述抗炎肽的氨基酸序列如SEQ?IDNO:2-3任一所示。
2.抗炎肽復合物，其特征在于，包含如SEQ?ID?NO:2-3任一所示序列的肽中的一條或兩條或者以上述肽為主要成分的復合物。
3.權利要求1所述抗炎肽或權利要求2所述抗炎肽復合物的制備方法，其特征在于，以西式干腌火腿為原料提取抗炎肽或抗炎肽復合物，所述西式干腌火腿的發酵成熟周期為1年及以上。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述西式干腌火腿的制備方法包括：將原料豬腿修整成型，去除血水，經過鹽漬、腌制、熟化加工程序成熟；
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，包括下列步驟：
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，生物信息學篩選方法包括下列步驟：
【技術特征摘要】
1.一種西式干腌火腿來源的抗炎肽，其特征在于，所述抗炎肽的氨基酸序列如seq?idno:2-3任一所示。
2.抗炎肽復合物，其特征在于，包含如seq?id?no:2-3任一所示序列的肽中的一條或兩條或者以上述肽為主要成分的復合物。
3.權利要求1所述抗炎肽或權利要求2所述抗炎肽復合物的制備方法，其特征在于，以西式干腌火腿為原料提取抗炎肽或抗...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王守偉，席麗琴，張欣，李家鵬，楊君娜，房佳佳，趙燕，
申請(專利權)人：中國肉類食品綜合研究中心，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。