【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及脂多糖制劑，具體地說，涉及一種胎盤脂多糖制劑及其制備方法。
技術介紹
1、胎盤組織是一種富含多種生物活性物質的組織，包括蛋白質、多肽、脂質、糖類、酶以及細胞因子等。這些成分在免疫調節、抗炎、抗氧化、促進傷口愈合等方面具有潛在的應用價值，特別是在傳統醫學中，胎盤組織被用于治療各種疾病已有悠久的歷史；脂多糖（lps），也稱為內毒素，是革蘭氏陰性細菌外膜的重要組成部分，盡管lps主要來源于細菌，但某些哺乳動物來源的類似結構（如胎盤組織中的脂多糖樣分子）也被發現，并顯示出獨特的生物學特性。研究表明，胎盤組織脂多糖參與母體-胎兒免疫耐受機制，并且在炎癥反應和免疫調節方面具有特殊作用。
2、目前市場上的胎盤組織現有的提取方法往往存在以下問題：提取過程難以有效去除雜質，導致目標成分濃度不高；由于處理過程中引入的熱應力或其他不利條件，影響了脂多糖的結構完整性和生物活性，鑒于此，我們提出一種胎盤脂多糖制劑及其制備方法。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種胎盤脂多糖制劑及其制備方法，以解決上述
技術介紹
中提出的胎盤組織脂多糖提取過程難以有效去除雜質，導致目標成分濃度不高；由于處理過程中引入的熱應力或其他不利條件，影響了脂多糖的結構完整性和生物活性的問題。
2、為實現上述目的，本專利技術提供一種胎盤脂多糖制劑，包括以下原料：胎盤組織90-95重量份、碳酸鈉1-5重量份、胰蛋白酶0.1-1重量份、亮抑酶肽0.1-0.5重量份、氯仿1-2重量份、硫酸軟骨素0.
3、另一方面，本專利技術提供了一種胎盤脂多糖制劑的制備方法，用于制備上述的胎盤脂多糖制劑，包括如下步驟：
4、s1.1、分別稱取以下重量份的原料：胎盤組織90-95重量份、碳酸鈉1-5重量份、胰蛋白酶0.1-1重量份、亮抑酶肽0.1-0.5重量份、氯仿1-2重量份、硫酸軟骨素0.1-1重量份、三氯醋酸5-10重量份、甲醇70-80重量份、抗壞血酸0.1-1重量份和氯化鈉0.5-1重量份；
5、s1.2、將胎盤組織放在20℃的化凍間解凍，化凍時間不超過24h；將胎盤組織去除血液后，揀除血塊與筋膜，并用飲用水漂洗至近肉色，瀝干備用；
6、s1.3、將瀝干后的胎盤組織通過高速分散器以5000-8000rpm的速度絞碎3-5min后并稱重，對擠干后的胎盤組織進行堿化處理；
7、s1.4、按照每1kg胎盤組織加入10000活力單位胰蛋白酶進行胰酶消化水解；待ph值保持在9.0±0.2，加入體積比為1%的氯仿繼續消化24-28h，當氨基氮占總氮的30%時，加入亮抑酶肽溶液，得到消化液；
8、胰蛋白酶在消化過程中具有非特異性的酶解作用，當消化達到一定階段（如氨基氮/總氮達30%）后，加入亮抑酶肽溶液可以有效抑制胰蛋白酶的過度活性；亮抑酶肽是一種特異性的蛋白酶抑制劑，能夠結合胰蛋白酶的活性位點，阻止其繼續水解其他蛋白質或肽段；這種抑制作用有助于精準控制消化反應的程度，從而提高目標成分（如脂多糖）的提取效率，并減少非必要成分的水解，保持提取物成分的穩定性。
9、在胎盤組織中，除了脂多糖外，還存在一些對免疫調節有輔助作用的蛋白質和肽類等成分；如果胰蛋白酶持續作用，會破壞這些成分的完整性；因此，加入亮抑酶肽可以保護這些潛在的有效成分不被過度酶解，從而確保最終胎盤脂多糖制劑的質量和功效；此外，一些具有免疫調節活性的小分子肽會在過度的胰蛋白酶消化中被破壞，亮抑酶肽通過抑制胰蛋白酶，能夠保存這些小分子肽，進而增強制劑的綜合免疫調節能力；
10、s1.5、將消化液以25r/min的速度攪拌，在60℃下加熱20h以上進行巴氏消毒；將經巴氏消毒后的消化液進行沉淀處理，得到上清液；
11、s1.6、將甲醇加入到上清液中進行沉淀處理；收集沉淀后進行凍干處理，無菌環境下收集，得到胎盤脂多糖原料；
12、s1.7、將胎盤脂多糖原料用注射用水稀釋至濃度為18-25μg/ml，加入抗壞血酸和氯化鈉配成溶液，在b級環境局部a級下進行除菌過濾，分裝于容器中，密封，得到胎盤脂多糖制劑。
13、作為優選，所述s1.3中，對胎盤組織進行堿化處理是按照胎盤組織的重量1：1加入濃度為1%的碳酸鈉溶液，使溶液ph值達到10，混勻后放置12-24h。
14、作為優選，所述s1.4中，胰蛋白酶消化水解的溫度為37±2℃，在2h內，每隔15-30min用濃度為2mol/l氫氧化鈉溶液調整ph值，使ph值始終保持在9.0±0.2。
15、作為優選，所述s1.4中，亮抑酶肽溶液的濃度為1-10mm。
16、作為優選，所述s1.5中，進行沉淀處理是將濃度為0.1-1%的硫酸軟骨素溶液加入消化液中，再緩慢加入質量比為5%的三氯醋酸，在室溫靜置16-48h；取出上清液，下層混懸液以4000r/min的速度離心5min分離上清液。
17、在胎盤脂多糖制劑中，脂多糖等活性成分在后續的沉淀處理過程中受到化學環境變化（如三氯醋酸的加入導致的ph變化、離子強度改變等）的影響而發生結構改變或失活；硫酸軟骨素可以起到穩定活性成分的作用，它可以通過與脂多糖等成分形成一種相對穩定的復合物，減少活性成分在沉淀處理過程中的暴露和損傷，從而保持其生物活性；脂多糖的結構中含有多糖部分，而硫酸軟骨素也屬于多糖類物質，它們之間存在相互作用，如氫鍵、靜電相互作用等；這種相互作用能夠在一定程度上屏蔽外界不利因素對脂多糖的影響，就像一個保護膜一樣包裹著脂多糖，確保其在復雜的化學處理環境中結構完整。
18、硫酸軟骨素在溶液中具有帶負電荷的特性，其分子結構中包含大量的羧基和硫酸根基團，使其能夠與金屬離子等其他物質結合；在消化液中，硫酸軟骨素可以與未完全消化的蛋白質碎片或其他大分子雜質相互作用，當加入三氯醋酸后，由于其改變了溶液的酸堿度和離子環境，硫酸軟骨素與雜質形成的復合物更容易沉淀；這一過程有助于更有效地分離雜質和目標成分，從而提高上清液中脂多糖的純度；此外，通過三氯醋酸的協同作用，促使雜質沉淀到底層，使得后續離心得到的上清液更加純凈，減少雜質對最終胎盤脂多糖制劑質量的干擾。
19、作為優選，所述緩慢加入三氯醋酸的速度為5-10ml/min。
20、作為優選，所述s1.6中，加入甲醇進行沉淀處理是將甲醇加入到上清液中，使其終濃度達70%，靜置12-15h后，以5000r/min的速度離心5min收集沉淀；向沉淀中加入5-10倍濃度為0.9%的氯化鈉溶液，加熱溶解沉淀，以5000r/min的速度離心5min收集上清液；將收集的上清液中再加入甲醇，使其終濃度達80%，靜置15-20h后，以4000r/min的速度離心5min收集沉淀。
21、作為優選，所述加熱溶解沉淀的加熱溫度為45-50℃。
22、作為優選，所述s1.本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種胎盤脂多糖制劑，其特征在于，包括以下原料：胎盤組織90-95重量份、碳酸鈉1-5重量份、胰蛋白酶0.1-1重量份、亮抑酶肽0.1-0.5重量份、氯仿1-2重量份、硫酸軟骨素0.1-1重量份、三氯醋酸5-10重量份、甲醇70-80重量份、抗壞血酸0.1-1重量份和氯化鈉0.5-1重量份。
2.一種胎盤脂多糖制劑的制備方法，用于制備如權利要求1所述的胎盤脂多糖制劑，其特征在于，所述胎盤脂多糖制劑的制備方法如下：
3.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述S1.3中，對胎盤組織進行堿化處理是按照胎盤組織的重量1：1加入濃度為1%的碳酸鈉溶液，使溶液pH值達到10，混勻后放置12-24h。
4.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述S1.4中，胰蛋白酶消化水解的溫度為37±2℃，在2h內，每隔15-30min用濃度為2mol/L氫氧化鈉溶液調整pH值，使pH值始終保持在9.0±0.2。
5.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述S1.4中，亮抑酶肽溶液的濃度為1
6.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述S1.5中，進行沉淀處理是將濃度為0.1-1%的硫酸軟骨素溶液加入消化液中，再緩慢加入質量比為5%的三氯醋酸，在室溫靜置16-48h；取出上清液，下層混懸液以4000r/min的速度離心5min分離上清液。
7.根據權利要求6所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，緩慢加入三氯醋酸的速度為5-10mL/min。
8.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述S1.6中，加入甲醇進行沉淀處理是將甲醇加入到上清液中，使其終濃度達70%，靜置12-15h后，以5000r/min的速度離心5min收集沉淀；向沉淀中加入5-10倍濃度為0.9%的氯化鈉溶液，加熱溶解沉淀，以5000r/min的速度離心5min收集上清液；將收集的上清液中再加入甲醇，使其終濃度達80%，靜置15-20h后，以4000r/min的速度離心5min收集沉淀。
9.根據權利要求8所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述加熱溶解沉淀的加熱溫度為45-50℃。
10.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述S1.6中，凍干處理是將沉淀先在-40℃條件下維持1h，3h內升溫至1℃保溫3h，再升溫至15℃保溫2h，最后升溫至22℃保溫2h。
...【技術特征摘要】
1.一種胎盤脂多糖制劑，其特征在于，包括以下原料：胎盤組織90-95重量份、碳酸鈉1-5重量份、胰蛋白酶0.1-1重量份、亮抑酶肽0.1-0.5重量份、氯仿1-2重量份、硫酸軟骨素0.1-1重量份、三氯醋酸5-10重量份、甲醇70-80重量份、抗壞血酸0.1-1重量份和氯化鈉0.5-1重量份。
2.一種胎盤脂多糖制劑的制備方法，用于制備如權利要求1所述的胎盤脂多糖制劑，其特征在于，所述胎盤脂多糖制劑的制備方法如下：
3.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述s1.3中，對胎盤組織進行堿化處理是按照胎盤組織的重量1：1加入濃度為1%的碳酸鈉溶液，使溶液ph值達到10，混勻后放置12-24h。
4.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述s1.4中，胰蛋白酶消化水解的溫度為37±2℃，在2h內，每隔15-30min用濃度為2mol/l氫氧化鈉溶液調整ph值，使ph值始終保持在9.0±0.2。
5.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述s1.4中，亮抑酶肽溶液的濃度為1-10mm。
6.根據權利要求2所述的胎盤脂多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述s1.5中，進...
【專利技術屬性】
技術研發人員：唐閃光，黎鳩鳩，曾梅琴，武欣倩，林輝銀，
申請(專利權)人：湖南一格制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。